【doc】白斑综合征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区系之间关系的初步研究

【doc】白斑综合征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区系之间关系的初步研究 白斑综合征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区 系之间关系的初步研究 第l5卷第1期 2006年1月 上海水产大学 JOURNALOFSHANGHAIFISHERIESUNIVERSIrY Vo1.15.N0.1 . 1an.,2006 文章编号:1004—727l(2006)01—0109—05 ? 研究简报? 白斑白匀口征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区系 之间关系的初步研究 李继秋,谭北平,麦康森. (1.上海水产大学生命科学与技术学院,上海2C~090; 2.中同海洋大学农业部海水养殖重点实验事,山东青岛266003) 摘要:比较了同一养殖池中的感染白斑综合征病毒(WSSV)和未感染WSSV的凡纳滨对虾的肠道菌群,旨在 探刈.虾肠道群l_J机体健康状态之间的关系.感染WSSV对虾肠道的细菌总数为1.06×1o6CFU/尾,显着 高一j未感染WSSV的xl『虾(1.78×1CFU/尾;P<0.05),且其肠道中的细菌分别属于弧菌属,气单胞菌属,海 水球菌属,盐水球莆属和乳酸杆菌属;染WSSV的对虾(P<0.05),气单胞菌的比例显着的低于感染WSSV的 对虾(P<0.05);盐球荫所占的比例两者之间差异不显着.结果示,两种对虾住肠道菌群组成和细菌组成 和细菌数景上存在显辛;i=的差异,初步 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明对虾肠道菌群区系和机体的健康状态 密tU相关. 关键词:儿纳滨对虾;白斑综合征病毒;肠通菌群 中图分类号:S945.4文献标识码:A Studyontherelationshipsbetweenwhitespotsyndromevirus outbreakinculturedshrimp(Penaeusvannamei)andthecomposition ofaerobicheterotrophicbacteriumcommunitiesinshrimpintestine LlJi_qiu'一,TANBei.ping2, MAIKang.sen2 (1.CollegeAqzul— fScietveeandTechnology,ShangkaiFisheriesUnh~ersity,Shanghai200090,China; 2.TheKeylaboratoryoJ,Maricuhure,MinistryofAgriculture,OceanUniversityofChina,Qi~&o266003,China) Abstract:Mlepresentstudywastoinvestigatetherelationshipbetweenwhitespotsyndromevirus(WSSV)outbreak inshrimpintestine.InintestineoftheshrimpinfectedbyWSSV,thetotalbacteriacountWaS1.05×1o6CFU/ shrimp,itwassignificantlyhigherthanthatoftheshrimpuninfectedbyWSSV(1.78× 10sCFU/shrimp,P<0. ()5);FivegenusbacteriawereidentifiedandthedominantgenuswereVibrio7伽 eandAerormJmts,fifllowedby Marinococcus,SalinizocctL~andLaztobm:illu~.InintestineoftheshrimpuninfectedbyWSSV,fourgenusbacteria wereidentifiedexceptingMarinocoecus,thepercentagesofVibrionaceaeandLactobtwillusweresigniticantlyhigher, andthepercentagesofAeromo~swassignificantlylowerthanthatoftheshrimpinfectedbyWSSV(P<0.05). Therewasnotsignificantdifferenceinthepement~eofSalinicoccusintheshrimpintestine.Theresultsindicated ",atthe,'eissignificantdifferenceinintestinemicmilorat~tweentheshrimpinfectedwithWS SVandthenormaI. 收稿日期:20050330 基金项目:国家高技术研究发腱计划(863汁划)(2001AA620206,2003AA622060) 作者简介:李继秋(1975一),男,山东东人,讲师,博士,主要从事水产动物营养与免疫面的研究.Tel:021—65710362,E-mail:jqli @slffu.edu.Cr1. 卜海水产大学15卷 andthereisafo?noflinkagebetweentheintestinalmicrofloraandWSSV. Keywords:Penaeta~vannamei;whitespotsyndromevirus;intestinalbacteriumcomnlunity 动物的消化道具有营养和防御疾病的双重功能_J].肠道中寄居着大量的微生物,共同生存于一定 空间内组成了一个处于动态平衡的微生态系统E2].在人和畜禽上的研究表明,肠道菌群参与并调节宿 主生化反应和生理反应,还具有免疫调节作用,抵制宿主疾病发生3.由于生存环境和自身的生物学特 点与陆生动物不同f虾肠道的菌群容易受环境的影响[.目前,对虾肠道菌群的研究多局限于对正常 对虾肠道菌群区系的研究_5j,不同种类间对虾肠道菌群区系组成的差异_8_8,以及养殖水体温度,盐度 等对正常菌群的影响等方面.但是,对于不健康状态下,对虾肠道菌群区系差异的研究尚未见 报道.本实验对从同一对虾养殖池中采集到的感染白斑综合征病毒(WSSV)的对虾和未感染WSSV凡 纳滨对虾的肠道微生物区系进行了比较研究,目的在于探讨肠道微生物区系与对虾健康状态之问是否 密切相关,为水产益生菌的开发和应用提供科学依据. 1材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1试验样品的采集 试验用虾为凡纳滨对虾(Penaeusvannamei),体长为6,8enl.取自山东省胶南市对虾养殖场.该对 虾养殖池为水泥池,采样前,虾池没有施加任何抗生素和微生态制剂产品.盐度约为2O,温度约28?. 将采集到的活虾放入氧气袋中迅速运回实验室进行样品处理. 1.2样品的处理 首先用75%的酒精擦拭活虾体表进行消毒,无菌操作将活虾解剖,取出对虾的头部软组织和肠道, 分别用于白斑综合征病毒(wssV)检测和肠道菌群区系 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 .取感染WSSV的对虾和未感染WSSV的 对虾各9尾,每3尾为一个重复,进行肠道细菌的计数和鉴定. 1,3WSSV的检淑4 参照文献[12]的方法,从对虾头部软组织中提取用于WSSV病毒检测的DNA,然后按照Yoganandhan 等_】3_所描述的方法进行WSSV病毒DNA的检测. 1.4肠道细菌的计数和分离 取出的肠道用无菌生理盐水冲洗3次,分别置于无菌匀浆器中加1mL无菌生理盐水匀浆,取匀浆 液进行1O倍系列稀释,分别取0.1mL涂布2216E平板,28?培养48h后统计细菌菌落(CFU). 挑取菌落分布均匀且菌落数为300左右的平板,平均划分几个区域,每个区域大约含3O个菌落的 区域,随机挑取一个区域的细菌用于菌群区系研究.从2216E平板上挑取的菌落通过划线进一步纯化. 纯化后的菌种置于含15%甘油的生理盐水中保存于一8O(?的冰箱中. 1.5细菌鉴定 参照Oliverl】J和Muroga等l】J海洋细菌鉴定系统,对细菌的形态,生理和生化特征进行测定,然后根 据《伯杰氏细菌鉴定手册》_16l将菌株鉴定到属.鉴定指标主要有:格兰氏染色, 鞭毛,运动性,菌落形态, 抗牛素敏感性,O/129(弧菌抑制剂的敏感性),氧化酶,接触酶,葡萄糖氧化发酵,吲哚产生反应,鸟氨酸, 赖氨酸和精氨酸脱羧,精氨酸双水解酶和硫化氢等反应. 1.6统计分析 利用SPSS11.0软件进行差异显着性检验. 期亭继秋等:白斑综台征病毒与凡纳滨对虾肠道菌群区系之问关系的初步研究111 2结果 c…/尾,显着高于木感染wssv的肠道细菌总数 (1.78XlCFU/尾;P<0.05) 2.3肠道芮群组成测定结果 从感染WSSV的对虾肠道ff1分离到r弧菌属,… 气单胞菌属,海水球菌属,盐水球菌属,乳酸杆荫属 等5个属的细菌,分别占肠道总菌数的l8.75%,70 17.19%,15.62%,7.81%和4.69%.从末感染60 WSSV的埘虾肠道中分离了弧菌属,乳酸杆菌属,气: 单胞菌属和盐水球属等4个属的细菌,分别占肠楚 道总菌数的51.78%,14.29%,8.93%和8.93%匠20 中,木感染WSSV埘虾肠道中弧菌和乳酸菌所占比10 112上海水产大学l5卷 殖环境或对虾肠道中的正常茼群_2.Skjermo和VadsteinL2J证实条件性致病菌的大量繁殖是水产动物 发生疾病的主要原因,其造成疾病发生的可能性往往要大于专性病原菌.Yasuda和Kita0l5j研究发现, 以气单胞菌和弧菌为肠道优势菌的日本对虾的生长速度比以假单胞菌为肠道优势菌的慢.从数量上比 较,感染WSSV的对虾肠道总细菌数约为未感染WSSV对虾的】0倍,差异显着.InockL1j在哺乳动物 上做了肠道中止常菌群对宿主健康状况影响的实验,证实了动物肠道中的正常菌群对宿主的生化反应, 生理状况以及机体的免疫功能具有重大影响.正常菌群的失衡会引起不同类型的疾病,反之,不同类型 的疾病也有可能造成正常微生物的失衡l2.由以上试验结果可推断,感染WSSV的对虾和未感染 WSSV的对虾肠道菌群区系的差异是肠道正常菌群的失衡的具体表现.进一步说明了对虾肠道正常菌 群,病原体(就本实验具体而言指WSSV)和机体的健康状态存在者必然联系. 在人和畜禽J-的研究表明,消化道中的菌群在维持宿主健康方面具有重要的作用.动物肠道内菌 群是肠道生态环境密不可分的组成部分,参与并调节许多与化学环境有关的反应,如生物化学反应,牛 理反应,免疫调节反应和疾病的抵制l3J.大量且种类繁多的细菌共同生存于一定空间内组成了一个处 于动态平衡的微生态系统F2J.系统中的生态因子通过竞争性排斥和拮抗作用来调节菌群的平衡,同时 有助于抑制肠道中病原性微生物J.而益生菌是指那能通过改善微生物生态平衡或改进原有微生 物区系属性的对养殖动物施加有利影响的活微生物细胞[25J.因此,通过饲喂益生菌来改善动物肠道菌 群平衡也是提高机体免疫力的重要手段之一.开展水产动物肠道菌群的研究可为水产饲用益生菌研究 和应用提供理论依据. 本实验得到中国水产科学院黄海水产研究所生态实验室李健研究员的大力支持和帮助,谨致谢意 参考文献: [1]TmmockGW.Studiesoftheintestinalmicroflora:prerequisiteforthedevelopmentofpm biotics[J].In!daiI7Joumal,1998,8:527—533. 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