null分子生物学实验分子生物学实验课件作者：蒋华云琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA实验目的实验目的学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术
检测上次实验课提取的质粒DNA 实验原理实验原理电泳
带电物质在电场中的趋向运动称为电泳。凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为蛋白质、核酸研究的首选标准方法。
泳动率
泳动率是带电颗粒在一定的电场强度下，单位时间内在介质中的迁移距离。
null影响泳动率的因素
样品的物理性状（分子大小、电荷多少、颗粒形状和空间构型）
支持物介质（琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）
电场强度
缓冲液离子强度（最适离子强度一般在0.02～0.2之间）
nullDNA分子在琼脂糖凝胶中泳动的电荷效应和分子筛效应
DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动
在一定的电场强度下， DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型null质粒DNA分子的3种构型
超螺旋的共价闭合环状质粒DNA（covalently closed circular DNA，简称CCCDNA）
开环质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA一条链断裂（open circular DNA，简称OCDNA）
线状质粒DNA，即共价闭合环状质粒DNA二条链断裂（linear DNA，简称L DNA）实验仪器实验仪器分析天平
微波炉
移液器（10uL）
琼脂糖凝胶电泳系统（水平槽）
紫外线透射仪（或凝胶成像系统）琼脂糖凝胶电泳系统（水平槽）琼脂糖凝胶电泳系统（水平槽）水平槽电泳系统的使用水平槽电泳系统的使用null电泳正在进行电泳仪DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。 DNA分子在凝胶中移动null材料与试剂质粒DNA
DNA marker
50×TAE(电泳缓冲液)
6×凝胶加样缓冲液
琼脂糖
1%溴化乙锭溶液（EB）
（注意： EB 具有毒性，戴手套操作）null实验操作步骤
胶板的制备
制备1%琼脂糖凝胶
加样
记录点样的顺序和点样量
电泳
DNA的迁移速度和电压成正比，最高的电压不超过5V/cm， DNA片段从负极向正极移动，当溴酚蓝指示剂移动到距凝胶前沿1～2cm处时，停止电泳。
实验
报告
软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载
请详细记录实验过程null制备1%琼脂糖凝胶
（1）按水平槽制胶板操作说明，将制胶板安装好，调节水平。
（2）称取0.25g琼脂糖，加25mL1×TAE电泳缓冲液，微波炉加热至完全透明，凉却至60度时，加入1μL1%EB，摇匀倒板。
记录加样的顺序和加样量
（3）待琼脂糖凝胶完全凝固，将胶板放入电泳槽，加入1×TAE电泳缓冲液，通常加至没过胶面2mm，拔去梳子。
（4） 选择一个加样孔加入5μLDNA marker 2000或15000
（5）吸取5 μL样品DNA和1 μL 6×凝胶加样缓冲液混匀，加入加样孔。（注意：此混匀操作可在一次性手套上完成。）
电泳
（6）接通电泳槽和电泳仪电源，调节电压为100V，稳压电泳25分钟。（注意：DNA片段从负极向正极移动，即加样端靠近电泳槽负极。）null结果检测在紫外灯（360nm，312nm，254nm）下观察电泳凝胶，DNA存在处显出桔红色荧光条带。
拍照记录实验结果。
注意：紫外线对眼睛有伤害作用，应戴上防护眼镜。
浙公网安备 33021202002483