微生物与免疫学实验设计
自来水中细菌的培养与染色
组员:宋琴、翟亮亮、赵钟慧、呂怡
一、 材料1 材料、试剂与仪器
实验材料 自来水
实验试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl 灭菌水 实验仪器 高压蒸气灭菌锅 培养皿 三角烧瓶 天平 牛角匙 pH试纸(pH5.5-9.0) 吸量管 麻绳 牛皮纸 量筒 玻璃棒 电炉 温度计
二、 实验方法
灭菌:
(1)首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。
(2)放回内层锅,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、。 (3)加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。
(4)用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用
0.1MPa,121?,20min灭菌。
(5)灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力
表
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的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。
三、水样的采取及试剂配制
放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。 称量 :
牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下:
牛肉膏 0.5g
蛋白胨 1.0g
NaCl 0.5g
水 200mL
pH 7.4,7.6
按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。
溶化 :
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
调pH :
在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。
四、革兰氏染色
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是:
1)涂片固定。
2)草酸铵结晶紫染1分钟。
3)自来水冲洗。
4)加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5)水洗，用吸水纸吸去水分。
6)加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。 7)蕃红染色液(稀)染2分钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
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