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菌落总数检验步骤.doc 菌落总数检验步骤 第一法平板菌落计数法 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品:称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1 :10 的样品匀液。 6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1: 10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液), 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。 6.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ? 的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ??1 ? 恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 6.2 培养 6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ??1 ? 培养48h?2h 。水产品30 ??1 ? 培养72h?3h. 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。 6.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony - forming units , CFU )表示。 6.3.1 选取菌落数在30 CFU~300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。 6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 7 结果的表述 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克(或毫升)中菌落总数结果。 7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(l )计算: N=?C/(n1+0.1n2)d……………………(1 ) 式中: N ― 样品中菌落数; ?C ― 平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和; nl ― 第一个适宜稀释度平板上的菌落数; n2 ― 第二个适宜稀释度平板上的菌落数; d ― 稀释因子(第一稀释度)。 7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。 7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30~300 之间，其中一部分小于30 或大于300 时，则以最接近30 或300 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 7.2 菌落总数的 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 7.2.1 菌落数在100 以内时，按“四舍五人”原则修约，采用两位有效数字报告。 7.2.2 大于或等于100 时，第三位数字采用“四舍五人”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替位数;也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五人”原则修约后，采用两位有效数字。 7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。 7.2.5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。 第二法菌落总数Petrifilm TM测试片法 8 检验程序 除将平板计数琼脂培养基改成PetrifilmTM 菌落总数测试片外，其他与第5 章相同。 9 操作步骤 9.1 样品的稀释 按照6.1.1~6.1.2 制备1:10 的样品匀液后，用1 mol/L 氢氧化钠(NaOH )或1 mol/L 盐酸( HCL )调节pH 至6.6~7.2 。 9.2 接种 根据对样本污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液进行检验。将测试片置于平坦实验台表面，揭开上层膜，用吸管或微量移液器吸取1 mL 样品匀液，垂直滴加在测试片的中央，将上层膜盖下，允许上层膜直接落下，但不要滚动上层膜，将压板(凹面底朝下)放置在上层膜中央，轻轻地压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养膜上，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1 min 以使培养基凝固。每个稀释度接种两张测试片。 9.3 培养 将测试片的透明面朝上，水平置于培养箱内。可堆叠至20 片，培养温度和时间同6.2 。 9.4 计数 9.4.1 培养结束后立即计数，可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、PetrifilmTM 自动判读仪计数。选取菌落数在30 ~300 之间的测试片计数。 9.4.2 计数所有红色菌落。细菌浓度很高时，整个测试片会变成红色或粉红色，将结果记录为“多不可计”。 9.4.3 有时，当细菌浓度很高时，测试片中央没有可见菌落，但圆形培养膜的边缘有许多小的菌落，其结果也记录为“多不可计”;进一步稀释样品可获得准确的读数。 9.4.4 某些微生物会液化凝胶，造成局部扩散或菌落模糊的现象。如果液化现象干扰计数，可以计数未液化的面积来估算菌落数。 10 结果的表述 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下: 3.1 恒温培养箱:36 ??1 ? ，30 ??1 ? 。 3.2 冰箱:2 ?~5 ? 。 3.3 恒温水浴箱:46 ??1 ? 。 3.4 天平:感量0.1g 。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管:1 mL (具0.01mL 刻度)、10mL (具o.lmL 刻度)或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶:容量250 mL 、500 mL 。 3.9 无菌培养皿:直径90 mm 。 3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3.11 放大镜或(和)菌落计数器或PetrifilmTM1)自动判读仪。 4 培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基 4.2 磷酸盐缓冲液 4.3 无菌生理盐水:称取8.59 氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ? 高压灭菌15 min 。 4.4 1 mol/L 氢氧化钠(NaOH ) :称取40g 氢氧化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中。 4.5 1 mol/L 盐酸(HCl ) :移取浓盐酸90 mL ，用蒸馏水稀释至1 000 mL 。 4.6 PetrifilmTM 菌落总数测试片和压板。