KDY-9820凯氏定氮仪操作规程
1 KDY-9820凯氏定氮仪操作规程 2
3 一、原理
4 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分5 解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以6 硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 7
8 二、试剂
9 1( 35%NaOH溶液:
10 35gNaOH溶于65mL水。
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12 2( 2%硼酸溶液:
13 2g HBO溶于100mL水。 33
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15 3( 甲基红—溴甲酚绿混合指示剂:
16 (参照GB/T 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备) 17 溶液?:称取0.1 g 溴甲酚绿，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95%)稀释至100mL 18 溶液?:称取0.2 g 甲基红，溶于乙醇(95%)，用乙醇(95% )稀释至100mL 19 取 30 m L溶液I, 10mL溶液?，混匀。
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21 4(盐酸标准滴定溶液:
22 (参照GB/T 601-2002 化学试剂 标准滴定溶液的制备)
23 4.1配制
24 按
表
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1的规定量取盐酸，注入1000m L水中，摇匀。
25 表1
盐酸标准滴定溶液的浓度盐酸的体积V/mL
[c(HCl)]/(mol/L)
0.05 4.5
0.10 9.0 26
27 4.2标定
28 按表2的规定称取于270?- 300?高温炉中灼烧至恒重的工作基准试剂无水碳酸29 钠，溶于50m L水中，加10滴溴甲酚绿-甲基红指示液，用配制好的盐酸溶液滴30 定至溶液由绿色变为暗红色，煮沸2 min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。同31 时做空白试验。
32 表2
盐酸标准滴定溶液的浓度工作基准试剂无水碳酸钠的质量m/g
[c(HCl)]/(mol/L)
0.05 0.10
0.10 0.20 33
34 盐酸标准滴定溶液的浓度[c(HCl)]。数值以摩尔每升(mol/L)表示，计算公式如下:
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m，100035 c(HCl),(V,V)M12
36 式中:
37 m ——无水碳酸钠的质量的准确数值，单位为克(g);
38 V——盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL); 1
39 V——空白试验盐酸溶液的体积的数值，单位为毫升(mL) 2
140 M ——[M () = 52.994]，单位为克每摩尔(g/mol)。 NaCO232
41 注:盐酸浓度根据样品蛋白含量自行选择。
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43 5(催化剂:
44 硫酸钾:无水硫酸铜=10:1(w/w)
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46 6(铬酸洗液:
47 将10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，加热使其溶解。然后边搅48 拌边慢慢注入180ml浓HSO。 24
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50 三、实验步骤:
51 (一)、消化
52 称取0.2g干燥样品(精确到0.0001g)移入干燥消煮管中。加入0.33g催化剂及53 10ml硫酸，稍摇匀后于管口放一小漏斗。放入消化炉中，温度升至300?后持续1h，54 再升温至400?消化4h。至液体呈无色澄清透明后，冷却。加入10mL蒸馏水稀释55 样品，冷却至室温。
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57 (二)、蒸馏
58 1( 蒸馏水桶中加入10L去离子水，不得有气泄露。
59 配制35%NaOH溶液3至5L加入碱桶中，不得有气泄露。 60 配制2%硼酸溶液3至5L加入酸桶中，不得有气泄露。
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62 2( 打开冷凝水和电源开关。等待2min后，检查液桶内空气是否充满，液桶鼓胀63 即可。
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65 3( 检查空消煮管和三角瓶是否正确放置在托架上。按硼酸键，使硼酸液能够加到66 三角瓶中，待正常后再按硼酸键停止。按加碱键，使碱液能够加到消煮管中，待正67 常后再按加碱键停止。按蒸馏键，一般2-4min，蒸馏正常即可。 68
69 4( 按转换键，将加硼酸液时间设定为6s，加碱液时间设定为5s。将空三角瓶放在70 托盘上，有样品的消煮管放在托架上，要与上端的橡胶塞装紧。按转换键，仪器自71 动蒸馏。蒸馏完毕时，会发出提示响声。
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73 5(测定结束后，用去离子水冲洗橡胶塞、蒸馏管及硼酸管，将空消煮管和三角瓶正74 确放置在托架上。关闭冷凝水及电源，拔出电源插头。
2
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77 (三)、滴定
78 取下三角瓶，加入10滴溴甲酚绿-甲基红指示液。用标准盐酸滴定液滴定至灰79 色，若过量一滴则溶液变红。(可参考附图)
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81 (四)、计算
1.401，M，F82 粗蛋白含量:P(%),(V-V)0W
83 其中:
84 M——标准盐酸滴定液摩尔浓度(mol/L)
85 W——样品重量(g)
86 V——样品滴定标准盐酸消耗量(mL)
87 V——空白样品滴定标准盐酸消耗量(mL) 0
88 F——粗蛋白转换系数，一般为6.25
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90 四、注意事项:
91 1(消煮管均用铬酸洗液清洗，去离子水润洗，干燥后使用。
92 2(样品称量前干燥恒重。
93 3(加碱量和加酸量根据样品蛋白含量调整。加碱后消煮管内液体颜色应变为咖啡色94 或褐色。如果仍为乳白或浅蓝色表明碱量不够，需手动加碱。蒸馏完毕后，保证液95 量不超过管体积的1/3。
96 4(每个样品至少重复两次，相对标准偏差应
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