实验项目
细胞器（核）的分离与核酸的鉴定
一 实验原理
细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内其沉降速度也不同，所以利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差异，可采取离心的
方法
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，将细胞器分离出来。
差速沉降离心法：采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒，在不同的离心速度及不同离心时间下分批分离的方法。
细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。
细胞核的比重和大小与其他组分不同，分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质用特定的离心、分离，然后进一步分析鉴定。其基本过程包括组织匀浆、分级分离和分析3个步骤。
匀浆是指在低温下，将组织块放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。
二 实验用品
1.材料：小白鼠肝脏
2.试剂：生理盐水、0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液、1％甲苯胺蓝染液。
3.仪器设备：显微镜、离心机、天平、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25毫升烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、玻璃匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。
三 实验步骤
1.处死：断头处死小白鼠，手提尾部使腹内血液尽量流出。
2.取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤，称取湿重约1g的肝组织放入在烧杯中。
3.匀浆：加入8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液与烧杯中，尽量剪碎肝组织，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，使匀浆下端浸入盛有冰块的器皿。左手握持匀浆器，右手将捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块。
4.过滤：用8层纱布过滤匀浆液与离心管中。
5.离心：在天平上平衡每对离心管，2500r/min离心15min，取上清液与另一离心管中，大约剩余1ml左右的上清液。
6.涂片：取上清液制一张（标记1）。将原离心管中剩余上清液吹打沉淀成悬液，另制一张涂片（标记2），自然干燥。
7.染色：分别在涂片1、2上滴加甲苯胺蓝染液，染色5～7min（即滴染）
8.洗涤：冲去染液，晾干。
9.镜检：结合实验结果的描述，镜下观察分析。
四 注意事项
1.规范操作，防止滴管、试剂的污染。
2.细核悬液的平铺要轻柔；
4.使用离心机注意平衡，转速从低到高；
5.各项混匀的工作，要充分，并且要注意安全，防止液体溢出。
五 预期结果
经碱性固绿染色的核体涂片被染成绿色，说明这是碱性蛋白，即细胞核。
浙公网安备 33021202002483