第四章药物定量分析与分析方法验证第二节分析样品的前处理方法第一节定量分析方法第三节药品分析方法验证练习与思考基本要求一、掌握定量分析方法及验证的效能指标。二、熟悉定量分析方法的特点三、熟悉样品的前处理方法。四、了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分析中的应用。重量分析法容量分析法光谱分析法色谱分析法第一节定量分析方法一、重量分析法生成的沉淀而进行分析的方法生成沉淀→滤过→洗涤→灼烧→恒重。特点：1、操作繁琐2、结果准确很少用（一）容量分析法的特点操作简单、快速；比较准确（相对误差＜0.2%）；仪器普通易得常用于测定高含量或中含量组分，原料药含量测定首选二、容量分析法（二）容量分析法的计算问题1.滴定度（T）：每1ml
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浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)2.滴定度的计算aA（待测物）+bB（滴定液）cC+dDabT/M1·mT=m×a/b×Mm：滴定液浓度(mol/L)M：被测物分子量WA=T×VB3.百分含量的计算（1）直接滴定法W：供试品取样量设至终点时，消耗滴定液体积为Vml则药物实测质量为V·T浓度校正因数（2）间接滴定法1）生成物滴定法（略）药物+A→B滴定2）剩余滴定法（回滴法）药物+A（定、过量）→················剩余的A+B→·······（回滴）······V空白试验···········································V0滴定剂（3）以相当于标示量%表示光谱光谱分析法分光光度法分类紫外-可见分光光度法红外分光光度法原子吸收分光光度法荧光分光光度法三、光谱分析法三、光谱分析法（一）紫外-可见分光光度法吸收光谱范围：紫外：200～400nm可见：400～760nm灵敏度高，可达10-4g/ml～10-7g/ml1.特点准确度高，RE（%）为2%～5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用广泛2.朗伯-比耳定律A=ECL吸收系数：摩尔吸收系数ε——研究分子结构百分吸收系数Ｅ——含量测定3.测定方法要求供试品溶液的A应在0.3～0.71）对照品比较法：A供／A对＝C供／C对制剂：原料药：AX／AR＝WX／WR2）吸收系数法：注意：应>100应注意仪器的校正和检定：作为计算浓度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随仪器不同而变化，误差较大。但若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合Lambert－Beer定律。3）计算分光光度法：多种，具体按每种药物规定的方法进行如：VA的三点校正法4）比色法加入显色剂后，按照对照品比较法测定影响显色因素很多，故需注意平行操作空白溶剂：溶剂+显色剂，同法处理（二）荧光分析法灵敏度高，可达10-10g/ml～10-12g/ml在低浓度进行测定，防止自熄灭作用1.特点用基准溶液校正仪器灵敏度制备荧光衍生物，可提高灵敏度和选择性干扰因素多，需做空白实验样品用量少，操作简单，应用范围较广2.含量测定原理：当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其荧光强度R与该物质浓度C成正比方法：对照品比较法计算：根据混合物中各组分的色谱行为差异，先行分离后再在线或离线对各组分逐一进行分析的方法，是分离分析混合物的最有力手段。按分离原理：吸附；分配；离子交换；排阻色谱分类按分离方法：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC特点：高灵敏度、高效能、高速度、应用广泛四、色谱分析法1.对仪器一般要求固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变其他均可适当改变色谱图20分钟内记录完毕2.系统适用性试验色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2分离度：R=2（tR1–tR2)/(W1+W2);应大于1.5重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％拖尾因子：T=W0.05h/2d1应在0.9～1.05（一）HPLC法流动相真空脱气机四元泵自动进样器紫外检测器荧光检测器蒸发光散射检测器液质联用仪质谱检测器流动相：对于以C18为固定相的反相色谱系统，常用甲醇-水，间或加以乙腈、缓冲液等为流动相，有机溶剂比例通常不低于5％四元泵自动进样器色谱柱填充剂常用：十八烷基硅烷键合硅胶检测器测定方法1)内标法加校正因子测定供试品中主成分含量对照液（R）：ARCR峰面积含量内标液（S）：ASCS供试液（X）：AXCXf=————AS/CSAR/CRf=————A’S/C’SAx/CxCx=f·————AxA’S/C’S例2)外标法测定供试品中主成分含量对照液（R）：ARCR供试液（X）：AXCXCXCRAXAR——＝——CX＝————CR·AXAR要求：进样量准确、操作条件稳定（二）GC法1.对GC仪器一般要求载气：氮气色谱柱：填充柱或毛细管柱填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂高分子多孔小球或涂渍固定液的载体毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，一般为空心柱，内壁或载体经涂渍或交联固定液检测器：氢火焰离子化检测器色谱图：30分钟内记录完毕2.色谱适用性实验：同HPLC3.测定法：同HPLC
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