人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒(原位杂交)

人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒(原位杂交) 规格: 20 人份 50 人份 S30312 S30313 产品型号: 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒(原位杂交) 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒(原位杂交) (操作之前请详细阅读此说明书) 检测原理和意义 原位杂交技术的原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针，依据碱基互补配对原理，与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交，经信号放大及显色后，镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。 人乳头状瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)属于乳多孔病毒科的乳头状瘤病毒属。其主要通过直接或间接接触污染物品或性传播感染人类，引起人类皮肤和粘膜的多种良性乳头状瘤或疣，某些型别的感染具致癌性。目前已检出100多种人乳头状瘤病毒，其中50种左右可以感染粘膜、口腔、阴道、子宫颈、肛周及直肠。高危型如HPV16，18，31，33等与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CIN?/?)的发生相关，尤以16和18型为主。 福建泰普生物研发的HPV原位杂交试剂盒，根据HPV16/18型特有序列制备的探针，是病理组织切片、细胞培养涂片及细胞涂片原位检测HPV病毒的有力手段。 试剂盒提供的材料和试剂 1 规格: 20 人份 50 人份 S30312 S30313 产品型号: 提 供 量 成 份 保存方法 20人份 50人份 1 HPV (16/18型) 杂交液 -20? 500ul 625ulx2 2 杂交增强液(100×) 4? 60ml 60ml 3 一抗 4? 1ml 2.5ml 4 二抗 4? 1ml 2.5ml 5 HRP聚合物 4? 1ml 2.5ml 6 DAB底物 4? 1ml 2.5ml 7 DAB 4? 20ul 50ul 8 18X18mm盖玻片 4?/室温 20片 50片 30ml 30ml 9 湿盒增效液 4?/室温 (注意:HPV16/18型杂交液请 -20?保存) 2 泰普生物TRIPLEX 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒 用户自备材料和试剂 1. 原位杂交加热器(泰普编号:M10061) 8. 湿盒2个 2. 微波炉 9. 二甲苯 3. 37?恒温培养箱 10. 酒精 11. PBS(pH=7.6) 4. 光学显微镜 5. 移液器 12. 苏木素 6. 计时器 13. 氨水 7. 玻片染色缸和染色架 14.盐酸酒精 实验前需配试剂 A1X 、杂交增强液 取适量100X杂交增强液及蒸馏水，按1:99稀释，并将此1X杂交增强液存放于4?备用。 B、30,湿盒增效液 取湿盒增效液及蒸馏水，按3:7配制成30%湿盒增效液备用。 实验时需配试剂 DAB显色液 依据需要配制DAB显色液，以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物，按照1:50的比例混匀，避光保存备用。(现配现用) 操作步骤 1(切片处理:将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上，切片于60-70?烘烤60分钟以上。(建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片) 2(脱蜡及水化: 溶液 次数×时间(分) 二甲苯 3 × 10 100%酒精 1 × 3 95,酒精 1 x 3 80%酒精 1 × 3 蒸馏水 1 x 3 (注意:使用过的二甲苯，应相应延长脱蜡时间，以保证脱蜡完全) 3(微波处理:将切片放入盛有1X杂交增强液的容器里，微波高火状态煮30分钟，自然冷却2-3分钟。(加热过程中，溶液应始终浸没组织。建议适时(每隔5-15分钟)补充杂交增强液)蒸馏水洗涤1×1分钟，小心擦干组织周围液体。 4(杂交: 4.1 每张切片滴加适量杂交液(约25 ul，根据组织大小增、减量)，并加盖玻片(本试剂盒配备， ; 可根据加入杂交液量进行剪裁) 4.2 放置于95?原位杂交加热器上变性5分钟; 4.3 放入含30%湿盒增效液的湿盒中，37?下孵育4-16 小时。建议过夜(,16小时)以保证低 3 泰普生物TRIPLEX 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒 拷贝样本的杂交效果; 4.4 48?(PBS 预温)浸泡切片，小心移去盖玻片，PBS继续浸泡5分钟; 4.5 48? PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器); (注意:盖玻片规格应与杂交液量匹配，切片在整个试验过程中要保持湿润状态，防止干片) 5(信号放大与显色: 5.1 小心擦去组织周围液体，滴加适量一抗(50 ul)，37?，水湿盒中约，根据组织大小增、减量孵育30分钟;37?PBS浸泡3x2分钟; (轻微振荡容器) 5.2 小心擦去组织周围液体，滴加适量二抗(50 ul)，室温，水湿盒中约，根据组织大小增、减量孵育20分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (); 轻微振荡容器 5.3 小心擦去组织周围液体，滴加适量HRP聚合物(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育30分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.4 小心擦去组织周围液体，滴加适量DAB显色液(约50 ul，根据组织大小增、减量)，室温，水湿盒中孵育约10分钟(不同样本的显色时间可能有所差别，建议镜下观察显色过程);室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。 5.5 自来水冲洗，苏木精复染(可用盐酸酒精分化及氨水返蓝)。梯度酒精脱水，中性树胶封片。 阳性结果判断标准:上皮细胞核棕褐色着色为主 参考文献: 1. Inverse relationship between the expression of the human papillomavirus type 16 transcription factor E2 and virus DNA copy number during the progression of cervical intraepithelial neoplasia, Journal of General Virology (2000), 81, 1825- 1832 2、Role of HPV DNA testing in predicting cervical intraepithelial lesions: comparison of HC HPV and ISH HPV, Diagn. Cytopathol. 2003; 29: 149-155 3、HPV DNA detection by in situ hybridization with catalyzed signal amplification on thin-layer cervical smears, J Histochem Cytochem 50: 1417-1420, 2002 4、Electronmicroscopic demonstration of HPV in Oral Warts, Micromologica, 13, 27-34, 1990 其他事项: 本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查，如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ，或者在使用过程中有任何疑问，请及时与泰普客户服务中心联系，我们将及时为您解决。 公司信息: 公司名称:福建泰普生物科学有限公司 总部:福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编:350002 电话:800-804-8333，0591-2805 3600 传真:0591-2805 3700 研发中心:北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦A座207室 邮编:102206 电话:010-8072 0071 传真:010-8072 0072 4 泰普生物TRIPLEX 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒 操作步骤简 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 操 作 参 数 1 二甲苯 3X10′ 2 100%酒精 1X3′ 3 95,酒精 1X3′ 4 80,酒精 1X3′ 5 蒸馏水 1X3′ 6 微波加热 3x10′ 7 蒸馏水 1′ 8 加杂交液 适量 9 变性 95?，5′ 10 30,湿盒增效液的湿盒中孵育 37?，4-16h 11 PBS(用前48?预温)脱片，浸泡 1-5′+5′ 12 PBS(用前48?预温)浸泡 3X5′ 13 加一抗 37?，30′ 14 PBS(37?)浸泡 3X2′ 15 加二抗 室温，20′ 16 PBS浸泡 3X2′ 17 加HRP聚合物 室温，30′ 18 PBS浸泡 3X2′ 19 DAB显色 室温，2-10′ 20 PBS浸泡 3X2′ 21 自来水冲洗 1′ 22 复染，脱水，封片 常规 5 泰普生物TRIPLEX 人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒人乳头状瘤病毒(16/18型)检测试剂盒 6