HPLC法测定白芷提取挥发油前后欧前胡素含量

实用中医药杂志 2004年8月第20卷8期(总第139期) JOURNALOFPRACTICALTRADITIONALCHINESEMEDICINE2004Vo．1．2Q塑壁：墨 HPLC法测定白芷提取挥发油前后欧前胡素含量 刘 萍 (广州市第一人民医院，广东广州510180) [中图分类号-]R284．2[文献标识码]AE3t章编号]1004—2814(2004)8一0470—01 [摘 要] 用高效液相法测定了不同方法提取挥发J油后白芷中欧前胡素含量，结果表明白芷提取挥发油后欧前胡素损 失较大。 [关键词] 白芷，欧前胡素；挥发油}高效液相色谱法 白芷为伞形科植物白芷Angelicadahurica． (Fiseh．exHoffm)Benth．etHook．f或杭白芷 Angelicadahurica．(Fisch．exHoffro)Benth．etHook．f． vat．formosana(Boiss．)ShanetYklan的干燥根。白芷中 主要成分为香豆素类成分和挥发油[1]，其中香豆素主 要为小分子的欧前胡素和异欧前胡索，受热不稳定，欧 前胡索易于发生Claisen烯丙基重排，生成别欧前胡 素。即使在真空中加热也会引起这样的变化D1。而以含 白芷的组方制备制剂的工艺中，一般都先提挥发油，然 后提香豆素类成分。笔者用高效液相法测定白芷中欧 前胡素含量，并测定了白芷用不同方法提取挥发油前 后欧前胡素的含量，以考察提取挥发油对欧前胡素含 量的影响。 1 材料 仪器：日本岛津LC一6A高效液相色谱仪，SPD一 6AV紫外检测器，SCL一6A系统控制器，CTO一6A恒 温箱，LC2000色谱数据工作站。 材料：白芷购于广州药材站，经鉴定为 Angencadahurica．(Fisch．exHoffm)Benth．etHook．f 的干燥根。欧前胡素对照品为中国药品生物制品检定 所提供，试剂为流动相甲醇为高效液相色谱纸，水为重 蒸馏水，其余为分析纯。 2方 法 色谱条件：天津特纳公司ODS色谱柱(150mm× 4．6ram，59m)，流动相、甲0．05％磷酸(70：30)，流速 0．81ml／min，紫外检测波长254nm，色谱柱温35℃，检 测灵敏度0．01AUFS。线形范围的考察：精密吸收欧前 胡素对照品溶液(O．025mg／m1)2．5、5、7．5、10、12．5、 15t*l进样， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图，测定其峰面积，以峰面积值 (A)对迸样量(pg)进行回归，得 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线方程。A一 3095500C+1872．10，r一0．9999。结果表明欧前胡素进 行量在0．0625～0．375ttg范围内线性良好。 样品前处理方法：取白芷药材粉碎，取过3号筛粉 末19，加甲醇50ml，超声45min，过滤，水浴挥干，用甲 醇溶解残渣，转移至10ml量瓶，甲醇定容至刻度。 精密度试验：分别吸取欧前胡素对照品溶液，重复 进样5次，每次10ttl。测定结果表明该方法精密度良 好，见表1。 表1 欧前胡索对照品精密度试验结果 塑兰 ! ! ! ! ! !竺堑 竺堕璺 !坠!!! !!!坚! !!!塑! !!!塑! !!!!塑 !：!! 稳定性试验：精密吸收欧前胡素对照品溶液、样品 溶液照上述色谱条件在不同的时间测定蜂面积，结果 [收稿日期]2004一05—24 ·470· 表明欧前胡素对照品、样品在48h内稳定，见表2、表 3。 表2欧前胡素对照品稳定性试验结果 重现性试验：按拟定的含量测定方法，制备样品5 份，进行含量测定。结果表明本法具有较好的重现性， 见表4。 表4药材中欧前胡素含量重现性试验结果 塑呈 ! ! ! ! ! 垦婴堑 含量(％)0．0810．080 0．082 0．083 0．081 1．40 回收率试验：精密称取药材(已知含量)过3号筛 粉末适量，分别精密加入欧前胡素对照品溶液适量(3 种不同浓度水平，各2份)，按2．3样品前处理方法提 取和测定，取6次测定的平均值计算回收率。平均回收 率101．83％，表明回收率好，本方法可行。 挥发油提取方法：①共水蒸馏：白芷饮片加6倍量 水浸泡过夜，共水蒸馏至挥发油量不再增加。②隔水蒸 馏：白芷饮片加6倍量水浸泡过夜，把水滤出，隔水蒸 馏至挥发油量不再增加。③通水蒸汽蒸馏：白芷饮片加 水浸泡过夜，通水蒸汽蒸馏至挥发油量不再增加。 样品测定：提油后药渣低温烘干，按2．3样品前处 理方法提取和测定，见表5。 ． 表5含量测定结果(n一3) 3讨 论 本实验在样品前处理上对不同溶媒(甲醇、95％乙 醇、乙醚)、不同的提取方法(超声、回流)及不同提取时 间进行了考察，结果表明，采用甲醇超声45min欧前胡 素的提取率较高。 表5的测定结果表明，尽管采取不同的挥发油提 取方法，白芷经提取挥发油后，欧前胡素含量损失均高 达40％以上，可能是由于长时间的受热，使欧前胡素 被破坏，含量降低。可见含白芷的组方制备制剂时，先 提挥发油，然后提香豆素类成分的工艺值得商榷。 [参考文献] [1]张富强．自芷的华学与药理研究进展EJ3．南京中 医药大学学报(自然科学版)，2002，18(3)：190． [2]姚新生．天然药物化学[M]．北京：人民卫生出版 社，1997．132． 万方数据 HPLC法测定白芷提取挥发油前后欧前胡素含量 作者： 刘萍 作者单位： 广州市第一人民医院,广东,广州,510180 刊名： 实用中医药杂志 英文刊名： JOURNAL OF PRACTICAL TRADITIONAL CHINESE MEDICINE 年，卷(期)： 2004，20(8) 被引用次数： 9次 参考文献(2条) 1.张富强 白芷的华学与药理研究进展[期刊 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 ]-南京中医药大学学报(自然科学版) 2002(03) 2.姚新生 天然药物化学 1997 相似文献(10条) 1.期刊论文 胡华杰.楼招欢.吕圭源.陈素红 HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量 -浙江中 医药大学学报2010,34(3) [目的]采用HPLC法测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量.[方法]色谱柱:XB-C18分析柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相:乙腈-水,梯度 洗脱,流速为1.0mL·min-1.[结果]欧前胡素在0.0552～0.276μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.5%,RSD为1.3%;异欧前胡素在 0.048～0.24μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.6%,RSD为1.7%.不同产地的白芷饮片中欧前胡素含量在0.046%～0.145%之间,异欧前胡素在 0.038%～0.087%之间,两者之和在0.084%～0.232%之间.安徽产最低,浙江杭州产最高.[结论]不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量存在差异 .含量测定方法准确、快速、重复性好,适用于白芷及其制剂的质量控制. 2.期刊论文 高颖.马逾英.钟世红.郭丁丁.邹文莉 川白芷中欧前胡素含量测定方法的比较 -成都中医药大学学报 2006,29(4) 目的:比较川白芷中欧前胡素的含量测定方法.方法:分别用<中国药典>2005年版白芷项下欧前胡素的HPLC测定方法及川白芷 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 化种植(GAP)课题组 建立的川白芷中三种香豆素成分的HPLC测定方法对六批川白芷药材中欧前胡素进行了含量测定.结果:药典方法中供试品溶液的制备方法更加简单、快速 ,且提取效率高.川白芷GAP课题组建立的方法可同时测定三种主要香豆素类成分的含量.结论:两种方法均可用于白芷药材的检验和质量控制. 3.学位论文 邓捷圆 白芷质量评价方法及欧前胡素在大鼠体内的药物动力学研究 2004 白芷为一常用中药材,具有镇痛、抗炎的功效,欧前胡素为其活性成分之一.该文运用HPLC法,对中药材白芷质量评价方法及其活性单体欧前胡素在大 鼠体内的药物动力学行为进行了研究.一、白芷质量评价方法的研究白芷药材中2种香豆素的含量测定采用HPLC法同时测定了25个不同产地白芷中欧前胡 素和异欧前胡素2种香豆素的含量.结果显示,欧前胡素在5~50 μg·mL<'-1>(r=0.999 9),异欧前胡素在2~20 μg·mL<'-1>(r=0.999 8)范围内线性关系 良好,平均回收率分别为98.4％,96.3％,RSD分别为1.2％,1.7％.2种香豆素含量的测定,为评价不同产地白芷的质量提供了定量依据.白芷药材HPLC指纹图 谱的研究运用HPLC法,对收集的25个白芷样品的95％乙醇提取液进行指纹图谱分析:采用ULTRON VX-ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水- 冰醋酸(60:40:1,v/v/v),流速0.8 mL·min<'-1>,检测波长254 nm.以欧前胡素峰为参照峰,计算不同产地白芷样品指纹图谱中各共有峰的相对峰面积,将 该数据作为原始数据,用系统聚类分析,将白芷样品分为2类:合格品和劣质品.二、欧前胡素在大鼠体内的药物动力学研究大鼠血浆样品经液-液提取后进 行HPLC分析,以乙腈-水(65:35,v/v)为流动相,流速1.0 mL·min<'-1>,检测波长300 nm,异欧前胡素为内标,经ULTRON VX-ODS柱(250 mm×4.6 mm)分离.比 较灌胃和静脉给药后大鼠血浆中欧前胡素的AUC<,0-∞>/D(D:给药剂量),可知大鼠灌胃给予欧前胡素后的绝对生物利用度约为16.2％.该方法简便、快速 ,可用于欧前胡素临床前的药代动力学研究. 4.期刊论文 姜雪.王萍.王洋.阎秀峰.JIANG Xue.WANG Ping.WANG Yang.YAN Xiu-Feng 兴安白芷种子欧前胡素含量 的HPLC分析及不同产地的含量测定 -林产化学与工业2008,28(3) 用高效液相色谱法测定兴安白芷种子中欧前胡素含量.利用均匀 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 试验筛选了分析样品的制备方法,确定的最佳提取条件为:以78%乙醇为溶剂在 20℃下超声波辅助提取22min,欧前胡素得率0.698%.测定了不同产地兴安白芷种子中欧前胡素的含量,绥阳地区兴安白芷种子中的欧前胡素质量分数最高 ,达到1.722%;其次为虎林和海林所产,分别为1.519%和1.031%,大兴安岭地区质量分数最低,为0.698%. 5.期刊论文 刘文.韩笑.王学勇 超临界CO2萃取白芷中欧前胡素的研究 -中国药学杂志2003,38(2) 目的研究超临界流体CO2萃取白芷中欧前胡素的提取工艺,并用高效液相色谱法测定欧前胡素的含量.方法在Inertsil ODS-3柱上,以甲醇-水 (65∶35)为流动相,流速:1.5 mL*min-1,检测波长:248 nm,柱温:40℃.结果欧前胡素浓度在0.0415～0.166 mg*mL-1范围内呈线性关系(r=0.999 8);加样 平均回收率:99.12%,RSD为2.73%.结论采用SFE萃取白芷中欧前胡素的提取工艺速度快,HPLC测定欧前胡素的含量精确、重现性好. 6.期刊论文 张丽英.任艳春.仲昭庆.刘璐 白芷中欧前胡素的含量测定 -中医药信息2002,19(4) 目的:研究白芷含量的测定方法.方法:采用薄层扫描法测定白芷中欧前胡素的含量.结果:测得每1g中欧前胡素的含量为0.86mg,平均回收率为 97.92%,RSD=2.46%(n=6).结论:实验方法稳定,重现性好,可用于测定药材白芷中欧前胡素的含量. 7.学位论文 高晶 白芷中香豆素类有效成分的提取精制及光敏作用研究 2007 白芷中的香豆素类成分主要有八种，包括：欧前胡素、异欧前胡素、异氧化前胡内酯、白当归素、白当归醚、别异欧前胡素、佛手柑内酯、花椒毒 酚。为了考察白芷中香豆素的光敏作用，选取了白芷中香豆素的一种主要成分欧前胡素进行研究实验结果指出，欧前胡素在紫外光照下会与蛋白质发生 反应，生成新物质，其光照引起蛋白质变性的可能机制是光照诱导欧前胡素活性增加使其与蛋白质中的酸性基团发生反应，导致蛋白质结构的改变，从 而引起脱皮的现象；由于蛋白质结构复杂，要十分清楚解释其机理有一定的困难，而蛋白质是由氨基酸组成的，因而使用氨基酸进行研究。通过欧前胡 素与不同氨基酸进行光照实验可以知道，欧前胡素会与所有氨基酸发生反应。也就是说氨基和羧基都可能会与欧前胡素发应。为了考察羧基是否会与欧 前胡素反应，选取了柠檬酸进行上述反应。反应的结果证明，羧基会参与欧前胡素的光敏反应。由于半胱氨酸是一种活性最强的酸性氨基酸，因而选取 半胱氨酸与欧前胡素进行光敏机制的研究。实验证明反应的可能机制可能是光照使得欧前胡素支链上的双键与溶液中的氢发生加成而后断裂，进而攻击 苯环上的质子，生成一种新的物质。欧前胡素与氨基酸中的氨基、羧基或巯基发生反应，生成了另一种物质。得到产物经HPLC-MS、UV、HNMR分析及解析 ，得到了其可能的结构。 制备白芷总香豆素受到提取溶剂种类、提取溶剂浓度、提取溶剂pH值、提取时间的影响。在单因素实验基础上进行正交实验，获得白芷中总香豆素 最优的提取条件，即乙醇含量80％，提取时间2h，pH为8。得到产品收率为11％，总香豆素含量为4.98mg/g，提取率达到97.15％。 精制白芷总香豆素受到树脂种类、洗脱剂的种类、吸附及洗脱时间、吸附及洗脱的pH值的影响。通过对上述条件的考察，获得了白芷中总香豆素最 佳的精制条件，即总香豆素提取液经Amberlite XAD 16树脂进行富集，在pH=7，原提取液树脂吸附20分钟，用pH=6的甲醇洗脱20分钟，得到产品含量为 25.05mg/g。 由于白芷中含有大量淀粉，虽然淀粉在医药上没有显著的疗效，但仍为一类有价值的营养物质，考虑到其综合利用，采用湿法分离了提取总香豆素 后所剩的白芷渣中的淀粉，得到粗淀粉收得率为46.7％，纯度为30.01％。使用得到的淀粉制备羟丙基三甲基季铵化淀粉，其制备工艺条件为：淀粉：水 ：3-氯-2-羟丙基三甲基氯化铵=1：3：5(W：V：V)，pH=11，温度为40℃，得到产品粘度为30×1000mPa's，含氮量为2.7％，取代度为0.49。 通过上述研究旨在探索中药白芷有效成分的光活性机制，为深度开发利用白芷提供应用成果。 8.期刊论文 彭菲.张胜.刘塔斯.肖冰梅 四倍体白芷药材中欧前胡素的含量测定 -中国中药杂志2002,27(6) 目的:测定四倍体白芷药材中欧前胡素的含量,并与原二倍体白芷相比较.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱Nova-pak 4.6 mm×200 mm ,5 μm,流动 相乙腈-水,流速1 mL*min-1,检测波长248 nm,柱温25 ℃.结果:四倍体白芷药材中欧前胡素含量达0.46%,二倍体对照药材仅为0.225%,含量增加了 104.4%.结论:人工四倍体白芷主要有效成分含量成倍提高. 9.期刊论文 梁明金.杨广德.贺浪冲.LIANG Ming-jin.YANG Guang-de.HE Lang-chong 白芷中欧前胡素的提取方法 研究 -中成药2000,22(12) 目的:建立提取白芷中香豆素类成分的方法.方法:以欧前胡素为指标,用薄层色谱法对提取香豆素类成分所用的溶剂种类、极性和提取方式进行系统 研究.结果:用4倍量95%乙醇回流提取2次(每次1h)的方法提取白芷中的香豆素类有效成分可以获得较高提取效率.结论:溶剂种类和提取方式对白芷中欧前 胡素的提取效率有较大影响. 10.学位论文 王梦月 白芷的古今药用概况及香豆素类成分研究 2003 运用柱层析、薄层层析等方法对白芷根中的主要成分—香豆素类进行提取、分离,从白芷根中得到了10个结晶,运用VU、IR、HNMR、MS等方法鉴定了 其中的β-谷甾醇、异欧前胡素、欧前胡素、蛇床子素、东莨菪内酯、花椒毒素、白当归素、水合氧化前胡素8个成分,其中β-谷甾醇、蛇床子素为首次 从白芷类药材中分得,东莨菪内酯、花椒毒素为首次从杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.vae.formosana(Boiss.)Shanet Yuan中分得.考察了不同采收时间、不同加工方法(微波干燥、远红外干燥等)、不同产地等对白芷主要香豆素类成分及总香豆素含量的影响,结果发现白 芷在七月中旬根中香豆素类成分含量最高,而加工方法以晒干为高、硫熏最低.对芷香豆素类成分在根、茎、叶、果实中的分布进行了研究,发现白芷果实 中香豆素类万分的含量最高、茎中的含量最低、根的木质部中几乎不含有香豆素.对全国四大商品白芷中的香豆素的含量进行了测定,发现四大商品白芷 中香豆素的含量有较大差异.对不同产地的川白芷中香豆素的含量也进行了测定,发现南充产白芷的含量最高.从白芷中提取了总香豆素(AGC),并首次对白 芷总香豆素类成分进行了抗炎、镇痛和解痉实验,首次发现总香豆素类成分具有明显的镇痛和解痉作用,无明显的抗炎作用.首次对分得的异欧前胡素、欧 前胡素、白当归素、水合氧化前胡素进行了抗炎、镇痛和解痉作用比较研究,结果发现四种香豆素类成分均无明显的抗炎活性;欧前胡素、异欧前胡素具 有明显的镇痛作用,为白芷镇痛的活性成分之一;欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素均有明显的解痉作用,能明显缓解氯化钡所致兔肠平滑肌痉挛 ,对乙酰胆碱所致的兔肠平滑肌痉挛无明显缓解作用;白当归素无明显解痉作用.总香豆素、欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素对兔肠平滑肌的正常 舒缩均无影响. 引证文献(9条) 1.郑翠英.夏艳姣.徐超群 白芷中香豆素类成分的提取[期刊论文]-华西药学杂志 2008(6) 2.孔维军.赵艳玲.山丽梅.周旭.肖小河 高效液相色谱法测定桃花止泻冲剂中6-姜酚的含量[期刊论文]-中南药学 2008(6) 3.台小华.潘玲.韩建伟 正交设计法优选骨痛贴膏乙醇渗漉提取工艺[期刊论文]-中国药师 2008(9) 4.高茉.高文远.游强蓁.辛文锋.叶挺祥.刘新元 活络镇痛片质量标准研究[期刊论文]-天津中医药大学学报 2008(1) 5.李立荣.雷玉萍.殷帅 高效液相色谱法测定通窍鼻炎片中欧前胡素的含量[期刊论文]-中南药学 2006(6) 6.孟兰贞.聂红.徐珍霞.熊爱华.刘建军 色谱技术在中药白芷研究中的应用进展[期刊论文]-时珍国医国药 2006(1) 7.何茹 苍耳子散温敏凝胶鼻腔给药系统研究[学位论文]硕士 2006 8.聂红.孟兰贞.韩海.张慧 HPLC测定白芷石油醚部位欧前胡素和异欧前胡素的含量[期刊论文]-中华实用中西医杂 志 2005(10) 9.杨龙辉 川白芷的HPLC指纹图谱研究[学位论文]硕士 2005 本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_syzyyzz200408077.aspx 授权使用：成都中医药大学(cdzyydx)，授权号：5b10cd7e-e321-453d-b96e-9e2c011b2cfc 下载时间：2010年11月12日