DNA的粗提取和鉴定

DNA的粗提取和鉴定基础知识】（二）实验基本歩骤（決鸡Ifil为例）悽用溶液具体操作制备鸿血细胞港+柠檬酸钠—沐箱内静墨hif鸡血细胞液（抗凝剂）咸高速离心2min破碎细胞，获収含DX盘的谑港-蒸偶水一►搅拌、过谑一・含DX△谑液*叱几的拌，过谑一含DX△谑液濬液烂梧体SO去除滤港中的VJ析岀k）XA_（JlH^BSDNA）鸡血细胞与植物细胞提取DNA不同点表析藝偶水f搅拌，过滤黏稠物ZmoVLfi^aCl―搅拌、过遽含DX型液*请酒项目鸡血细胞植物细胞破碎细胞释放DNA试剂不同柠檬酸钠藝帼水—定量的洗涤剂和倉盐操作不同静羞（离心）、搅拌和过遽切碎、充分揽拌和研磨、过遽酒精使用量不同滤酒等体积的冷却的体积分伽號的酒措逵浦澹体积的冷却的体积分数95%的潜措静詈工一3min与遽酒等体积的冷去卩的掃拌卷起沖积分数耳临的酒精f器茹檢荣二+询蓄均匀、沸换询犒—►jK^Sminx—>雪密墾冷却后观察色变丘含DXAM白色丝状物还是粘稠物（过遽物），应U的耐受性来判断！序号实验操作收集对象①鸡血细胞加入蒸憾水滤液②加2mol/L的NK1溶隈滤液③加0.14mol/L69NaCl^液黏稠物④等体积的冷却的体积分数茫％的酒精黏稠物⑤蛋白酶黏稠物⑥洗涤剂黏稠物【疑难点拨】1•基本原理：①DNA的溶解性：易溶于蒸馏水和2mol/L的NaCl溶液；难溶于冷却的体积分数95%的酒精和0・14mol/L的NaCl溶液（技巧：溶解就选滤液，难溶就选过滤物）。②DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性：（木瓜）蛋白酶水解蛋白质，对DNA无影响；60--80°C的高温大多数蛋白质变性，DNA保持相对稳定；洗涤剂溶解细胞膜，对DNA无影响。2•鉴定：DNA和二苯胺沸水浴5min,冷却后观察颜色为蓝色。3•鸡血为材料需使用抗凝剂一柠檬酸钠和蒸馏水；植物细胞提取DNA需使用洗涤剂和食盐【试题调研】1•下列有关“DNA的粗提取与鉴定”的叙述，正确的是A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的升高而增大B．DNA对洗涤剂的耐受性差，对高温的耐受性强在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺试剂会被染成蓝色可以选择新鲜的猪血、花椰菜等作为实验材料2•下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是B.②是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质①是洗涤红细胞，去除血细胞表面的杂质C.③溶解DNA，去除不溶于2mol/LNaCl溶液的杂质D.④稀释NaC1溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质3.下表有关“DNA粗提取和鉴定”的相关操作中所选取的试剂，不正确的是相关操作选取的试剂A破碎鸡血细胞蒸馏水B溶解核内DNA2mol/LNaCl溶液C提取杂质较少的DNA冷却的95%的酒精DDNA的鉴定双缩脲试剂4.在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是用蒸馏水将NaC1溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物调节NaC1溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同下列关于“DNA粗提取与鉴定实验”的叙述，正确的是洗涤剂能瓦解细胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度将DNA丝状物放入二苯胺试剂中沸水浴后冷却变蓝常温下菜花匀浆中有些酶类会影响DNA的提取用玻棒缓慢搅拌滤液会导致DNA获得量减少【多选】下列DNA粗提取的实验操作中，经离心或过滤后取上清液或滤液的有在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，混合均匀后离心在盛有血细胞的塑料烧杯中加蒸馏水，快速搅拌后过滤在2mol/L的氯化钠溶液中放入丝状物，轻轻搅拌后过滤在溶有DNA的氯化钠溶液中缓缓加入蒸馏水，轻轻搅拌后过滤某同学以菜花为实验材料，进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，步骤如下：步骤一：称取30g菜花，去梗取花，切碎。步骤二：将碎菜花放入研钵中，倒入10mL研磨液，充分研磨10min。步骤三：在漏斗中垫上滤纸，将菜花研磨液过滤到烧杯中。在冰箱中放置几分钟，取上清液。步骤四：将一倍体积的上清液倒入两倍体积的某溶液中，并用玻璃棒缓缓、轻轻地搅拌溶液。将絮状物缠绕在玻璃棒上。请回答下列问题：请指出并改正该同学实验操作中的错误：。步骤二的目的是使菜花细胞破碎，释放DNA，加入研磨液的主要成分有和等。如要使步骤三所得上清液中杂质减少，可进行操作后再置于冰箱。步骤四中所用两倍体积的某溶液为，需“缓缓、轻轻地”搅拌溶液的原因是酵母细胞的固定化【基础知识】1.酶固定是指将酶固定在颗粒状不溶于水的载体上，优点是既能与反应物接触，又能与反应物分离可重复利用。固定化酶和固定化细胞技术常用的方法：包埋法、化学结合法、物理吸附法。酶个小，容易从包埋材料中漏出，故适宜采用化学结合法、物理吸附法；而细胞个大，难以被吸附或结合，宜采用包埋法（海藻酸钠）。固定化酵母细胞应采用包埋法，反应底物应为小分子（大分子物质难以进入细胞）。海藻酸钠采用小火间断加热融化，冷却后与活化的酵母菌混合，匀速缓慢的滴入CaCl2溶液中。细胞固定化及发酵都在严格无菌条件下完成，发酵现象包括：产生气泡、闻见酒味。游离的酶、固定化酶、固定化细胞的优缺点汇总：（1）游离的酶——优点：催化效率高缺点：易失活；难回收，成本高；酶混合在产物中可能影响产品质量（2）固定化酶——优点：既能与反应物接触，又能与反应物分离；可重复利用缺点:一种酶只能催化一种或一类反应；酶活性可能会下降（3）固定化细胞一点：可催化一系列连续的反应；成本低，操作更容易制备固定化酵母细胞常考 知识点 高中化学知识点免费下载体育概论知识点下载名人传知识点免费下载线性代数知识点汇总下载高中化学知识点免费下载 ：（1）酵母细胞的活化：细胞从休眠状态进入活跃状态；体积变大、防溢出（2）配置海藻酸钠溶液：作为关键步骤，应小火间断加热，否则焦糊（3）海藻酸钠与酵母细胞混合：海藻酸钠先冷却（防止高温使酵母菌死亡），后加酵母菌（4）固定化酵母细胞：操作要领——注射器推挤速度恒定高度适宜（过高引起溶液溅滴，过低不成圆形）；CaCl2溶液作用——起凝固作用，便于凝胶珠形成稳定结构固定化酶和固定化酵母细胞都可以采用包埋法、物理吸附法，化学结合法3种方法。但从固定效果角度考虑，固定化酶最好采用物理吸附法和化学结合法，因为酶分子小，易从包埋材料露出；而固定化细胞最好采用包埋法，因为细胞较大，不易被吸附或结合。根据凝胶珠的颜色和形状可以判断海藻酸钠溶液的浓度高低：海藻酸钠浓度偏低一胶珠颜色过浅、呈白色；固定的酵母细胞较少海藻酸钠浓度偏高——胶珠不是圆形或椭圆形（凝胶珠容易“带尾巴”）实验时部分同学制得的凝胶珠不是圆形，而是椭圆形，其原因可能是：①海藻酸钠浓度过高、②注射器中的溶液推进速度过快、③注射器距离CaCl2溶液液面太近固定化酶只要注意保持酶的活性；而固定化细胞要保持细胞的正常生活。【试题调研】1．右图为某同学进行的澄清苹果汁生产实验，下列相关叙述正确的是—反应柱实验中所用的固定化果胶酶由海藻酸钠直接包埋获得:一囲定化•來胶解为防止杂菌污染，图示装置制作完毕后需瞬间高温灭菌通过控制阀调节苹果汁流出的速率，保证反应充分进行固定化果胶酶不可重复使用，每次生产前需重新装填反应柱2.固定化酵母在发酵生产中得到了广泛应用。下列有关叙述正确的是利用固定化酵母发酵，发酵液浓度不宜过高固定化酵母形成的凝胶珠越大越好，越硬越好固定化的酵母不能繁殖，性状较为稳定酵母固定化的目的是为了提高发酵速度3【.多选】右图为某同学利用海藻酸钠固定化酵母细胞的实验结果出现此结果的可能原因有海藻酸钠浓度过高B.酵母细胞已经死亡注射器中的溶液推进速度过快注射器距离CaCl2溶液液面太近4、下列关于固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是固定化细胞技术在多步连续催化反应方面优势明显固定化酶的应用中，要控制好pH、温度和溶解氧利用固定化酶降解水体中有机磷农药，需提供适宜的营养条件利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物5、下图1为人工种子生产过程示意图，图2为图1中③过程的相关操作，据图分析回答:(1)图1中，①②过程分别称为图2中，包埋形成人工种子过程中，加热溶解海藻酸钠时需注意用加热，然后将溶化好的海藻酸钠溶液后，加入胚状体充分搅拌混合均匀。刚生产的人工种子需要在氯化钙溶液中浸泡一段时间，其目的是使人工种子—__。若用图2的方法“制备固定化酵母细胞”，海藻酸钠的浓度对实验结果影响较大，若浓度过高，则，通常评价该实验结果主要是观察凝胶珠的。(5)制备固定化酶则不宜用此方法，原因叶组织块遡一人工种子——图1图2是.