RNA浓度的OD比值说明

RNA浓度的OD比值说明RNA浓度的OD比值说明 OD260/OD280=1.9~2.0 说明RNA居多,纯度已经很高了。纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;2.0时表明可能有异硫氰酸残存一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度,OD230代表其他杂质(多糖等)的吸光度。A代表吸光值,而OD是光密度值,一个意思。当A260读数处在0.1-0.5 之间,A200 到A320之间的数值构成一条光滑的曲线时,少量苯酚(30 ul/ml)残留会使A230,A260,A280...

RNA浓度的OD比值说明 OD260/OD280=1.9~2.0 说明RNA居多,纯度已经很高了。纯DNA:OD260/OD280≈1.8(>1.9,表明有RNA污染;<1.6,表明有蛋白质、酚等污染)纯RNA:1.7 2.0时表明可能有异硫氰酸残存一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度,OD230代表其他杂质(多糖等)的吸光度。A代表吸光值,而OD是光密度值,一个意思。当A260读数处在0.1-0.5 之间,A200 到A320之间的数值构成一条光滑的曲线时,少量苯酚(30 ul/ml)残留会使A230,A260,A280均变大(差不多增加一倍),但A260/A280和A260/A230均在2左右。少量异硫氰酸胍(132 uM)残留使A230变大,但A260,A280几乎不变,所以A260/A280仍在2左右,而A260/A230大大低于2。大量异硫氰酸胍(2.4 M)残留使A230,A260,A280均变大,根本就没有办法测定了。PEG(6.25%)残留使A230,A260,A280均变大,但对A230,A260影响更大,所以A260/A280比2大不少,而A260/A230仍在2左右。核酸抽提中常用的试剂,如Phenol,GuanidineIsothiocyanate,PEG都能使A260和A280的值变大,但是却可能使二者的比值与高纯度核酸的比值一致。因为A260值几乎是峰值,所以有必要在其两边各取一个:A280和A230。干净的核酸A260/A230应该在2左右。如果有在230 nm 处的强吸收提示污染有酚盐离子等有机化合物解决办法: 1. 蛋白质污染:确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量,确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀,并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的 OD260/OD280比值偏低,则用氯仿重新抽提一次,再沉淀,溶解。 2. 苯酚残留:确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀,并且离心分层的离心力和时间要足够。 3. 多糖或多酚的残留:一些特殊的组织和植物中,多糖、多酚含量较多,这些残留也会导致OD260/OD280比值偏低。因此,从这类材料中提取RNA时,需要注意多糖、多酚杂质的去除。 4. 设备限制:测定OD260及OD280数值时,要使OD260读数在0.1~0.5之间。此范围线性最好。用水稀释样品:测OD值时,对照及样品稀释液请使用10 mM Tris,pH7.5。用水作为稀释液将导致比值偏低。比值低可能有蛋白污染,高了可能有DNA污染,建议你抽提的RNA分三管,两管保存,另一管用来跑胶和测定OD,跑胶是最直观的,1%的胶就可以,抽提后马上跑,一般不会降解很多,所以设备材料不需要去酶处理不会有影响的。你的OD比值低可能是溶解时用的水的PH 值偏酸。可以试着调到8.0左右再测,这样就会上来了。

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