动态凝血时间测定实验方法1参比材料的制取体外动态凝血时间的测定以硅烷化玻璃作为阴性对照,玻璃作为阳性对照。将二甲基二氯硅烷((CH3)2SiCl2)用石油醴稀释为10%的溶液后,均匀涂敷于洁净干燥的玻璃烧杯/玻片上,在烘箱中缓缓升温至200C,保温3小时以上,却得阴性对照样品。硅烷化的玻璃不挂水。2ACD血液的配制将枸檬酸(C6H8O7?H2O)0O7g、葡萄糖0.3g、枸檬酸钠(Na3c6H8。7?2H2。)1.22g溶于100ml蒸储水中,配成血液保存液ACD。采集新鲜血液,以血:ACD为4:1的比例配置成ACD血液。3操作步骤1)所有试样(每组3个样)按事先设计的时间顺序编号。2)用刻度吸管将0.2mlACD血液滴加在清洗后的试样表面,用微量加样器加入0.2mol/LCaCl2溶液25圈1用玻璃棒轻轻搅匀,立即开动秒表开始计时。3)在5,10,20,30,40,50,60min等指定时间,分别用100ml蒸储水缓缓流注于试样表面,将流液收集在烧杯中。4)用721分光光度计在540nm处测定每份流液的吸光度值。5)将测得的数值绘制动态凝血时间曲线,即作OD~t曲线(各试材吸光度均取3管流液平均值)。取吸光度为0.100所对应的接触时间为材料的动态凝血时间。溶血率测定实验方法1新鲜稀释抗凝血的配制采集新鲜血20ml,用2%草酸钾溶液1ml抗凝,然后用0.9%NaCl(生理盐水)以4:5的比例(血液:稀释液)进行稀释2操作步骤1)将待测试样经水洗干燥后,放入硅烷化玻璃容器中,加生理盐水10ml。每一种样品三个平行样。2)设阴性对照组(三个平行样),每个样品中加入生理盐水10ml。3)设阳性对照组(三个平行样),每个样品中加入蒸储水10ml。4)将全部试管放入37±0.5C的水浴中恒温30min。5)在各管中用刻度吸管加入新鲜稀释抗凝血0.2ml,轻轻混匀,在水浴中继续保温60min。6)将各管的溶液置入干燥离心管中,2500r/min离心分离5min。7)离心后的上清液,移入比色皿中,用分光光度计在545nm波长处测定各自的吸光度。8)计算溶血率:(游离血红蛋白浓度/总血红蛋浓度)X100%各试管和对照管的吸光度均取三管平均值。血小板消耗率测定实验方法1抗凝血的配制同上2草酸镂稀释液的配制取草酸钱((NH4)2c2O4?H2。)1.0g、EDTA-Na20.012g、用蒸①水稀释至100ml。3操作步骤1)将具有相同表面积的被测材料清洗干燥后,置于硅烷化玻璃容器中。2)用刻度吸管往容器中加入抗凝血1ml,立即开动秒表,
记录
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时间,接触时间为10min。3)用刻度吸管往硅烷化的清洁小试管中加入草酸俊稀释液0.38ml。4)用微量取样器迅速准确地吸取容器中的血液20口吸取时避免产生气泡和多次吸取,取好后立即将血液轻轻吹入已盛稀释液的试管中,微量取样器取上清洗吸管3次,轻轻混匀置于试管架上。5)将试管轻轻振荡,用清洁吸管吸取血液一滴,注入计数板上的计数池,推上盖玻片,避免产生气泡或溢出,静置10~15min。6)在显微镜下先用低倍镜找到中央大格,数中央大格中的五个中格(80个小格)内的血小板数,应将全部大格数完。使用显微镜时要特别注意物镜不要触及载玻片。7)血小板计数:5中格内血小板数>109=血小板数/升。8)计算血小板消耗率思考题1、三个体外血液相容性指标
评价
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的意义有何不同?它们是否为完全独立的指标?2、在测定动态凝血时间的试验中,如何根据OD~t曲线评价材料的抗凝血性能?生物材料评价实验评分标准90-100:严格按照实验操作
流程
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进行实验,得出正确结论,完成课后思考题。实验
报告
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正确无误记录实验流程,格式正确,且积极思考,对实验中的反常现象进行分析思考,讨论其原因。80-90:能按照实验操作流程进行实验,得出正确结论。实验报告正确记录实验流程,格式正确,对实验中的反常现象进行分析。70-80:能按照实验操作流程进行实验,得出正确结论。实验报告基本正确记录实验流程,格式基本正确。60-70:能按照实验操作流程进行实验,得出正确结论。实验报告基本正确记录实验流程,但不全面、不系统。格式基本正确。(5)凡有以下情况之一者,以不及格论:a)未达到实习
规定
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的基本要求,实验报告缺乏主要实验内容,甚至错误,不完整、不系统。b)抄袭实习报告者和给人抄袭报告者;大量下载拷贝网上资料拼凑为报告者;c)严重违反纪律,造成严重安全责任事故、其它严重事故或造成恶劣影响者。