解酒护肝饮对酒精性肝病大鼠抗氧化损伤的实验研究

福建 中医药 2007年 l0月 第 38卷 第 5期 Fujian Journal of TCM October 2007，38(5) ·实验研究 · 解酒护肝饮对酒精性肝病大鼠抗氧化损伤的实验研究 徐慧明 ，李秀娟 ，杨牧祥 (1．上海市静安区中心医院，上海 200032；2．河北医科大学，河北 石家庄 050070) 关键 词：解酒护肝饮 ；酒精性肝病 ；肝脏指教 ：谷胱甘肽 ；丙二醛 中图分类号：R 文献标识码 ：A 文章编号：100o一338X(2007)05--0044—02 酒精通过多种机制对肝细胞造成损伤，大致可 分为两种独立的又相互有关联的途经，包括酒精对 肝细胞的直接损伤以及由内毒素和细胞因子激活、 免疫介导、氧化应激、纤维生成造成的间接损伤 。 在这些肝细胞毒性机制之上的酒精摄入损害了肝细 胞再生[3]，进一步出现肝坏死、肝纤维化和肝硬化。 解酒护肝饮是杨牧祥教授多年来临床经验的积累和 总结，对酒精性肝病有良好治疗作用的验方[4]。本研 究通过动物实验 ，观察血清中的谷胱甘肽(GSH)和 丙二醛(MDA)的水平．阐明抗氧化损伤是解酒护肝 饮治疗酒精性肝病的作用机制之一。 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1．1 材料：①动物：SD雄性大鼠48只，体重 180～ 200 g，由河北省实验动物中心提供，实验动物合格 证号：DK0406—0061。②药物：本实验所用中药均购 于河北省石家庄乐仁堂药店。经河北医科大学中医 学院中药系鉴定符合国家药典MATCH_ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 _1714193883298_0。取解酒护肝饮 (按方子比例配药)按常规方法煎煮，最后水浴浓缩 ， 等效剂量组浓缩至 160 ml(含生药 1 kg／L)．高效剂 量组浓缩至40 rIll(含生药 4 kg／L)；葛花解酲汤(根 据《脾胃论》中配方配制)常规方法煎煮，水浴浓缩至 135 ml(含生药0．75 kg／L)；益肝灵(北京市第四制药 厂，批号：104055)，以0．5％羧甲基纤维素钠溶解 ，配 制成悬浊液(浓度：3．85 s／L)备用。③主要试剂：MDA 试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：990824)， GSH试剂盒 (南京建成生物工程研究所 ，批号 ： 990904)。56度红星二锅头(北京红星二锅头酒厂生 产)。④主要仪器：ACS—EAS电子计重称(北京市菲 姆斯科技开发公司)：722型光栅分光光度计(上海 精密科学仪器有限公司)：MSE一25型高速冷冻离心 机(上海安亭科学仪器厂)；LAUDA—C，型循环恒温 水浴箱(泰克仪器有限公司)；FJ一2021型 放射免 疫计数仪(国营二六二厂)；分析天平(A&D．Compa— ny．Limited．Tokyo．Japan)；TDL一5一A型台式大容量离 心机(上海安亭科学仪器厂)。 收稿日期：2007—08—11 基金项目：河北省卫生厅资助项目(99O25) 作者简介：徐慧明(1974一)，男，主治医师。 1．2 实验方法 1_2_1 分组：48只雄性大鼠适应性饲养 1周后 。随 机分为6组，正常组(n=8)、模型组(n=9)、解酒护肝 饮低剂量组(n=8)(简称低剂量组)、解酒护肝饮高剂 量组(n=8)(简称高剂量组)、葛花解酲汤组(n=7)(简 称葛花组)、益肝灵组(n=8)。其中葛花解酲汤组灌胃 时大鼠死亡 1只。 1．2_2 造模与给药：造模方法参照李氏 和何氏等 [6]造模方法并加以改进。将 56度红星二锅头用蒸馏 水配制成40度白酒备用。①正常组 ：自由饮水和摄 食 ，饲养6周。②模型组：除正常饲养外，每日按 9 g／ kg体重配制的白酒分 2次灌胃，连续 4周 ，再灌胃 蒸馏水2周，1 d分2次灌胃。③高剂量治疗组：除正 常饲养外。每日以9 g／kg体重配制的白酒分 2次灌 胃，连续 4周，再灌胃高剂量解酒护肝饮 2周．1 d分 2次灌胃。④低剂量治疗组：除正常饲养外。每日以 9 g／kg体重配制的白酒分两次灌胃。连续4周．再灌 胃低剂量解酒护肝饮 2周。1 d分 2次灌胃。⑤葛花 组：除正常饲养外。每 日以 9 s／kg体重配制的白酒 分两次灌胃．连续 4周，再灌胃葛花解酲汤2周。1 d 分两次灌胃。⑥益肝灵组：除正常饲养外。每日以9 g／kg体重配制的白酒分 2次灌胃，连续 4周，再灌胃 益肝灵乳剂 2周，1 d分 2次灌胃。 1．3 观察指标：血清分离及血生化指标的检测：动 物禁食 12 h后，称重，以7％水合氯醛 1 rIll／2o0 g腹 腔注射麻醉大鼠，断头取血 。静止 2h后，离心(3500 r／min。5 min)，分离血清 。一80℃储存备用 。血清 MDA、GSH检测按试剂盒的 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 操作进行。 肝脏指数：动物断头后．迅速剖取肝脏，用预冷 的生理盐水冲洗 ，滤纸吸湿后。即称量其湿重，并计 算肝脏指数(肝湿重／体重×100％)。同时在距肝脏 边缘 0．5 mm处取肝脏组织块，10％甲醛固定 ，然后 石蜡包埋、切片、HE染色．供病理学观察。 1．4 统计学方法：运用 SPSS 10．0统计软件进行单 因素方差分析，组问比较采用q检验。 2 结 果 2．1 肉眼观察正常组大鼠肝脏色鲜红，被膜光滑。 模型组大鼠肝脏色红带黄。色泽发暗。有的与邻近器 维普资讯 http://www.cqvip.com 第 5期 徐慧明等：解酒护肝饮对酒精性肝病大鼠抗氧化损伤的实验研究 45 官轻度粘连。光镜观察正常组肝组织结构完整，细胞 索以中央静脉为中心向四周呈放射状整齐排列，肝 小叶轮廓清晰，肝细胞呈多边形 ，细胞分界清晰，核 圆而清晰。位于细胞中央，胞质丰富；模型组肝小叶 内出现大量呈空泡样改变的肝细胞 ，胞质疏松 ，核固 缩变形．出现肝细胞崩解坏死；治疗组肝组织结构大 体正常。肝小叶轮廓清晰，细胞索以中央静脉为中 心，向四周呈放射状整齐排列，肝窦扩张，肝细胞呈 现多边形。肝细胞浆中偶见脂肪滴，多见核双生肝细 胞。 2．2 对大鼠肝脏指数的影响 ： 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1示：各组均低于 模型组，有显著性差异(P<0．05)。 表 1 治疗实验大鼠肝脏指数和血 清 MDA、GSH的组问比较 注 ：与模型组相 比 ，1)P<0．05；与高剂量组相 比，2)P<0．05；与低剂量组相 比，3)P<0．05；与葛花组相 比 ，4)P<0．05； 与益肝灵组相 比 ，5)P<0．05 2．3 对大鼠血清 GSH的影响：表 1示 。模型组低于 正常组，有显著性差异(P<0．05)；经给药，治疗各组 均高于模型组 ，有显著性差异(P<0．05)；血清 GSH 高剂量组高于各组，有显著性差异(P<0．05)；低剂量 组低于益肝灵组、葛花组，有显著性差异(P<0．05)。 2．4 对大鼠血清 MDA的影响：表 1示。模型组高于 正常组，有显著性差异(P<0．05)；经给药，治疗各组 均低于模型组 ，有显著性差异(P<0．05)；血清 MDA 葛花组高于高剂量组，有显著性差异(P<0．05)。 3 讨 论 酒精在体内通过氧化反应进行代谢。大量、长期 饮酒产生了大量 自由基。消耗还原型 GSH。且肝细胞 膜结构中不饱和脂肪酸增加，使过氧化反应增强。酒 精的代谢产物乙醛在乙醛脱氢酶活性降低时。乙醛 未被氧化进入血内。通过黄嘌呤氧化酶转变为超氧 化物 ，导致脂 质过氧化 ，破坏细胞膜脂质 。促进 肝损 伤。出现脂肪变时。由于肝实质细胞脂肪滴积聚。导 致肝实质细胞肿胀 ，甚则局部肝细胞崩解、坏死。肝 实质细胞减少而肝脏重量下降。相应肝脏指数明显 降低，并且表现上述形态学变化。 GSH体液中含量最丰富。是维持生物大分子一 SH和一S—S一氧化一还原平衡的关键分子．已有研究表 明，谷胱甘肽与体液的氧化一还原平衡有着非常紧密 的内在联系[7]。GSH是人体内抗氧化的重要物质。它 能与自由基直接反应，清除自由基。MDA是脂质过 氧化的终产物，它既能反映人体内氧化反应。也能做 为损害因子对人体进行损伤。 本研究中模型组血清 GSH含量降低。各治疗组 血清 GSH含量上升：模型组 MDA升高．各治疗组血 清 MDA降低 。说明大鼠体内氧化反应剧烈。产生了 大量氧自由基，经过解酒护肝饮治疗 。显著增加 GSH 的含量．提高 GSH活性。使有足够的GSH对抗过氧 化反应 ；且解酒护肝饮通过抑制脂质过氧化反应 ，各 治疗组 MDA下降。 解酒护肝饮是由葛根、葛花、枳棋子、虎杖、茵 陈、白术、丹参、白茅根等药组成。葛根、葛花功善退 热、解肌、生津、解酒，枳枳子主消酒，二者共为解酒 之要药．嵇氏等C8 3研究枳棋子对乙醇所致小鼠肝脏 损伤的预防作用发现。枳枳子水提取液预先灌 胃给 药能阻止乙醇所致的小 鼠肝脏 MDA升高和 GSH 下降。解酒护肝饮通过各药相互配伍。清热利湿。疏 肝利胆，化瘀通络，健脾和胃益气 ，共奏解酒护肝之 功 。 总之。解酒护肝饮是通过增强人体的保护因素 (还原剂)和降低损伤因素(氧化产物及自由基)来对 抗由酒精氧化反应对肝脏的损伤。肝脏指数及病理 学出现相应改变，达到治疗酒精性肝病目的。 参考文献 ： [1] SIEGMUND S V，DOOLEY S，BRENNER D A．Molecular meeh- o31isms of alcohol-induced hepatic fibrosis[J]．Dig Dis，2005，23 (3-4)：264—274． [2] LIEBER C S．Alcoholic liver injury：pathogenesis and therapy in 2001[J]，Pathol Biol(Paris)，2001，49(9)：738—752． [3] BRADHAM C A，PLUMPE J，MANNS M P，et a1．Mechanisms of hepatic toxicity I TNF-induced liver injury[J]．Am J physiol。 1998，275(3)：387—392． [4] 杨牧祥，李荣彦，田元祥 ，等．解酒护肝饮治疗酒精性肝病的 临床疗效观察[J]．中国中医药信息杂志，2001，8(1)：59—60． [5] 李东良，王玉玫．大鼠酒精性肝损伤模型的建立及病理学观 察[J]．实用肝病杂志，1998，3(4)：207—208． [6] 河福金，贲长恩，王德福．小柴胡汤对大鼠酒精性肝损伤的防 护作用[J]．中西医结合肝病杂志，1994，4(3)：19—21． [7] MORIARTY S E，SHAH J H，LYNN M，et a1．Oxidation of glu- tathione and eysteine in human plasma associated with smoking [J]．Free Radie Biol Med，2003，35(12)：1582—1588． [8] 嵇杨，杨平 ，李俊．枳棋子对乙醇所致小鼠肝脏损伤的预防作 用[J]．中药药理与临床 ，2000，16(3)：19—20． 维普资讯 http://www.cqvip.com