------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx裂细胞蛋白步骤【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】【精品文档】裂解细胞蛋白实验操作过程：1待细胞密度达到90%以上时准备裂解细胞蛋白。2准备工作：冰盒，冰的PBS，标记好的1.5mlEp管，冰上配裂解液（1×SDSliysisbuffer：PMSF=100：1），戴口罩。3裂解细胞：将dish取出（盖和底都做好标记），用冰的PBS洗三遍，最后一遍要把液体吸干净，把洗好的dish放在冰上，立即向底部均匀加入适量裂解液，封口后置于平整的冰面上晃动20min。若冰面不平，可用枪头盒将冰压平。期间可将dish拿起晃动，使裂解液作用于整个底部。4收集蛋白：用枪头带着粘稠液体在dish底部垂直着转圈，取细胞刮，用自来水冲净之后擦干，将dish立起来但不能离开冰面，然后用干净的细胞刮转圈刮将液体集中于一侧，收集dish中和细胞刮上的液体于标记好的Ep管中，冰上静置2h以上。刮完后立即清洗细胞刮，擦干置于75%的酒精中。5蛋白变性：将封口的Ep管在沸水中（900）煮10min，之后拆掉封口膜立即在冰上晾凉。6离心：12000rpm离心10min后，避开沉淀和局部粘稠液体，将蛋白转入新的标记好的Ep管。6保存：不封口，﹣4℃或﹣20℃。注意事项：1操作过程中最好带上口罩，以免唾液蛋白掺入。3配裂解液事要将1×SDSliysisbuffer和PMSF分别混匀，配好之后要吹匀后使用。4不能用吸水纸来回擦细胞刮，以免碎纸屑残留在细胞刮上，并且细胞刮用完之后要立即清洗，否则细胞蛋白会固定在细胞刮上。5刮细胞时，注意不能将dish离开冰面，否则PMSF不能发挥作用造成蛋白损失。6煮蛋白时使沸水浸没液体即可，不必让整个Ep管浸入沸水中，否则Ep管在煮的过程中会自动打开。7煮完蛋白后及时将封口膜去掉，否则冷却后不好处理。
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