自动细胞计数仪选购指南(一)自动细胞计数仪选购指南——通用篇除非你像猴哥那般火眼金睛,否则,利用血球计数板来数细胞绝对是一件痛苦的事情。浪费时间不说,关键是不准确,重复性也不好。若是有多个样本,那真是让人发疯。这时,自动细胞计数仪应运而生,带来了更高效更准确的细胞计数。市场上有多个品牌的细胞计数仪,乍一看,好像都是经典三步曲:上样-插入-分析。如何选择一台最理想的细胞计数仪,让你只选对的,不选贵的。首先,想一想平时主要对哪些细胞计数,它们的大小在什么范围;其次,你需要什么样的细胞信息以及通量水平;你们实验室打算将多大一块地方奉献给细胞计数仪;最后,你打算花多少钱。市场上大部分细胞计数仪都是基于染料,以台盼蓝为主,也有碘化丙啶(PI)。正常的健康细胞能够排斥台盼蓝,而当细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与DNA结合,使其着色,从而区分出活细胞和死细胞。有些细胞计数仪是基于电阻抗法,更简便,不需要使用台盼蓝染料,但也无法分辨活细胞与死细胞。首先为你介绍两款热门的细胞计数仪。之后,还将介绍一些便携式的细胞计数仪和高通量的仪器,囊括了市场上近期推出的大部分细胞计数仪。我们将提供详细的参数对比和特性介绍,以便您在选购仪器时能够方便地参考。TC10自动细胞计数仪(Bio-Rad)这款细胞计数仪是由Bio-Rad公司去年推出的。它的计数
流程
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很简单,就是“上样-插入-结果”。首先将样品上样到计数玻片上,然后将玻片插入TC10细胞计数仪,计数自动开始,30秒内总细胞数和活细胞数就显示在屏幕上。仪器对细胞浓度的要求为5x104-1x107细胞/ml。计数只需要10μl悬浮或重悬的细胞,让珍贵样品得以保留。玻片上有两个室,每次能对2个样品进行计数。有些细胞计数仪通过单个焦点平面来评估细胞活力,这样得到的结论可能不太准确,而TC10细胞计数仪对多个平面的每个样品进行打分。独特的自动对焦技术和图像分析算法在30秒内提供了准确且重复性高的细胞数量。Bio-Rad的产品经理认为这对于评估细胞活性尤为重要,因为焦点的差异可能显著影响结果。TC10系统所能接受的细胞大小是6-50μm,适合哺乳动物细胞及一些更小的生物,如浮游生物和孢子等。若你正在使用Bio-Rad的Bio-Plex系统,那么还可以利用TC10对Bio-Plex的磁珠进行计数。TC10能够提供下列结果:活细胞和死细胞浓度,总细胞浓度,细胞存活率,细胞的平均大小,细胞图像。通过USB接口,研究人员能导出带注释的JPEG图像文件,用于进一步的分析,或下载计数的数据。当然,结果也能够打印出来。当然,光是一台仪器还不够,你还需要耗材和相关配件。TC10的耗材有TC10计数玻片、TC10台盼蓝、TC10系统验证试剂盒,另外,你还可以选择TC10热敏打印机。据Bio-Rad介绍,TC10计数玻片也是很独特的,无论用户的移液习惯如何,它都能让样品均匀分布,带来准确重复的结果。这一点很重要,试想一下,如果有的地方没有样品,那么就会影响计数准确性。Countess自动细胞计数仪(LifeTechnologies)2008年,LifeTechnologies(当时还是Invitrogen)推出了这款细胞计数仪。它的基本参数与TC10大致相同,也是利用台盼蓝染色和图像分析算法,在30秒内给出准确的细胞和活性计数。每次的样本量也是2个,每次需要10ul,只是可分辨的细胞大小略有不同,在5-60um。细胞浓度范围应在1×104-1×7细胞/ml,最好在101×105-4×106细胞/ml。据LifeTechnologies介绍,Countess细胞计数仪的一个独特之处在于其gating功能,能够根据细胞大小分辨混合群体中的细胞。在对某一混合群体计数后,用户随后可保存特定的参数组,以便未来计数。此特征对于干细胞或原代细胞特别有用,让用户能够排除细胞碎片和滋养层细胞。有时,细胞会成团,使得细胞数量被低估,或细胞大小被高估,Countess细胞计数仪能够准确分辨最多5-6个细胞的细胞团。至于仪器的清洁和维护,也非常简单。Countess计数仪已经预先校准过了。如果你升级了仪器的固件,就需要校准。另外,如果你换用另一个牌子的台盼蓝或台盼蓝浓度与以前不同,那也应该重新校准。校准只需要2-3分钟即可。除此之外,就没有必要校准了。点评:这两款自动细胞计数仪在参数上不相伯仲,只有细胞大小方面的微小差异。TC10的特别之处在于多平面对焦分析,而Countess则有gating功能。现在唯一未知的就是价格了,用户可根据报价再做打算。TC10AutomatedCell名称CountessCellCounterCounter制造商Bio-RadLifeTechnologies细胞浓度5x104-1x107细胞/ml1×104-1×107细胞/ml细胞直径6-50μm5-60um样品体积10ul10ul分析时间30秒30秒活细胞和死细胞浓度,总细活细胞和死细胞浓度,总细胞分析参数胞浓度,细胞存活率,细胞浓度,细胞存活率,细胞的平的平均大小,细胞图像均大小,细胞图像通量22染料台盼蓝台盼蓝TC10计数玻片、TC10台盼Countess?CellCounting附件蓝、TC10热敏打印机、TC10ChamberSlides、台盼蓝系统验证试剂盒独特之处MultifocalPlaneAnalysisgatingfunction尺寸19×15×25.4cm27×20×19cm(宽×深×高)重量2.2kg2.1kg本参数表是根据厂家资料整理,仅供参考。(二)自动细胞计数器选购指南——便携篇也许,你想要把细胞计数仪带到超净工作台里面去。这时,便携式细胞计数器可能更合你心意。这两款仪器都采用了电阻抗法细胞计数原理,无需台盼蓝染料。Scepter手持式细胞计数器(默克密理博)默克密理博公司在去年3月推出了Scepter手持式细胞计数器,这也是目前市场上唯一一款手持式的自动细胞计数器。一年后,Scepter升级到2.0版,性能进一步提升。Scepter的外形看上去像一只移液器,但在顶部有一个显示屏,能指导用户进行细胞计数。操作者只需轻轻一按,细胞就可被自动吸入计数,结果以图形的形式显示细胞的直径和体积,提供细胞密度和细胞群分布数据,为掌控细胞健康状况提供了便捷的量化手段,整个过程在40秒以内。Scepter采用了电阻抗法细胞计数工作原理(又名库尔特原理),该核心技术借助精细的微电路
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
得以集中体现在Sensor里。将Sensor插进等渗电解质溶液稀释的细胞悬液中,Sensor内微电路中小孔管两侧的内外电极在接通电源后产生稳定电流,稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管向小孔管内侧流动,使小孔感应区内电阻增高,引起瞬间电压变化形成脉冲信号,脉冲振幅越高,细胞体积越大,脉冲数量越多,细胞数量越多,由此得出细胞数量和体积值,细胞直径从细胞体积推导而得。所以Scepter可以监测细胞数量,细胞体积和直径大小。当然,由于采用的是电阻抗法,通过小孔的任何颗粒都会被计数,这时,不论是活细胞、死细胞,还是细胞碎片,都会被计算在内。你可以根据需要设置取值上下限,从而排除细胞碎片。但是,活细胞和死细胞就没办法精确地区分,你只能根据曲线的变化来比较不同培养批次的细胞形态。目前Scepter手持式细胞计数器可使用两种sensor:40μm和μm。如果你要计数的细胞比较小,可以选前者,反之选后者。具体的参数详见下表。这些sensor是一次性的,需要持续购进。Moxi?Z迷你细胞计数器(ORFLO)这款迷你的细胞计数仪是由美国ORFLOTechnologies公司开发的。虽然该公司名不见经传,但它也是上面那款仪器的开发商。因此,这两款仪器在原理上大致相同,都是利用库尔特原理,不过,大小形状不同,使用耗材不同,软件也有所不同。MoxiZ在计数时使用一种小巧的cassette,每个cassette能容纳2个样品。独特的设计让样品从两端上样。在cassette插入时,仪器的“智能技术”能自动检测,并检测此cassette是全新的还是用过的。对于所有样品,均使用相同的cassette。每次测量仅需8秒,仪器就能带来细胞大小、细胞数量等参数。ORFLO还开发出一种专利的算法,能计算出活细胞/死细胞的比例MoxiViabilityIndex),它与公认的染料法有着很好的相关性。MoxiZ能够对直径2-34μm的细胞进行计数,适用于哺乳动物细胞、血小板、酵母及其他。由于检测下限为2μm,也就避免了漏掉一些细胞的风险。每次测量需要75μl样品,其中细胞浓度范围在3,000-500,000个细胞/ml。测量完之后,显示屏显示如下。图中不仅包括了细胞数量和平均大小,还有完整的直方图,反映样品中细胞大小的分布。通过直方图的比较,您可以轻松发现细胞培养间的细胞变化。仪器本身可储存500个样品的数据。此外,所有数据也可通过USB接口或蓝牙传输到电脑中。MoxiZ在美国的目录价大约是3000美元,相对于Countess的万多来说是便宜得多。点评:就便携性而言,Scepter取胜,移液器般的设计,小巧轻便,但其劣势在于细胞浓度的下限较高,且不能分辨活细胞和死细胞。MoxiZ适用的细胞浓度范围更广,也能提供活细胞/死细胞的比例。然而,就仪器而言,售后也是相当重要的,我们还要考虑售后服务的便利性。名称Scepter手持式细胞计数器MoxiZ迷你细胞计数器制造商默克密理博ORFLO细胞浓度50,000–1,500,000cells/mL3,000-500,000cells/ml(40μmsensor)10,000–500,000cells/mL(60μmsensor)细胞直径3–18μm(40μmsensor)2-34μm6–36μm(60μmsensor)样品体积50μl75μl分析时间<40秒(40μmsensor)8秒<60秒(60μmsensor)分析参数细胞数量,细胞体积和直径大细胞数量,细胞体积,直小径大小,活细胞/死细胞的比例通量12染料无需无需附件ScepterSensors40μm/60Moxicassetteμm尺寸长:29cm;宽:5.5cm~19×10.8×7cm(长×宽×高)重量229.5g~0.65kg本参数表是根据厂家资料整理,仅供参考。(三)自动细胞计数器选购指南——高通量篇对于一些专门从事细胞研究的大型实验室来说,高通量细胞计数仪也许更为实用。而且,除了通量高之外,今天介绍的这几款仪器也能提供更多的分析参数,为您带来更全面的分析结果。CedexXSAnzlyzer(罗氏)1999年,Innovatis公司制造出全球第一台自动化细胞计数仪。年来,它一直致力于细胞计数、分析、细胞质量控制的相关技术研发和仪器生产,是国际著名的细胞计数分析仪生产厂商。罗氏应用科学部于2009年成功收购Innovatis,将其众多特色产品收归旗下。CedexXS细胞计数分析仪是一款半自动化的细胞计数系统。它采用手动的样品制备过程,大大降低系统的运行和维护成本。同时体积小巧,节省实验室的空间。CedexXS所需的样品量极少,只需5ul样品+5ul台盼蓝,比其它平台更能节省宝贵的样品。这款细胞计数仪的检测范围非常大,达2-180um,覆盖了所有哺乳动物细胞、植物细胞、血细胞、酵母和藻类等。这一点恐怕是其他仪器都望尘莫及的。每个样本的检测时间为20秒,一次最多可检测8个样本。此外,仪器采用2592x1944的高分辨率CCD,获取更高分辨率图像,确保了后续分析结果的高精确度。除了可获得细胞浓度/数量/活力等基本信息外,它还可进行多种参数统计和分析,包括细胞直径分布、细胞圆度分析、细胞结团分析、细胞结团与细胞活力、细胞增值曲线、细胞活力动态变化曲线以及细胞浓度动态变化曲线等。CedexXS细胞计数仪还具有独特的Liveoperator功能,可根据图像获取信息,随时调整图像分析参数设置,获取最佳分析结果,无需重复检测。Cytorecon全自动细胞计数分析仪(GEHealthcare)通用电气(GEHealthcare)代理的这一款Cytorecon全自动细胞计数分析仪采用了高分辨率的CCD成像技术及自动软件分析功能,可以快速完成包括贴壁细胞、悬浮细胞、白细胞、培养细胞、酵母细胞等细胞样品的计数和浓度计算,结合台盼蓝染色技术,还可以快速完成细胞存活率的分析。除了细胞样品以外,它还支持一些细菌和微生物样品的浓度计算。就通量而言,Cytorecon无疑是相当高的。它采用了20孔的特制样品盘设计,只需要用移液枪在样品盘上点上样品,即可完成细胞计数和浓度计算。而且样品需要量非常少,只需要11ul,即使是非常珍贵的样品也不用担心浪费啦。另外,在手工进行细胞计数时,大部分细胞需要先稀释再计数。现在有了Cytorecon,即使细胞浓度超过个/ml,也无需稀释就能完成浓度分析。它内置了多种细胞分析模型,能准确测定附着在一起的细胞。仪器可连续对20个样品进行拍摄和计数。每个样品拍摄6个视野,并自动计算细胞总数和细胞浓度。样品盘每个孔均为一次性使用,避免样品交叉污染,也避免传统细胞计数仪器的进样针会堵塞的麻烦,无需清洗和维护。便携的样品盘也易于长期保存,样品少时可以分多次使用,一方面提高了灵活性,而另一方面也大大降低了成本。Cytorecon内置了方便上手的控制分析软件,通过简单的参数设置就可以设定拍摄的样品数量,以及完成细胞的计数、浓度计算和活力分析。有了如此方便的帮手,相信细胞计数将会变得无比轻松,您再也无需枯燥地对着显微镜,以损耗视力作为代价一个一个进行细胞计数了。Vi-CELLXR(贝克曼库尔特)贝克曼库尔特的细胞活力分析仪——Vi-CELL系列应用目前广泛认可的台盼蓝染料排斥法的原理,结合先进的CCD成像技术,几分钟就能完成细胞计数,并得到具有统计学意义的更多参数。在使用Vi-CELLXR时,您只需加入0.5ml左右样品到试管,放进试管槽即可,加样时不必绝对准确,仪器会自动准确无误地完成取样过程。样品的取样、染色自动完成,不再依赖人手,避免人为误差。若配合12位的全自动的样品输送器,只须将测试的样品试管放入槽内,仪器即可自动依次将样品管连续旋转输送至工作位置,开始分析。你可以去休息一下,或处理更重要的事情,直到样品分析完毕。Vi-CELL还可以与培养箱或生物反应器配合,实时监测细胞培养过程。以往你要人工观察细胞的反应过程,人手收集大量的原始数据,分类、整理、保存、提取、比较等等都要花去许多宝贵的时间。费时费力,而且容易出错。Vi-CELL不但能实时监测细胞的状态,还能记录和储存整个生物反应过程的所有数据,并自动描绘生物周期的生长曲线。通过Vi-CELL简单的软件操作界面,你可以随时调出任意时刻的相关数据和图像,如生长速度、倍增时间、存活率、存活细胞浓度、存活细胞的直径分布等。Vi-CELLXR检测细胞的下限从原来的5微米降到2微米,可以分析酵母或者更小的细胞。与Vi-CELLS和Vi-CELLAS相比,在很多功能上都有所改进:具有自动对焦功能,使用更方便;图像放大6.75倍,你可了解所关心的某一图像的细节之处;环状测量使细胞碎片分离;取样和混匀的过程不再是固定的,可以调节,因为有些细胞系比较脆弱,而有些又很粘稠,这种因细胞而异的做法能改善分析的结果。点评:就一般的实验室应用而言,CedexXS更值得推荐,细胞范围广,样品量少,分析参数多,CCD分辨率高,虽说样品制备须手动进行,但也降低了运行和维护的成本。若是需要真正的高通量自动化分析,Vi-CELL则是不错的选择。名称CedexXSCytoReconVi-CELLXR制造商RocheGEBeckmanCoulter细胞浓度未知5×105-2×106细胞/ml5×104-1×107细胞/ml细胞直径2-180um2-60um2-70um样品体积10ul11ul0.5ml分析时间20秒10秒(成像时间)2.5min分析参数细胞浓度、细胞数活细胞数目,活细胞细胞存活率、总细胞量、细胞活力、细胞的浓度,死细胞的数数、存活细胞数、总直径分布、细胞圆度目,死细胞的浓度,细胞浓度、存活细胞分析、细胞结团分总细胞的浓度,细胞浓度、细胞的直径及析、细胞结团与细胞存活率,总细胞数目分布、细胞的平均直活力、细胞增殖曲径、细胞圆度及分线、细胞活力动态变布、细胞平均圆度、化曲线、细胞浓度动细胞的生长速度、细态变化曲线胞倍增时间、细胞生长曲线通量82012染料台盼蓝台盼蓝台盼蓝CCD分辨率2592x19441280×10241394×1040本参数表是根据厂家资料整理,仅供参考。