大鼠肝脏冷热缺血再灌注损伤钠钾ATP酶钙ATP酶及镁ATP酶与肝细胞死亡方式的研

中国现代普通外科进展 ·基础研究·Fundamental Research· Chin J Curr Adv Gen Surg 2004 年 4 月 第 7 卷 第 2 期 Apr. 2004 Vol . 7 No. 2 大鼠肝脏冷/ 热缺血再灌注损伤钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶及镁 ATP 酶与肝细胞死亡方式的研究 包维民1 　郭永章1 　唐映梅2 　陆晓青1 　孙 　辉1 　赵新文1 1昆明医学院第二附属医院 实验中心 　(云南 　昆明 　650101) 2中山大学附属一院 消化内科 　(广东 　广州 　510080) [作者简介 ]包维民 (19752) ,男 ,博士研究生 ,主要从事肝胆外科专业。地址 :云南省昆明市黄土坡麻园 1 号 (650101) 昆明医学院第二附属 医院实验中心。Tel : (0871) 535128122731 13888515556 E2mail :baoweimin @21cn. com 【摘要】目的 :研究肝脏冷/ 热血再灌注损伤条件下 ,钠钾 ATP酶、钙 ATPATP酶及镁 ATP酶活性与细胞凋 亡和胀亡的关系 ,并探讨减少此类损伤的途径。方法 :建立大鼠肝门部分阻断热缺血 1h 再灌注模型及 大鼠原位肝移植冷缺血 1h 再灌注模型 ,分别于再灌注 0h、1h、12h 和 72h 处死取材 ,测定肝细胞钠钾 ATP 酶、钙 ATP酶及镁 ATP酶活性。用形态学及 Annexin V、PI双染法流式细胞仪定量测定早期细胞凋亡和 胀亡百分数。结果 :与对照组相比 ,冷/ 热缺血 1h(再灌注 0h) 后钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶及镁 ATP 酶活性 均持续显著下降 ,再灌注 1h 达低谷。但热缺血再灌注后 72h 钠钾 ATP 酶活性恢复 ,钙 ATP 酶及镁 ATP 酶活性仍未恢复。冷缺血再灌注后 12h 钙 ATP 酶先恢复活性 ,72h 钠钾 ATP 酶、镁 ATP 酶活性才恢复。 细胞死亡方式 : ①冷缺血再灌注损伤 ,细胞死亡以凋亡为主 ,并于再灌注后 12h 后到顶峰。②热缺血 1h 胀亡细胞显著增多 ,再灌注 1h 后减少 ,细胞死亡方式转为以凋亡为主。结论 :肝脏冷/ 热缺血再灌注损 伤均能导致 3 种 ATP 酶活性下降 ,细胞内离子浓度失衡 ,热缺血期 ATP 酶活性严重下降 ,细胞死亡 ,以 胀亡为主。冷缺血期 ATP酶轻度下降 ,细胞死亡以凋亡为主。术前或术中给予能量物质 ,对提高钠钾 ATP酶、钙 ATP酶及镁 ATP酶活性 ,减轻炎症反应 ,延长肝门阻断时间有利。 【关键词】缺血·再灌注损伤·Na + K+ 交换 ATP酶·Ca2 + ATP酶·Ca2 + Mg2 + ATP 酶·细胞凋亡·细胞胀亡· 大鼠 ,Sprague2Dawley 【中图分类号】R363 【文献标识码】A 【文章编号】100929905 (2004) 0620343204 The effect of c old/ warm isc he mia rep erf usion injury on cell deat h p attern a nd t he activities of Na +2K + A TPase , Mg2 +2A T2 Pase a nd Ca2 + A TPase in liver of rats BAO Wei2min1 , GUO Yong2zhang1 , TANG Ying2mei2 , L U Xiao2qing1 , SUN Hui1 , ZHAO Xin2wen1 1Department of Center Laboratory of General Surgery , The Second Affiliated Hospi2 tal of Kunming Medical Colleges ( Kunming 650101 , China) 2Department of Gastroenterology , The First Affiliated Hospital of Zhongshan Uni2 versity ( Guangzhou 510080 , China) 343 【ABS TRACT】O bj e c t i v e :To seek effective way to reduce ischemia / reperfusion (I/ R) injury , we investigate the relation between the activities of ion channel such as Na + 2K+ ATPase , Ca2 + ATPase and Mg2 + ATPase and the percentage of apoptosis hepatocytes and oncosis hepatocytes in rat liver following cold/ warm ischemia / reperfusion . M e t h o d s :Models of warm ischemia/ reperfusion of partial liver vein and hepatic artery of ischemi2 a , cold ischemia/ reperfusion of orthotopic liver transplantation were made . The activities of Na + 2K+ ATPase , Ca2 + ATPase and Mg2 + ATPase were examined at 1h , 12h and 72h following reperfusion , and at 1h of ischemi2 a . And the percentage of apoptosis hepatocytes and oncosis hepatocytes were observed with method of mor2 phology and Annexin V , PI stain. R e s u l t s :In groups of warm ischemia , the activities of ATPases reduced im2 mediately following 1h of ischemia , felling into the lowest at 1h of reperfusion. And oncosis was the dominant death model of hepatocytes during the ischemia phase of 1h. After reperfusion , the activities of Na + 2K+ ATPase increased and the death model of hepatocytes conversed into apoptosis , but the activities of Ca2 + ATPase and Mg2 + ATPase were still on low level after 72h of reperfusion. In cold ischemia groups , the activities of ATPases decreased continually , felling into lowest at 1h of reperfusion. And apoptosis was the dominant death model of hepatocytes during the ischemia and reperfusion phase . The activities of ATPase increased after reperfusion , but the recovery of Ca2 + ATPase was faster than that of Na + 2K+ ATPase and Mg2 + ATPase . C o n c l u s i o n :Both cold I/ R injury and warm R/ I injury can make the activities of ATPase decrease , leading to imbalance of ionic concentration in cell , causing oncosis in period of warm ischemia and apoptosis in the period of cold ischemia . It would be useful to improve the activities of Na + 2K+ ATPase , Ca2 + ATPase and Mg2 + ATPase for reducing the I/ R injury , if the energy was addministrated before operation or during operation. 【KEY WORDS】Ischemia ·Reperfusion injury·Na + 2K+ 2Exchanging ATPase ·Ca2 + 2Transporting ATPase ·Ca2 + Mg2 + 2ATPase·Apoptosis·Oncosis·Rats ,Sparague2Dawley P 　　肝脏缺血再灌注损伤有热缺血和冷缺血。两种条件下 细胞代谢 ,能量状态变化 ,治疗和处理方法不同。本研究利 用大鼠肝门阻断再灌注模型热缺血组及大鼠原位肝移植再 灌注模型冷缺血组 ,探讨热/ 冷缺血再灌注条件下 ,钠钾 ATP 酶、钙 ATP酶及镁 ATP酶活性的变化及其对细胞凋亡和胀亡 的影响。 11 　材料与方法 111 　建立大鼠肝脏冷/ 热缺血再灌注损伤模型 　采用成年、 清洁级 SpragueDawley大鼠 (昆明医学院实验动物中心提供) , 体重 200～300 g ,雌雄不限。实验前 12h 禁食 ,自由饮水。动 物随机分为 11 组。对照组 5 只开腹后轻微翻动肝脏即处死 取材。其余分为两大组分别制做大鼠肝门部分阻断热缺血 1h 再灌注模型及大鼠原位肝移植冷缺血 1h 再灌注模型。并 于再灌注 0h、1h、12h 和 72h 处死取材。取样后所有样本处理 均在低温条件下完成。大鼠肝脏热缺血再灌注模型参照 Ohmori 报道的方法[1 ] ,制备大鼠 70 %肝脏 1h 缺血再灌注模 型。术中注意保持大鼠腹腔内温度。大鼠原位肝移植模型 参照段伟东报道的方法稍加改进[2 ] 。供体采用腹主动脉灌 注法 , 热 缺 血 时 间 接 近 0min , 供 肝 切 取 后 立 即 保 存于0～4°C的林格液中 ,移植肝冷缺血时间约为 (60 . 9 ± 5. 6) min。受体手术无肝期为 (18 ±4. 9) min。 112 　肝细胞钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶及镁 ATP 酶活性测定 　 采用定磷法 ,试剂盒购自南京建成生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 研究所 ,按说明 书操作。ATP酶活性以每小时每毫克组织蛋白中 ATP 酶分 解 ATP产生 1μmol 无机磷的量作为一个 ATP 酶活力单位 ,即 (μmol·mg - 1·h - 1) 。 113 　细胞凋亡和胀亡 11311 　形态学鉴别 　采用透射电镜观察。 11312 　定量学测定 　取肝组织 1g ,生理盐水洗净 ,剪碎 ,振 荡后 300 目筛网过滤 ,收集细胞 ,制成细胞悬液 ,并调整细胞 浓度至 (1 ×106) 个/ ml。加标记有异硫氰酸荧光素联结素 V (AnnexinV2FITC)与碘化丙锭 (propdiumiodide , PI) (均购自法国 Immunotech公司) ,混匀双染色。避光冰浴 10min。使用 Coul2 ter EPICS2XL 流式细胞仪上机检测 ,计数 1000 个细胞。结果 判断 :正常活细胞 ,Annexin V、PI 均低染 ;早期胀亡细胞 ,An2 nexin V、PI均高染 ;早期凋亡细胞 ,Annexin V 高染、PI低染。 114 　统计学 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 　用 SPSS9. 0 软件包进行分析 ,取双侧检验 P < 0. 05 为差异有统计学意义。 2 　结 　果 211 　肝脏冷/ 热缺血再灌注不同时间后钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶及镁 ATP酶活性比较 　再灌注后 3 种酶均持续下降 ,并于 再灌注 1h 达低谷。热缺血再灌注 72h 钠钾 ATP 酶活性恢 复 ,钙 ATP酶及镁 ATP酶活性未恢复。冷缺血再灌注 12h 钙 ATP酶先恢复活性 ,72h 钠钾 ATP酶、镁 ATP酶才恢复。同期 三种酶活性冷缺血再灌注组均大于热缺血再灌注组。见表 1。 443 中国现代普通外科进展 　2004 年 12 月 　第 7 卷 　第 6 期 　 表 1 　肝脏冷/ 热缺血再灌注钠钾ATP酶、钙ATP酶及镁ATP 酶活性的测定 (μmol·mg - 1·h - 1) 组别 只数 肝移植冷缺血再灌注 钠钾ATP酶 钙ATP酶 镁ATP酶 肝门阻断热缺血再灌注 钠钾ATP酶 钙ATP酶 镁ATP酶 对照组 5 4. 57 ±0. 70 3. 83 ±0. 89 4. 69 ±0. 59 4. 57 ±0. 70 3. 83 ±0. 89 4. 69 ±0. 59 再灌注组 0 5 2. 35 ±0. 47 3 2. 09 ±0. 73 3 2. 16 ±0. 60 3 1. 15 ±0. 21 3 1. 29 ±0. 38 3 1. 39 ±0. 31 3 1 5 2. 30 ±0. 44 3 2. 10 ±0. 15 3 2. 05 ±0. 63 3 0. 66 ±0. 24 3 0. 91 ±0. 30 3 1. 04 ±0. 22 3 12 5 2. 90 ±0. 44 3 3. 04 ±0. 64 3. 57 ±0. 66 3 1. 26 ±0. 37 3 1. 20 ±0. 23 3 2. 12 ±0. 73 3 72 5 3. 52 ±0. 80 3. 51 ±1. 10 4. 67 ±0. 93 3. 20 ±1. 18 2. 07 ±0. 46 33. 06 ±0. 77 3 3 　3 P < 0. 05 VS对照组 212 　冷/ 缺血再灌注后细胞凋亡和胀亡情况 　见图 1。 图 1 　细胞凋亡和胀亡形态学透射电镜观察 左 :早期胀亡细胞及细胞器全面肿胀是胀亡的特征性表 现 ( ×6000) 右 :凋亡细胞表现为核固缩、胞质浓结、细胞体急剧变 小、细胞骨架解体 ( ×6000) 　　细胞凋亡和胀亡的流式细胞定量学测定与对照组比较 : 热缺血组再灌注 0h 胀亡细胞显著增多 ,再灌注 1h 后减少 , 12h 恢复如常 ;1h 凋亡细胞显著增多 ,其后逐渐下降但 72h 仍 高于对照组。大鼠肝移植冷缺血组再灌注 0h 后凋亡细胞显 著增多 ,再灌注后 1h 继续增多 ,并于再灌注后 12h 后达顶峰 , 72h 逐渐下降 ;同期胀亡细胞变化不大。见表 2、图 2。 表 2 　肝脏冷/ 热缺血再灌注凋亡细胞和胀亡细胞百分比 ( %) 组别 只数 肝移植冷缺血再灌注 胀亡 凋亡 肝门阻断热缺血再灌注 胀亡 凋亡 对照 5 2. 5 ±1. 82 6. 40 ±1. 57 2. 52 ±1. 82 6. 40 ±1. 57 再灌注组 0 5 2. 7 ±1. 3 13. 5 ±3. 2 3 32. 0 ±5. 9 3 4. 58 ±0. 6 3 1 5 2. 3 ±0. 7 18. 3 ±2. 7 3 26. 6 ±2. 9 3 18. 7 ±2. 4 3 12 5 2. 5 ±1. 4 24. 0 ±8. 2 3 1. 9 ±0. 8 12. 6 ±2. 1 3 72 5 2. 4 ±0. 9 16. 2 ±2. 6 3 1. 7 ±0. 9 11. 6 ±1. 3 3 3 　3 P < 0. 05 VS 对照组 3 　讨 　论 缺血再灌注损伤是肝脏外科最常见的非手术性损伤 ,研 究发现 ,同一病灶中往往存在着两种不同形式的细胞死亡 (固缩或肿胀) ,1995 年 Majno 和 Joris 将以胞质肿胀和核溶解 为主要细胞损伤表现 ,死亡过程不同于凋亡的细胞死亡称之 为胀亡[3 ] 。胀亡是细胞被动死亡 ,表现为以 ATP 耗竭下 细胞离子泵活性丧失 ,膜通透性增加伴随细胞内水份增加、 图 2 　肝细胞 Annexin2V、PI 双染对照组、冷/ 热缺血 1h(再灌注 0h)流 式细胞图例 左 :对照组 Annexin2V、PI 双染 中 :冷缺血 1h Annexin2V、PI 双染 右 :热缺血 1h Annexin2V、PE双染 DNA 随意断裂 ,最终细胞肿胀破裂 ,细胞内容物溢出 ,引起炎 症反应 ,是导致炎症“瀑布”反应的启动因素。而钠钾 ATP 酶、钙 ATP酶及镁 ATP酶是细胞的主要离子泵 ,控制着细胞 内的主要离子浓度 ,在细胞胀亡中具有重要意义。 胀亡和凋亡存在许多相似之处 ,例如都存在双链 DNA 的断裂、染色质凝集、凝胶电泳分析 DNA 片段的梯状分布、 细胞膜损伤、细胞跨膜电位减少等 ,因此过去所用的方法如 TUNEL ,hochest33258 染色 ,凝胶电泳 ,跨膜电位检测都不能有 效的区别两种细胞[4 ] 。目前主要根据其形态学因素及对膜 的损伤不同 ,采取形态学鉴别和 AnnexinV2FITC 与 PI 混匀双 染色两种较为可靠的方法。胀亡细胞的形态学表现为 :早期 细胞肿胀 ,体积增大 ,胞膜起泡 ,通透性增加 ,细胞质空泡化 , 内质网、线粒体肿胀 ,最后细胞膜完整性严重破坏 ,出现胞膜 崩解 ,细胞核溶解。由于胞内容物外溢 ,胀亡细胞周围有明 显炎症反应。凋亡细胞的形态学特征表现为核固缩、胞质浓 结、细胞体急剧变小、细胞骨架解体。由于早期凋亡细胞与 早期胀亡细胞两者细胞膜上磷脂对称性的改变使磷脂酰丝 氨酸 (PS)暴露于细胞膜外 ,PS可特异结合标记有异硫氰酸荧 光素 (FITC)的连接素V(AnnexinV ———FITC) ,但是单独使用这 种方法并不能完全地特异地区别两种细胞 ,而变性染色质着 色的荧光染料 ———碘化丙锭不能进入细胞膜完整的细胞 ,只 能穿过损伤的细胞膜结合在 DNA 双股螺旋链之间。因为早 期凋亡细胞细胞膜完整 ,所以只能结合 AnnexinV ;而早期胀 亡细胞可同时结合上述二种染料 ,正常细胞则两种染料均不 染色 ,PI单染则表明细胞膜完整性完全被破坏 ,这可能是由 于细胞本身损伤太重或是在预处理过程中机械因素 ,导致细 胞膜完全损坏。 钠钾 ATP酶、钙 ATP酶及镁ATP酶在生理条件下又称依 赖 ATP的膜结合蛋白酶。三者对建立跨膜的离子梯度 ,维持 细胞膜电位 ,细胞生理活动 ,控制细胞容量、体温及正常代 谢 ,并为其它离子和营养素的转运提供动力具有重要作用。 缺血再灌注后与对照组相比 ,冷/ 热缺血 1h (再灌注 0h) 后钠 钾 ATP酶、钙 ATP酶及镁 ATP 酶活性持续显著下降 ,再灌注 1h 达低谷。可能原因 (1)当肝脏缺血时 ,肝线粒体供氧不足 , ATP合成减少 ,而耗能并不减少 ,导致细胞内 ATP 浓度下降 , 3 种 ATP酶活性也下降。(2) 再灌注后 ATP 酶活性下降 : ① ATP酶蛋白损伤增加 :再灌注后活性氧自由基 ,细胞内钙离 子超载 ,过度的炎性反应等损伤膜结合蛋白酶。②ATP 酶合 成不足 : . Petr 发现缺血后钠钾 ATP 酶α1 ,α2 ,α3 和β1 亚基 mRNA水平不同程度的下降 ,再灌注后α1 增加 ,同时 ,复流后 的钙超载氧化应激导致其余亚基仍减少[5 ] 。也有研究发现 钙 ATP酶再灌注后合成同样减少。 本研究发现 ,热缺血后细胞以早期胀亡为主 ,原因在于 543 　包维民 ,等 1 大鼠肝脏冷/ 热缺血再灌注损伤钠钾 ATP酶、钙 ATP酶及镁 ATP酶与肝细胞死亡方式的研究 细胞内钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶活性下降必然导致细胞内 Na + 、Ca2 + 超载 ,同时因钠钾 ATP 酶活性下降会引起胞内 Na + 超载 ,后者又激活细胞膜上 Na + 2Ca2 + 交换蛋白 ,使过多 Ca2 + 进入胞内。从亚细胞的角度看 :Na + 超载还会引起线粒 体中 Ca2 + 释放 ,最终导致胞内钙超载。镁 ATP 酶活性下降 会造成细胞内 Mg2 + 减少 ,一方面削弱它对 Ca2 + 增多的生理 拮抗作用 ,另一方面 ,低Mg2 + 本身还可降低细胞内 30 多种酶 的活力 ,抑制能量合成 ,增加细胞膜通透性和减少蛋白质合 成 ,结果造成离子分布失衡 ,细胞内晶体渗透压增高、水增 加、细胞肿胀 ,最终导致细胞胀亡。 再灌注后 ,再灌注还导致过量的氧自由基产生 ,直接损 伤细胞膜 ,细胞膜通透性增加、钙离子内流 ,进一步增高、钙 离子浓度 ,而细胞内钙离子浓度增高又可激活钙离子依赖性 蛋白酶 ,催化黄嘌呤脱氢酶 ( XDH) 转化为黄嘌呤氧化酶 (XOD) , XOD 在有氧条件下能促进次黄嘌呤分解为尿酸同时 产生大量的氧自由基 ,放大损伤效应 ,钙超载可激活钙离子 依赖性的核酸内切酶 ,在核小体 Linker 部位裂解双链 DNA ; 还可激活蛋白酶 C ,使之转移到细胞膜 , G蛋白磷酸化 , G 蛋 白减少 ,胞内 cAMP 增加 ,导致细胞凋亡。胞浆内 Ca2 + 浓度 持续升高 ,还能激活 P2A ,破坏细胞骨架和膜磷脂成分 ,最终 可导致细胞结构的损伤、死亡甚至发生癌变[6 ] 。 研究还发现冷缺血组中 3 种 ATP 酶活性高于同期热缺 血再灌注组 ,原因可能为 : (1) 低温保存使该酶的活性降 低[7 ] ,同时机体代谢率下降 ,ATP 消耗减少 ,避免了剧烈变化 造成的蛋白酶损害。Mitani A 等用荧光微定量技术也证实 , 低温能显著抑制缺氧时所造成的钙离子内流 ,降低细胞内的 钙离子浓度[8 ] 。国内研究也证实低温条件下钠钾 ATP 酶仍 能部分地泵出 Na + 及泵入 K+ ,以减轻细胞内的 Na + 负荷的 作用 ,从而使细胞内的 Na + 减少。(2) 再灌注后 :低温能抑制 氧自由基产生 ,增强机体抗氧化 ,减轻细胞内 ATP 酶的损 害[9 ] 。结合热缺血条件下 ,细胞死亡方式趋向胀亡 ,冷缺血 条件下细胞以凋亡为主 ,提示 ATP酶活性严重下降将导致细 胞胀亡 ,轻度下降则会导致凋亡。当损伤不可避免时 ,如果 在术前或术中给予能量物质 ,提高钠钾 ATP 酶、钙 ATP 酶及 镁 ATP酶的活性 ,则对于减少两类损伤 ,特别是减少胀亡 ,减 轻炎症反应 ,延长肝门阻断时间有利。 参 　考 　文 　献 [1 ]段伟东 , 刘永雄 , 杜国盛 , 等. 三袖套法大鼠原位肝移植模型的 体会[ J] . 中华肝胆外科杂志 ,1999 , 5 (1) :55. [2 ]Ohmori M , Miyashita F , Uchida H , et al . Effect of erythromycin on is2 chemia2reperfusion injury of liver in rats[ J] . Transplant Proc ,2000 ,32 (4) :811 [3 ]Majno G, I Joris. Apoptosis , oncosis and necrosis. An overview of cell death [ J] . Am J Pathol ,1995 , 146 (1) :3. [ 4 ]Van Cruchten S , Van Den Broeck W. Morphological and Biochemical As2 pects of Apoptosis , Oncosis and Necrosis [ J] . Anat Histol Embryol , 2002 ,31 (4) :214 . [5 ]Ostadal P , Elmoselhi AB , Zdobnicka I , et al . Ischemia2reperfusion alters gene expression of Na +2K+ ATPase isoforms in rat heart [ J] . Biochem Biophys Res Commun ,2003 ,306 (2) :457. [6 ]Clapham DE. Calcium signaling[ J] . Cell ,1995 ,80 (2) :259. [ 7 ]Churchill TA , Fuller BJ . Effects of sodium and potassium channel antago2 nists on the energy metabolism of rat liver during cold storage[ J] . Trans2 plantation ,1995 ,59 (6) :904. [8 ]Mitani A , Kadoya F , Kataoka K. Temperature dependence of hypoxia2in2 duced calcium accumulation in gerbil hippocampal slices[ J] . Brain Res , 1991 , 562 (1) :159. [9 ]郭曲练 ,潭秀娟 ,蔡宏伟 ,等. 亚低温对完全性脑缺血再灌注后丙 二醛含量和超氧化物歧化酶的影响[ J] . 中华创伤杂志 , 1997 ,13 (1) :10 (收稿日期 　2004205219) (上接第 342 页) 参 　考 　文 　献 [1 ] Brightman MW , Reese TS. Junctions between intimately apposed cell membranes in the vertebrate brain[ J] . J Cell Biol ,1969 ,40 :6482677. . [2 ]蒋文华 ,脑屏障 ,蒋文化主编. 神经解剖学[ M] . 上海 :复旦大学出 版社 ,2002. 4432444. [3 ]Ueno M ,Tomimoto H ,Akiguchi I ,et al . Blood2brain barrier disruption in white matter lesions in a rat model of chronic cerebral hypoperfusion[ J] . J Cereb Blood Flow Metab ,2002 ,22 (1) :972104. [4 ]Dousset V ,Brochet B ,Vital A ,et al . Lysolecithin2induced demyelination in primates :preliminary in vivo study with MR and magnetization transfer [ J] . Am J Neuroradiol ,1995 ,16 :2252231. [5 ] Pavelko KD ,Van Engalen BG,Rodriguez M. Acceleration in the rate of CNS remyelination in lysolecithin2induced demyelination[ J] . J Neurosci , 1998 ,18 (7) :249822505. [6 ]Aho HJ ,Suonpaa K,Ahola RA ,et al . Experimental pancreatitis in the rat ductal factors in sodium taurocholate2induced acute pancreatitis[ J] . Exp Pathol ,1984 ,25 (2) :73279.[7 ]魏岗之. 髓鞘的生理和脱髓鞘的病理生理 机制 综治信访维稳工作机制反恐怖工作机制企业员工晋升机制公司员工晋升机制员工晋升机制图 . 见 :魏岗之主编.神经系统脱髓鞘性疾病[ M] . 北京 :人民军医出版社 ,2003. 426.[8 ]苗毅 ,钱祝银 ,刘训良 ,等. 胰性脑病动物模型的制备[ J] . 中华实验外科杂志 ,1997 ,14 (4) :235.[9 ]邝芳 ,王百忍 ,鞠躬. 静脉注射脂多糖和小剂量肾上胰素后 BBB的开放[ J] . 第四军医大学学报 ,2000 ,21 :83228.[10 ]朱长庚. 脑和脊髓的血液供应回流及脑屏障. 见 :朱长庚主编. 神经解剖学[ M] . 北京 :人民卫生出版社 ,2002. 103321035.[ 11 ]Ransom BR. Vertebrate glial classification lineage and heterogeneity[ J] .Acad Sci ,1991 ,633 :19226.[12 ]Vabnick I ,Shrager P. Ion channel redistribution and function during de2velopment of the myelinated axon[ J] . J Neurobiol ,1998 ,37 (1) :80296.[ 13 ]Chiu SY,Ritchie JM. Evidence for the presence of potassium channels inthe paranodal region of acutely demyelinated mammalian single nerve fi2bres[ J] . J Physiol ,1981 ,313 :415237.[14 ] Homma M ,Suzuki H , Kusuhara H ,et al . High affinity efflux transportsystem for glutathione conjugates on the luminal membrane of a mousebrain capillary endothelial cell line[ J] . J Pharmacol Exp Ther , 1999 ,288 (1) :1982203. (收稿日期 2004205218) 643 中国现代普通外科进展 　2004 年 12 月 　第 7 卷 　第 6 期