会计学1蔗糖酶的专一性实验实验目的通过对酵母蔗糖酶专一性的研究，加深对酶专一性的理解了解酵母蔗糖酶催化水解何种糖苷键第1页/共14页实验原理1、酶的专一性酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，并生成具有确定结构的产物，而对其他底物无催化作用。酶的专一性可分为：键的专一性：只作用与一定类型的化学键，对键两端的集团无严格要求。如核酶、酯酶等基团专一性：对键两端或一段的基团具有严格要求，如β-葡萄糖苷酶、转移酶等绝对专一性：只作用于一种底物立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性第2页/共14页2、葡萄糖、果糖和半乳糖第3页/共14页D/αL/β第4页/共14页第5页/共14页第6页/共14页3、淀粉的结构与其水解产物直链淀粉：200~300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连支链淀粉：由α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键在直链淀粉的基础上，分支而成还原性：无水解产物：人体内，在淀粉酶的催化下生成麦芽糖；麦芽糖在麦芽糖酶的催化下，彻底水解成解成葡萄糖。123456第7页/共14页4、棉籽糖的结构与其水解产物分子组成：α-半乳糖、α-葡萄糖和α-呋喃果糖聚合而成还原性：无彻底水解产物：α-半乳糖、α-葡萄糖和α-呋喃果糖β-1，6糖苷键→→α-1，2糖苷键123456123456第8页/共14页5、蔗糖的结构与其水解产物分子组成：α-葡萄糖和α-呋喃果糖缩合而成的二糖还原性：无彻底水解产物：α-葡萄糖和α-呋喃果糖α-1，2糖苷键123456123456第9页/共14页6、本尼迪特（Benedict）反应本尼迪特试剂（班氏试剂）：碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性单糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜沉淀，砖红色或黄绿色。淀粉、蔗糖和棉籽糖都不能反应，而它们的水解产物（如葡萄糖和果糖）能够发生本尼迪特反应。因此，可以利用观察有无颜色沉淀，判定蔗糖酶是否对淀粉、蔗糖和棉籽糖具有水解作用。第10页/共14页实验材料器材：50和1000μL可调移液枪、试管、水浴锅等。试剂：（略，见教材）操作步骤（1）蔗糖酶液的制备：秤取1g干酵母粉，分次加入7ml水，研磨5min，过滤后，滤液用水稀释三倍（蔗糖酶液），待用。（2）取7支大试管，标号，按下列表格操作：第11页/共14页混匀后，40ºC温育30min，再加入2ml班氏试剂，沸水浴中作用3min，观察各管颜色变化，并作记录。第12页/共14页注意事项：（1）充分研磨酵母（2）脱脂棉先用蒸馏水浸湿（3）沸水时间不可过长思考题：（1）试管5经长时间沸水浴后，颜色可能会变成黄绿色，为什么？（2）按专一性分，蔗糖酶分类属于何种专一性？（3）蔗糖酶水解何种糖苷键？第13页/共14页
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