5培养基配制技术解析

回顾复习一、微生物基本知识1、微生物的定义：结构简单、微小、生物2、微生物的分类：细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、病毒二、微生物实验基本条件和设备1、实验室的注意事项：实验安全、无菌操作（环境的无菌、操作的无菌、器皿的无菌）2、无菌室的消毒方法：紫外灯照射、甲醛熏蒸、酒精擦拭等回顾复习3、玻璃器皿的洗涤、包扎、灭菌：（1）洗涤剂：洗洁精、铬酸洗液等（2）包扎：锥形瓶、培养皿、移液管、试管（3）灭菌：烘箱干燥灭菌、高压蒸汽灭菌4、常用设备（1）显微镜：酵母的形态观察简单染色（美兰）（2）培养箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅……回顾复习三、常用试剂的配制方法（第一学期）（1）液体配液体——稀释配制（2）固体配液体——直接称量配制今日内容解决三个问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ：是什么？——什么是培养基？为什么？——为何起培养作用？怎么做？——怎么配制培养基？一、培养基的概念和作用1、为什么有“培养基”的诞生？历史背景：一、培养基的概念和作用2、什么是培养基？培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。3、渗透压当两种不同成分的溶液或不同浓度的溶液放在一起时，即引起扩散作用，直至成为均一溶液为止。如将两种溶液用羊皮纸或其他类似的半渗透膜隔开，则两种溶液因性质不同可由一方渗透到另一方，结果产生一种压力称为渗透压，这种现象称为渗透现象。渗透压的大小依溶液中溶质的分子数目而定，分子数目越多则压力越大（如细胞质壁分离现象）。在同一重量百分浓度的溶液中，具有小分子溶质较具有大分子溶质的渗透压要大，离子溶液较分子溶液的渗透压大，所以盐类溶液的渗透压大于糖类溶液的渗透压。?渗透压对微生物有很大影响，微生物的生活环境必须具有与其细胞大致相等的渗透压，超过一定限度或骤然改变渗透压对微生物是有害的，甚至引起微生物死亡。微生物在高渗透压溶液中引起细胞脱水，原生质收缩，细胞质变稠，发生质壁分离，影响微生物的活动或使之死亡。一般微生物在高渗透压溶液中不能生长繁殖，所以，常用腌渍（5－30％的食盐）或蜜饯（30－80％糖）来保存食品。微生物在低渗透压溶液中水分向细胞内渗透，细胞吸水膨胀，甚至破裂，细胞质从细胞内排出.培养基种类成分灭菌技术配制技术第二节培养基及其配制教学内容二、培养基的成分及其作用任何培养基都应该具备微生物生长所需要五大营养要素：水、碳源、氮源、矿物质、生长因子二、培养基的成分及其作用1、水?存在状态：游离态（溶媒）——自由水结合态（结构组成）——结合水?生理作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体二、培养基的成分及其作用2、碳源?定义：凡能提供微生物营养所需碳元素的营养源。?功能：提供合成细胞物质及代谢物的原料；能源。?常用碳源（1）实验室：葡萄糖、蔗糖、淀粉（2）发酵工业：玉米粉、米糠、麸皮、糖蜜二、培养基的成分及其作用3、氮源?定义：凡能提供微生物营养所需氮元素的营养源。?功能：提供合成细胞中含氮物（蛋白质等）；一般不作能源。?常用氮源（1）实验室：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨、牛肉膏（2）发酵工业：麦芽汁、酵母膏4、矿物质（无机盐）?定义：为微生物细胞生长提供碳、氮源以外的多种重要元素的物质。?主要功能：构成菌体成分；酶活性基组成或维持酶活性；调节渗透压、pH。?主要元素：磷（P）、钾（K）、钙（Ca）、镁（Mg）、硫（S）、钠（Na）?微量元素：铁、锌……二、培养基的成分及其作用5、生长因子?定义：一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物。?种类：维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶碱基等。?来源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁、复合维生素、动植物组织或细胞浸液以及微生物生长环境的提取液等。培养基成分提供的主要营养要素牛肉膏5g碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨10g氮源、维生素NaCl5g矿物质琼脂？？？？？？？H2O定容至1000mL1000mL牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成二、培养基的成分及其作用6、其他非营养成分（1）凝固剂：琼脂、明胶……（2）指示剂：伊红、美蓝、孔雀绿……（3）抑制剂：抗生素……三、培养基的类型1、根据培养基的物理状态来区分（琼脂作用？）液体培养基固体培养基半固体培养基三、培养基的类型2、根据所培养微生物的微生物类群来分：①细菌培养基；②放线菌培养基；③霉菌培养基3、根据培养目的来分：①种子培养基；②发酵培养基4、根据培养基成分是否明确来分：①天然培养基；②合成培养基；③半组合培养基5、根据特殊用途划分：①选择性培养基；②鉴别性培养基；③增殖培养基 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生，产降低成本半合成培养基由天然成分和已知成分相互混合而成用途广泛目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的分离称量溶解(过滤)分装、包扎调PH倒平板或摆斜面定容消毒灭菌无菌检查四、培养基的配制步骤培养基成分提供的主要营养要素牛肉膏5.0g碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨10.0g氮源、维生素NaCl5.0g矿物质琼脂20.0g（不提供营养，只用于凝固）pH7.6利用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调整将上述物质溶解后，加水定容至1000mL。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。仪器和试剂?烧杯(500mL、50mL)?三角烧瓶(250mL)?量筒?玻璃棒?玻璃漏斗?酒精灯?培养皿?牛皮纸?纱绳?托盘天平?灭菌锅?牛肉膏?蛋白胨?NaCl?琼脂?10％NaOH?10％盐酸?精密pH试纸?超净工作台五、培养基配制器材培养基、玻璃器皿、天平秤、烧杯或锥形瓶、药匙、玻璃棒、电炉、pH试纸等。五、培养基配制过程–1、称量1.在天平上放上称量纸，并把天平归零。2.用药勺取出培养基，按配方称量。注意事项–称量结束1.清理桌面和天平2.清洗药勺，擦干放回原处3.药品放回药品柜五、培养基配制过程–2、溶解?倾倒培养基时，小心不要沾到玻璃瓶或烧杯壁上。?若有必要，需要利用电炉加热帮助溶解。?煮溶后要补加足水份，不能把培养基煮焦，焦化的不能使用五、培养基配制过程–3、分装?分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上以免引起污染。?注意：装入试管中的量不宜超过试管高度的1/3，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。?培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶上塞好棉塞，以阻止外界微生物污染培养基，并保证有良好的通气性能。五、培养基配制过程–3、分装1.调整分注器刻度，按量分装2.分装试管3.盖上试管五、培养基配制过程–6、摆斜面?灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管一端倾斜搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管长的一半为宜。五、培养基配制过程–6、倒平板按无菌要求，在火焰旁操作，取融化并冷却至不烫手的固化培养基（约50℃），倒入无菌培养皿中，倒量以铺满皿底为限，不超过培养皿高度的1/2。（１）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。（２）将全部培养基放入36±1℃恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。（３）用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24～48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。五、培养基配制过程–7、培养基质量检验五、培养基配制过程–培养基保存（1）基础培养基不能超过两周（2）生化试验培养基不宜超过一周（3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过3天。培养基灭菌后，可根据需要进行接种和纯培养接种至斜面接种至平板讨论1、什么时候可以倒平板？2、倒平板时需要注意哪些要点？讨论用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。讨论用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。讨论空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止培养基中水分的蒸发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。