原代细胞的培养与建系
概述：原代细胞若能稳定生长传至10-20代以上可确立为细胞系。
第一、原代细胞的取材
一、取材的基本要求
（1）新鲜和保鲜：4-6h内制作成细胞，若不能即使培养，应浸泡于培养液内，于4℃存放。
较大组织块应清洁切碎于4℃培养液存放，时间不超过24h。
冻存：加入10%二甲基亚砜培养液按细胞冻存方式于液氨中冻存。
（2）无菌：用无菌器皿带少许培养液（内含400u/mL抗生素）小瓶取材，在高浓度抗生素（400u/mL）甚至加入适量两性霉素B或10%达克宁液的培养液内于4℃以下存放2h以上，再用PBS洗2-3次。
（3）防止细胞机械损伤（应用锋利器械切割组织），避免干燥，注意分类。
二、各类组织取材技术
第二、原代细胞的分离和制作
一、实体组织材料的分离方法
可采取机械分散法和消化分离法
1.机械分散法
适用于纤维成分很少组织。可用剪刀剪切，吸管吹打、放在9号针注射器内使细胞通过针头压出，在不锈钢纱网内用钝物压挤。快捷但损伤大。
2.消化分离法
先剪切成小块，再用酶的生化和非酶的化学作用消化，再用吸管吹打或电磁搅拌或在摇珠瓶中震荡，成细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
（1）酶消化分离法
胰蛋白酶分散技术：主要用于赖氨酸或精氨酸相连接的肽键。细胞类型：适用于消化细胞间质少的软组织，能有效分离肝、肾、甲状腺、羊膜、胚胎组织、上皮组织等。一般采用的浓度为0.1%-0.25%（活力1：200或1：250），遇到难消化组织时可提高浓度。常用温度：37℃，消化分离细胞常用PH：7.6-8.0。采用无钙镁离子的PBS配置，消化时间20min为宜。分离方法有过夜冷消化、
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