果糖二磷酸钠
Guotang Erlinsuanna
Sodium Fructose Diphosphate
CHNaOP (无水物)406.06 6113122
CHNaOP 8HO (八水合物)550.17 6113122 •2
本品为果糖-1,6-二磷酸三钠盐或其八水合物。按无水物计算,含CHNaOP不得少于611312295.0%。
【性状】 本品为白色或类白色的结晶性粉末;微有特臭,味微咸;果糖-1,6-二磷酸三钠盐极具引湿性。
本品在水中易溶,在乙醚、乙醇或丙酮中几乎不溶。
【鉴别】 (1)取本品适量,加水制成每1ml中含50mg的溶液,作为供试品溶液。另取果糖二磷酸钠对照品适量,加水制成每1ml中含50mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版二部附录?B)试验,吸取上述两种溶液各10µl,分别点于同一微晶纤维素薄层板(板厚约0.5mm)上,以异丁酸,水,浓氨溶液(66:33:1)为展开剂,展开后晾干,喷以盐酸间苯二胺乙醇溶液(取盐酸间苯二胺0.36g,加76,乙醇溶液10ml,使溶解),在105?加热30分钟使显色,供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同;继续再喷以丙酮,12.5,钼酸铵溶液,盐酸,高氯酸(86:8:3:3)混合溶液,供试品溶液所显斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同。
(2)取本品约50mg,置坩埚中,加无水碳酸钠2g,混合后,炽灼至灰化,放冷,加水10ml使溶解,加硝酸使成酸性,滤过,滤液加钼酸铵试液,加热,即发生黄色沉淀;加过量氨试液,沉淀溶解。
(3)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致(中国药典2005年版二部附录?C)。
(4)本品的水溶液显钠盐的鉴别反应(中国药典2005年版二部附录?)。
【检查】 酸度 取本品1.0g,加水10ml溶解后,依法测定(中国药典2005年版二部附录?H),pH值应为5.5,6.5。
溶液的澄清度与颜色 取本品1.5g(以无水物计算),加水10ml溶解后,溶液应澄清无色。如显色,与黄色、橙黄色或黄绿色2号
标准
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比色液(中国药典2005年版二部附录?A第一法)比较,不得更深。
游离磷酸盐 精密称取本品20 mg(以无水物计算),置25ml量瓶中,加水15ml使溶解;另精密量取每1ml中含10μg的磷酸盐对照溶液[精密称取经105?干燥2小时的磷酸二氢钾
1
0.1433g,置1000ml量瓶中,加硫酸溶液(3?10)10ml,与水适量使溶解,并加水稀释至刻度,摇匀,临用时再加水稀释10倍]8ml,置另一25ml量瓶中,各精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1,氨基,2,萘酚,4,磺酸溶液(取无水亚硫酸钠5g,亚硫酸氢钠94.3g与1,氨基,2,萘酚,4,磺酸0.7g,充分混合,临用前取此混合物1.5g,加水10ml使溶解,必要时滤过)1ml,加水至刻度,摇匀,在20?放置30,50分钟,照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录?A),在740nm的波长处测定吸光度。供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度(0.4,)。
氯化物 取本品0.10g,依法检查(中国药典2005年版二部附录?A),与标准氯化钠溶液3.0ml制成的对照液比较,不得更浓(0.03,)。
硫酸盐 取本品0.50g,依法检查(中国药典2005年版二部附录?B),与标准硫酸钾溶液2.5ml制成的对照液比较,不得更浓(0.05,)。
有关物质 取本品,加水制成每1ml中含0.1g(以无水物计算)的溶液,作为供试品溶液;精密称取6-磷酸果糖对照品适量,加水制成每1ml中含0.5mg的溶液,作为对照品溶液(1)。精密称取果糖对照品适量,加水制成每1ml中含0.5mg的溶液,作为对照品溶液(2)。另取6-磷酸果糖对照品、果糖对照品及供试品适量加水制成每1ml中各含6-磷酸果糖对照品、果糖对照品0.25mg与供试品1mg的混合对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版二部附录?B)试验,吸取混合对照溶液5μl,点于微晶纤维素薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水-丙酮-10%氨溶液(35:20:22.5:15:7.5)为展开剂,展开后晾干,喷以间苯二酚乙醇盐酸溶液(取间苯二酚0.5g,加80%乙醇溶液100ml使溶解,加盐酸5ml,摇匀)。在105?加热5分钟,使显色,在色谱图中,应显示三个清晰分离的斑点。再精密吸取供试品溶液、对照品溶液(1)与对照品溶液(2),分别点于同一微晶纤维素薄层板上,照上述色谱条件试验。供试品溶液如显杂质斑点,不得多于2个,并分别应与对照品溶液(1)、(2)主斑的位置相同,其斑点颜色与相应的对照品溶液主斑比较,不得更深(各0.5,)。
水分 取本品,照水分测定法(中国药典2005年版二部附录?M第一法)测定,含水分不得过12.0%(果糖-1,6-二磷酸三钠盐)或应为24.0%,27.0%(果糖-1,6-二磷酸三钠盐八水合物)。
铁盐 取本品1.0g,加水35ml溶解后,加稀盐酸溶液3ml,过硫酸铵30mg与30%硫氰酸铵溶液3ml,加水稀释至50ml,摇匀,加正丁醇10ml,振摇,放置,醇层如显色,与标准铁溶液1.0ml制成的对照液比较,不得更深(0.001,)。
重金属 取本品1.0g,加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量使溶解成25ml,依法检查(中国药典2005年版二部附录?H第一法),含重金属不得过百万分之十。
砷盐 取本品2.0g,加盐酸5ml与水23ml溶解后,依法检查(中国药典2005年版二部附录?J第一法),应符合规定(0.0001%)。
蛋白质 取本品1.0g(以无水物计算),加水10ml溶解后,逐滴加入30%磺基水杨酸溶液2ml,不得产生浑浊。
异常毒性 取本品,加注射用水制成每1ml中含16mg(以无水物计算)的溶液,依法检查(中国药典2005年版二部附录?C),按静脉注射法给药,在15秒内匀速注射完毕,应符合规定(供注射用)。
热原 取本品,加注射用水制成每1ml中含100mg(以无水物计算)的溶液,依法检查(中国药典2005年版二部附录?D),剂量按家兔体重每1kg缓缓注射6ml,给药速度控制在5,6分钟,应符合规定(供注射用)。
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无菌 取本品7.0g,加灭菌水50ml使溶解,用薄膜过滤法处理后,依法检查(中国药典2005年版二部附录?H),应符合规定(供注射用)。
可见异物 称取本品5份,每份5g,分别置洁净透明的专用玻璃容器内,加水溶解并稀释至50ml,依法检查(中国药典2005年版二部附录?H及《可见异物检查法补充规定》国食药监注,2005,373号)。5份供试品中,均不得检出可见异物。如检出其他可见异物,应不得过5个。如仅有1份不符合规定,另取10份同法复试,均应符合规定(供注射用)。
【含量测定】 可根据不同的酶试剂选择其中一种方法。
1.混悬液酶试剂
(1)试剂 盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/L,pH7.6):取盐酸三乙醇胺18.6g,加水200ml溶解,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液(约18ml)调节pH值至7.6,加水稀释至250ml。或取三乙醇胺17.5g,加水约200ml,加盐酸4ml,混匀,加乙二胺四乙酸二钠3.7g,溶解后,用2mol/L氢氧化钠溶液或2mol/L盐酸溶液调节pH值至7.6,加水稀释至250ml。滤过后4?保存,一周内使用。
还原型辅酶?(NADH)溶液:取NADH二钠盐7mg,溶于2ml盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)中。4?保存。
3-磷酸甘油脱氢酶-磷酸丙糖异构酶混悬液(GDH/TIM):取3-磷酸甘油脱氢酶混悬液(GDH)与磷酸丙糖异构酶混悬液(TIM)适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml约含GDH310U和TIM1550U的溶液。4?保存。
醛缩酶混悬液(ALD):取醛缩酶混悬液(ALD)适量,用3.2mol/L硫酸铵溶液(pH6)稀释成每1ml中约含ALD90U的溶液。
(2)供试品溶液的制备 取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.2mg(按无水物计算)的溶液。
(3)测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.0ml,供试品溶液0.1ml,还原型辅酶?溶液0.05ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置1cm吸收池中,摇匀,放置15分钟;另取盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)3.15ml,甘油磷酸脱氢酶/磷酸丙糖异构酶混合混悬液0.02ml,置另一吸收池中,摇匀,作为空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录?A),在340nm波长处测定供试品溶液的吸光度A,再在每池中加醛缩酶混悬液1
0.02ml,摇匀,于20?,25?放置约5分钟,在340nm波长处测定供试品池的吸光度,直至吸光度基本不变读取吸光度A。求出吸光度差值ΔA(ΔA=0.9937A-A),按下式计算,即得。 212
,,3.19,406.06,稀释倍数果糖二磷酸钠%,,,100%30.1,W6.29,10,2 式中: 0.9937为3.17/3.19
3.19为样品池中溶液的最终体积(ml)
3,6.29 10为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数
2为果糖二磷酸钠反应系数
406.06为果糖二磷酸钠三钠盐的分子量(CHNaOP) 6113122
0. 1为供试品溶液加入体积(ml)
W为供试品的取样量(mg)(以无水物计算)
2(固体复合酶试剂
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(1)试剂 空白酶溶液:取固体复合酶(酶活力测定方法见附件)60mg,用盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)溶解并稀释至20ml。垂熔漏斗过滤, 4?保存,两天内使用。
测定酶溶液:取空白酶溶液10ml,加还原型辅酶?(NADH)3.0mg,溶解后4?保存,两天内使用。
(2)供试品溶液的制备 取本品适量,精密称定,加水溶解并制成每1ml约含0.4mg(按无水物计算)的溶液。
(3)测定法 精密量取盐酸三乙醇胺缓冲液2ml,测定酶溶液1ml,置石英吸收池中;另精密量取上述缓冲液2ml,空白酶溶液1ml置另一吸收池,作为空白,摇匀,静置15分钟,照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录?A),在340nm波长处测定吸光度A。各池再分别精1密加入供试品溶液0.1ml,摇匀, 于20?,25?放置10分钟, 在340nm波长处测定,直至吸光度基本不变,读取吸光度A。求出吸光度差值ΔA(ΔA= A-1.0333A),按下式计算,即得。 212
,,3.0,406.06,稀释倍数果糖二磷酸钠%,,,100%36.29,10,20.1,W
式中 3.0为加入供试品溶液前样品池中溶液的体积(ml)
3,6.29 10为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数
2为果糖二磷酸钠反应系数
406.06为果糖二磷酸钠三钠盐的分子量(CHNaOP) 6113122
0.1为供试品溶液加入体积(ml)
W为供试品的取样量(mg) (以无水物计算)
【类别】低磷酸血症用药。
【贮藏】密封,在阴凉处保存。
【制剂】(1)注射用果糖二磷酸钠(2)果糖二磷酸钠注射液
(3) 果糖二磷酸钠片 (4)果糖二磷酸钠胶囊
(5)果糖二磷酸钠口服溶液
附件:固体复合酶的活力测定
复合酶活力系指每1mg酶每1分钟催化果糖二磷酸钠的μg数。每1mg固体复合酶活力应不得低于40μg。
试剂的制备
(1) 盐酸三乙醇胺缓冲液(0.4mol/L,pH7.6):见含量测定项下。
(2) 复合酶溶液:取固体复合酶0.1g,用盐酸三乙醇胺缓冲液(pH7.6)溶解并稀释至10ml。垂熔漏斗过滤, 4?保存。
(3) 还原型辅酶?(NADH)溶液:取还原型辅酶?6.5mg, 用盐酸三乙醇胺缓冲液溶解并稀释至50ml。
(4) 果糖二磷酸钠溶液:取果糖二磷酸钠0.3g(按无水物计算),用水溶解并稀释至10ml。 测定法
取石英吸收池两只,一只加还原型辅酶?溶液2.99ml和果糖二磷酸钠溶液10μl,作为样
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品池;另一只加盐酸三乙醇胺缓冲液2.99ml和果糖二磷酸钠溶液10μl,作为空白池, 摇匀,静置5分钟, 照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录?A),在340nm波长处测定吸光度。向样品池中加入复合酶溶液40μl, 在20?,25?立即摇匀并准确记时,于1、2、3、4、5分钟分别测定吸光度,以时间为横坐标,吸光度为纵坐标作图,取近似直线部分的斜率(即平均每分钟吸收度的差值ΔA)按下式计算复合酶的活力。
406.06,,31000,,,36.29102,复合酶活力,
W
3,式中:6.29 10为还原型辅酶?(NADH)的摩尔吸收系数
3为反应溶液体积(ml)
406.06为果糖二磷酸钠三钠盐的分子量(CHNaOP) 6113122
1000为毫克转化为微克(μg)
2为果糖二磷酸钠反应系数
W为加入样品池中的酶溶液毫克数(mg)
复合酶活力系指每毫克酶每分钟催化果糖二磷酸钠的微克数(μg/分钟/mg),应不少于40微克。
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