LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2008 VOL.19 NO.8 时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期
◇药理药化◇
川乌煎煮时间和给药剂量与毒性的相关性研究
刘 瑶 .
(1.广东省中药研究所,广东 广州 510520;
彭 成
2.成都中医药大学,四川 成都 610075)
摘要 :目的 揭示川乌煎煮时间、给药剂量与毒性的相关性。
方法
快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载
采用均匀
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
的方法,将川乌分别煎煮 15 min,30
min,1,2,3,4,6 h,生药含量依次为临床用量的6,12,24,48,72,96,120倍。模型对照组和各给药组于复制痹证动物模
型后,按组给药30 d。观测动物生长发育、血液学、血液生化学、脏器系数、病理组织学变化及停 药 15 d后上述指标的变
化。将结果进行 多元回归分析,得出川乌煎煮时间、剂量与毒性的相关性。结果 川乌水煎液能抑制痹证动物的足跖肿
胀;对模型动物的生长发育无明显影响;对其造血系统无明显毒性;对其肝脏、肾脏、心脏有一定毒性。川乌水煎液毒性
最大的煎煮时间和给药剂量是 30 min,120倍。结论 煎煮30 min,给药剂量为临床用量 120倍时,川乌水煎液对痹证动
物产生的毒性最大,但药效最佳。
关键词 :川乌; 煎煮时间; 给药剂量; 毒性; 均匀设计
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2008)08.1803-03
Correlation Study between Decocting Time,Administration Dosage and Toxicity of Radix
Aconiti
LIU Yao 一,PENG Cheng
(1.Guangdong Traditional Chinese Medical Institute,Guangzhou 5 1 0520,China;2.Chengdu University D厂
TCM,Chengdu 610075.China)
Abstract:Objective To study the correlation between decocting time(DT),administration dosage(AD)and the toxicity of Ra—
dix Aconiti(RA).Methods According to uniform designed technology,RA was decocted with different duration of 15 minutes,30
minutes,1 hour,2 hours,3 hours,4 hours and 6 hours,and the content of RA was 6 times,12 times,24 times,48 times,72
times,96 times,120 times of clinic AD respectively.All rats except norm al control group were made up BiZheng animal model,
and administered RA decocted liquids for 30 days.The changes of hematology,blood biochemistry,organ coefficient,histopathol—
ogy test index were detected before and after 15 days.The regression analysis was adopted to study the relativity between DT,AD
and the toxicity of RA.Results RA decocted liquids could decrease voix pedis tumefaction of BiZheng model animals,but had no
effect on the growth and development and hematopoietic system of model animals.Th ey had certain toxicity to livers,kidneys,and
hearts of the model anima1.Th e DT and AD of maximal toxicity of RA decocted liquids were 30 minutes and 1 20 times.Conclu—
sion RA decocted liquids with DT 30 min and AD 120 times have the maximal toxicity and the best medicinal effect.
Key words:Radix Aconiti(RA); Dectocting time(DT); Administration dosage(AD); Toxicity; Uniform Design
川乌为毛茛科植物乌头Aconitum carmic"haeli Debx.的干燥母
根。始载于《神农本草经》,列为下品。其味苦、辛,大热,有大毒,
功能祛风除湿、温经散寒、行淤止痛⋯。研究
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
明川乌具有良好的
镇痛、抗炎和免疫抑制作用,但因其毒性大,临床上常因用药不当
而造成中毒甚至死亡 。 。目前,川乌的毒理学实验研究较少 ,已
报道的川乌长期毒性实验中,均采用正常健康动物 J,对病证模型
动物的毒性研究 目前未见。煎煮时间与给药剂量是影响川乌毒性
的重要因素。其煎煮时间,临床报道从 15 min一6 h不等,也有以
口尝不麻为度;给药剂量 ,临床应用从 1.5~60 g不等。因此实验
根据临床实际应用和前期完成的急毒实验情况,设定了 7个煎煮
时间点和给药剂量,并引入均匀设计法,研究不同煎煮时间,给药
剂量的川乌水煎液对痹证动物模型的长期毒性的影响。
1 材料与仪器
1.1 药物 川乌,购 自四川江油,经成都中医药大学中药鉴定教
收稿日期:2007-11-29: 修订日期:2008-01-31
基金项目:国家自然科学基金重点项目(No.30230410);
教育部新世纪人才支持计划(NCE—T一04—0911);
四川省重点基础研 究项 目(No.04JY029—005)
作者简介:刘 瑶(1980-),女(汉族),四川成都人,现任广东省中药研究
所助教,硕士学位,主要从事中药复方药理研究工作.
通讯作者简介:彭 成(1964.),男(汉族),四川南部人,现任成都 中医
药大学药学院教授,博士生导师,博士学位,主要从事中药复方药理与疾
病动物模型研究工作.
研室鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母
根。参见《中国药典))2000年版制剂通则项,以3倍量水浸泡30
min,加至10倍量水煎煮,煎煮时间分别取煮沸后15 min,30 min,
1 h,2 h,3 h,4 h,6 h等 7个时问点,煎煮完毕减压浓缩为每毫升
含原生药 1g。根据均匀设计表 U 7(7 ),川乌煎煮 15 min,30
min,1 h,2 h,3 h,4 h,6 h 7个时间点分别取临床剂量 [3g·(60
kg)‘。·d ]的72倍,12倍,120倍,48倍,6倍,96倍和24倍。
实验时用蒸馏水配制成适当浓度的药液。造模药物为完全弗氏
佐剂(美国Sigma公司产品)。
1.2 动物 SPF大鼠180只,雄性,体重 130—160 g,由成都中医
药大学实验动物研究 中心提供,合格证号:川实 动管质 SCXK
(川)2004—12号。
1.3 仪器与试剂 电子天平 ;KX一21N型电子血球 自动计数仪
(日本 Sysmex公司);TMS1024i型全 自动血液生化分析仪(日本
东京贸易株式会社);光学显微镜 (日本奥林 巴斯仪器公 司),游
标卡尺,YT一100电子压痛仪等。Urea,Crea,TP,ALB,AIJT,AST,
ALP检测试剂盒(上海申能 一德赛诊断技术有限公司生产 ,生产
批 号 依 次为 :310/021/1,171/014/1,231/021/01,022/018/03,
4609/23262/01,4704/23872/02,5406/26835/1);TC,TG检测试
剂盒(中生北控生物科技股份有限公司生产,生产批号依次为:
200506,200502);TBIL,GLU检测试剂盒(四川美辰生物科技有
限公司生产 ,生 产批号 依 次为:0504,0506);Tr检测试 剂盒
(ROCHE公司生产,生产批号050186)。
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时珍国医国药2008年第 19卷第8期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2008 VOL.19 NO.8
1.4 实验设施 SPF(specific pathogen free condition)实验动物屏
障系统 ,由成都中医药大学实验动物研究中心提供,使用许可号:
第 05—50号。
2 方法
2.1 物分组与造模及给药 健康合格的SPF大鼠180只,全
雄 ,随机分为9组 ,即空白对照组、模型对照组 、生川乌 15 min水
煎液组、30 min水煎液组 、1 h水煎液组 、2 h水煎液组 、3 h水煎液
组、4 h水煎液组和6 h水煎液组,每组 20只。模型对照组和各
给药组于大鼠右足足跖处注射完全弗氏佐剂0.1 ml/只。从造模
当天开始,各组每Et于9~11 AM按大鼠体重 10 m1.kg~ ·d
分别灌喂蒸馏水、不同煎煮时间点的生川乌水煎液,共30 d。
2.2 检测指标
2.2.1 一般状态观察 观察动物造模及给药期间的一般行为活
动和精神状况,每周记测 1次体重;测量大鼠足肿胀度:分别于造
模前、造模后0.5h,18h,第2天至第10天上午8时用游标卡尺法
测定售组大鼠右足肿胀度,第 11天至第 30天上午8时测定各组
大鼠左、右足肿胀度。
2.2.2 血液学及血生化学检测 末次给药24 h后,每组随机取
12只大 鼠,股静脉采血,作 WBC,RBC,Hb,HCT,MCV,MCH,
MCHC,PLT,Ret计数检测,以及 GLU,UREA,CREA,TP,ALB,
ALT,AST,TBIL,TC,TG以及电解质 Na,K,Cl离子的测定。
2.2.3 系统剖检与脏器系数及组织病理学检测 脱颈椎法处死
动物 ,进行系统剖解。称其脏器湿重并计算脏器系数。
组织病理学检测 :①取动物心、肝、脾、肺、肾、脑 、甲状腺、胸
腺、肾上腺 、胰腺、脊髓 、食管、气管 、胃、小肠 、大肠、睾丸、附睾、前
列腺组织各一块,立即投入 10%甲醛液内固定,石蜡包埋 ,切片,
HE染色,光学显微镜下观察。②痹证关节病理组织观察 :取左 、
右踝关节,采用 10%中性甲醛溶液固定 ,24 h后用混合脱钙液加
温脱钙48 h,常规进行石蜡包埋,切片(5 m),HE染色,光镜下
观察。
2.3 可逆性观察 剩余动物作一般状态观察,每周记测 1次体
重。15 d后处死 ,进行系统剖检,称取脏器湿重,计算脏器系数,
组织病理学检查,血液学及血液生化学检测 ,指标和方法同前。
2.4 统计学方法 数据资料先用 SPSS统计软件单因素方差分
析进行统计学处理,再用均匀设计软件进行多元回归分析。
3 结果
3.1 川乌水煎液给药30 d一般状态观察 受试动物用药期间,
一 般行为活动正常,对刺激反应灵敏,无呆滞、嗜睡,无躁动、震
颤,无流涎、流涕,饮水、摄食正常,粪便质地无异常,会阴部无污
秽。各组体重无明显差异。
3.2 川乌水煎液给药30 d大鼠足跖肿胀度 各给药组大鼠右后
足(致炎侧)于造模后 18 h至第 2天,足跖和踝关节明显红肿,局
部皮温增高,肿胀度达到峰值 ,持续 2 d后逐渐减轻,第 21天左
右又出现一次肿胀高峰。第 11天,与空白对照组比较,给药组大
鼠左足有明显肿胀。给药期间,各给药组大鼠的左、右足肿胀度
较模型组有 不 同程度 的减轻 (P<0.05或 P<0.01或 P<
0.001)。药效发挥最佳的煎煮时间和给药剂量集中在 30 min,
120倍。部分足肿胀度测定数据见表 1—2。
表 1 川乌水煎液给药 3O天对大鼠右足足跖肿胀度的影响( )
与空白组比较, P<0.05, P<0.Ol,⋯ P<0.001;与模型组比较,△P<0.05,AAp<0.Ol,A△Ap<0.001
⋯ 粤归分析:第5天肿胀度回归方程: ?· 。· 表2回归分析:第 天左足肿胀度回归方程:y:. +
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! 一 : =4 壁 案 :煎煮时间。0 minj给孕 量 20 10一 X2 。一1.51 l×10一sX2 (最优条件:煎煮时间30-Z.m=li ,给药 倍
);第2 天月中胀度回归 程: · .,: · =( 0 - :剂量120倍) ;第 天肿胀度回归方程。:。y: .325.+1. 1 一
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:煎煮时间 ,给药
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4
5 07 10 X1 2 91X2 XI 30 min X 79 0 6X 10 X
2 1 08 10 Xz 最优条
— 哩 =二二 二二二 二二 二募 孽惹 纂蠢 与给药剂量是 。 。倍。部
模型 蒸馏水 。·4O3: O3 。·38 。·O2 : 。·346: O2。:一脏脏器系数明显高于空白对照组,肾脏器系数回归方程y=6.7815 min 3.6 0.390±O.026 0.377±0.020 0.335±O.015 ⋯ ~ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ 一 ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ 、 ⋯ ⋯ ⋯ 。
!. o· o·【)35 o·372±(】·【)28 o·3 018A
. .
X2。X
1 ,结果显示毒性最大的煎煮时间与给药剂量是30 min, ; .4 。· 一 。.38 :O.022
△* 。~34 :00.023h 392 0 032 0 367 0 029 0 332 017:一3 .1 位113 部分脏 系数检测数据见表4 O。。 3 O
. 3 O. ± . ± . △ ±O. △ J0‘ J 。 日 J肛 竹 姒 姒 儿 伏 叶
空白组比较, o5,一 (o·。 ,一 。·0o ,与模型组比较,凸尸 型组有 7例踝关节软组织充血
、水肿 。 0 05
.
△Ap<0 01
. △△△P<0.OOl ~ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯ ⋯
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2008 VOL.19 NO.8 时珍国医国药 2008年第 19卷第 8期
与空白组比较, P<0.05,一 P<0.01,⋯ P<0.001,与模型组比较, P<0.05, P<0.O1, P<0.001
表4 川乌水煎液给药 30 d对大鼠脏器系数的影响(i± )
与空白组比较, P<0.05, P<0.O1,⋯ P<0.001;与模型组比较, P<0.05, P<0.O1, P<0.001
3.5 生川乌水煎液停药可逆性观察 受试动物停药期间,生长发 4.59 X 10一X. 。脑脏器系数回归方程:Y:5.38+4.65 X 10 X
育正常,一般行为和一般状态正常,各组问体重无明显差异。3 h
组Urea值较空白组有明显升高,Urea值的回归方程:Y:10.5—
0、536Xl一6.91×10一 2+1.3×10一 I +3.53×10一 2 +5.11
X 10~X X2 ,结果显示毒性最大的时间与剂量是30 rain,120倍。
6 h组肾脏和15 rain组脑的脏器系数较空白组明显升高。肾脏
器系数回归方程 :Y=7.28+1.44 X 10~X 一1.64 X 10~X X2一
+2.21 X 10一 一1.47 X 10~Xl 4.04 X 10一 +2.08 X 10一
。 结果显示,毒性最大的煎煮时间与给药剂量分别是20.55
rain,6倍和 15.85 rain,120倍。病理组织学检查结果显示,各给
药组动物的组织器官均为正常,模型组有4例踝关节软组织有慢
性炎症及纤维组织增生。部分血液生化学指标测定数据见表 5。
表 5 生川乌水煎液停药 15 d对大鼠血液生化学的影响( ±s)
千 蔓 巽 妻鼠病蠢 鬈 曩耋 盏 蒙 冀 冕 霍萋鬈 誊 塞 譬 皇 罄星 警 妻药 禁 盂墨 妻
沓 翌 室 嘉 翟 曩 翥 茄 霰 筹: 眦刚 古’ 卓
. 《附子煎煮时问、给药剂量与毒性的相关性研究》.成都中医药 ‘ : ’ 。
曼 曩譬 毒验对象,揭示生川乌水煎液煎煮时[2]师ZU海U~波:I,/周/,重楚,李延忠,等.川鸟总碱的抗炎作用[J].中国中药杂 问和给药剂量与毒性的相关性
。 . ’: ‘’ ⋯⋯ ⋯⋯⋯~ ⋯⋯ ⋯、
药效最佳。该结果仅是应用统计方法得出的一个理论推测矗,对[ 孝 : 论方法在试验设计中的应用[J]·应用数学
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