实验十五吸收曲线的测绘一、实验目的1．掌握测定及绘制药物吸收曲线的方法；2．掌握紫外－可见分光光度计的使用方法。二、实验原理在紫外－可见光区，物质对光的吸收主要是分子中电子能级跃迁所致，同时伴随着分子的转动和振动能级的变化，因此电子吸收光谱一般比较简单、平缓。紫外吸收光谱能表征化合物的显色基团和显色分子母核，作为化合物的定性依据，相同的化合物其紫外吸收光谱一定相同。实验证明，若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的入max、入min或入sh为一定值,且它们的数目也一定，从而为鉴别化合物提供了有力的依据。根据药典规定，百分吸光系数是指当溶液浓度为1%,液层厚度为1cm时，指定波长的吸光度。即Elm=A/CI。化合物对光的选择吸收的波长以及相应的吸光系数,是该化合物的物理常数,当已知某纯化合物在一定条件下的吸光系数后,即可由上式计算出该化合物的含量。三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、容量瓶、吸量管。2．试样维生素B12注射液。四、实验
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与
步骤
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取维生素B12注射液，稀释成100卩g/mL的水溶液，作为试样溶液。将此被测溶液与空白溶液（水）分别盛装于1cm厚的吸收池中，放置在仪器的吸收池架上，按仪器使用方法进行操作。从仪器波长范围的上限（或下限）开始，每隔10cm测量一次，在吸收峰和吸收谷处，每隔2nm测量一次，每次测量均需用空白调节100%透光率，然后读取测定溶液的吸光度,记录不同波长处的测定值。以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图,并连成曲线,即得吸收曲线。五、数据处理1．记录波长及相应的吸光度：波长（入）nm360吸光度（A）波长（入）nm362吸光度（A）2.以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制吸收曲线。六、实验注意事项及讨论1．严格按照仪器的操作要求进行。2．每调整一次波长均需用空白重新调节100％透光率。3．调整波长时，最好朝着一个方向旋转，即：波长由小到大，或又大到小。不要来回旋转。4．开关比色皿暗箱盖时，动作要轻，以防破坏。5．此实验用到的波长位于紫外区，故要用石英比色皿，而不能用玻璃比色皿。6．放大器灵敏度的选择是根据不同单色光波长光能量不一致时分别选用，其各档的灵敏度范围是：第一档x1倍，第二档x10倍，第三档x20倍。原则是能使空白档良好地用光量调节器调整于100％T处。7.若吸光度值大于0.8，需要把待测溶液稀释，使得吸光度值在0.2〜0.7范围内。
浙公网安备 33021202002483