cas9技术原理简介易懂版

资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除CRISPR/Cas9技术简介1、来源简介2、结构简介3、工作原理简介4、sgRNA克隆步骤（整理归纳网站文献版本）1、来源简介CRISPR/Cas9是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可用来对抗入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas9系统通过将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR中，并利用相应的CRISPRRNAs（crRNAs）来指导同源序列的降解，从而提供免疫性。（文字来源：百度百科）2、结构简介CRISPR/Cas9系统其实分为两个部分：CRISPR和Cas9。其中CRISPR是一段特殊DNA结构的序列，而Cas9为一种核酸酶。1）CRISPR英文全称：Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats，即：规律成簇间隔短回文重复，也就是一种基因编辑器。它是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统，也是一种对付攻击者的基因武器。是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族。其结构如下：其序列由一个前导区(Leader)、多个短而高度保守的重复序列区(Repeat)和多个间隔区(Spacer)组成。前导区一般位于CRISPR簇上游，是富含AT长度为300～500bp的区域，被认为可能是CRISPR簇的启动子序列。重复序列区长度为21～48bp，含有回文序列，可形成发卡结构。重复序列之间被长度为26～72bp的间隔区隔开。Spacer区域由俘获的外源DNA组成，类似免疫记忆，当含有同样序列的外源DNA入侵时，可被细菌机体识别，并进行剪切使之 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达沉默，达到保护自身安全的目的。2）Cas9:通过对CRISPR簇的侧翼序列分析发现，在其附近存在一个多态性家族基因。该家族编码的蛋白质均含有可与核酸发生作用的功能域(具有核酸酶、解旋酶、整合酶和聚合酶等活性)，并且与CRISPR区域共同发挥作用，因此被命名为CRISPR关联基因(CRISPRassociated)，缩写为Cas。目前发现的CRISPR/Cas系统有三种不同类型即I型、II型和III型，它们存在于大约40%已测序的真细菌和90%已测序的古细菌中。其中II型的组成较为简单，以Cas9蛋白以及向导RNA(gRNA)为核心组成，也是目前研究中最深入的类型。Cas9含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA的两条单链，其结构简单认识为：在Cas9的氨基末端有RuvC活性位点，在蛋白中部有HNH活性位点。这两个独特的活性位点在Cas9发挥剪切作用时至关重要。3、工作原理简介当细菌抵御噬菌体等外源DNA入侵时，在前导区的调控下，CRISPR被转录为长的RNA前体(PreRISPRRNA，pre-crRNA)，然后加工成一系列短的含有保守重复序列和间隔区的成熟crRNA，最终识别并结合到与其互补的外源DNA序列上发挥剪切作用。在II型系统中pre-crRNA的加工由Cas家族中的Cas9单独参与。在pre-crRNA转录的同时，与其重复序列互补的反式激活crRNA(Trans-activatingcrRNA，tracrRNA)也转录出来，并且激发Cas9和双链RNA特异性RNaseIII核酸酶对pre-crRNA进行加工。加工成熟后，crRNA、tracrRNA和Cas9组成复合体，其中crRNA与tracrRNA退火形成的复合物能够特异性识别基因组序列，随后复合物通过PAM（ProtospacerAdjacentMotif，结构特征：5’-NGG-3’。CRISPR／Cas9的剪切位点位于crRNA互补序列下游邻近的PAM区（5'-GG-N18-NGG-3'）特征区域中的NGG位点，该位点是实现剪切功能的关键。）序列结合于目的DNA中crRNA互补的序列，然后解开DNA双链，形成R-loop，使crRNA与互补链杂交，形成DNA-RNA复合结构，而另一条链保持游离的单链状态，然后由Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链，RuvC活性位点剪切非互补链，最终引导Cas9核酸内切酶在目的片段生成DNA双链断裂（double-strandbreaks，DSBs）。工作原理简化如下：剪切复合体引发双链断裂（DSBs）后，细胞的非同源末端连接修复机制（NHEJ）重新连接断裂处的基因组DNA，并引入插入或缺失突变。另一种情况是，一个外源双链供体DNA片段可以通过同源重组（HR）整合进断裂处的基因组。如下图：（2）缺乏经营经验4、因此不难看出，自制饰品在校园里也大有市场所在。对于那些走在流行前端的女生来说，〝捕捉〞新事物便〝捕捉〞到了时尚与个性。sgRNA克隆步骤上述识别复合体可以通过融合crRNA与tracr-RNA序列形成sgRNA（single-guideRNA）进行简化。融合的sgRNA具有与野生型RNA类似的活力，通过将sgRNA的元件与表达Cas9的元件连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能对目的基因进行操作。构建高活性的sgRNA也是进行Cas8克隆的关键步骤之一。多个sgRNA克隆与一个Cas9克隆共转染可同时在基因组中编辑多个位点。crRNA与tracr-RNA融合后如下图：9、如果你亲戚朋友送你一件DIY手工艺制品你是否会喜欢？以上内容整合了各网站介绍内容以及个人理解。http://www.loybio.com/biowiki/t3170/精明的商家不失时机地打出“自己的饰品自己做”、“DIY(DoItYourself)饰品、真我个性”的广告，推出“自制饰品”服务，吸引了不少喜欢标新立异、走在潮流前端的年轻女孩，成为上海的时尚消费市场。其市场现状特点具体表现为：http://www.biomart.cn/news/16/133166.htmhttp://www.fulengen.com/product/crispr-cas9/大学生购买力有限，即决定了要求商品能价廉物美，但更注重的还是在购买过程中对精神文化爱好的追求，满足心理需求。http://baike.baidu.com/link?url=3Y0Ho6nmHYSd1AObCd0rLIbY9TXYLPwdR4t94yItw4UUAuwxJwyRe3oQ01VLGqy5bOM-6x_J_YY-bIaNtV5aeq（一）对“漂亮女生”饰品店的分析http://www.biomart.cn/infosupply/20341973.htm（一）创业机会分析参考文献：1.FAnnRan,FengZhangetal.GenomeengineeringusingtheCRISPR-Cas9system.natureprotocols|VOL.8NO.11|2013|2.Mali,P.,L.Yang,etal.(2013)."RNA-guidedhumangenomeengineeringviaCas9."Science339(6121):823-826.3.Cong,L.,F.A.Ran,etal.(2013)."MultiplexgenomeengineeringusingCRISPR/Cassystems."Science339(6121):819-823目前，上海市创业 培训 焊锡培训资料ppt免费下载焊接培训教程 ppt 下载特设培训下载班长管理培训下载培训时间表下载 中心已开办大学生创业培训班，共招收上海交通大学、上海商业职业技术学院等应届毕业生６２人。但这些困难并非能够否定我们创业项目的可行性。盖茨是由一个普通退学学生变成了世界首富，李嘉诚是由一个穷人变成了华人富豪第一人，他们的成功表述一个简单的道理：如果你有能力，你可以从身无分文变成超级富豪；如果你无能，你也可以从超级富豪变成穷光蛋。（二）上海的人口环境对饰品消费的影响学习资料学习资料学习资料