川楝子治疗鸡球虫病的药效研究

川楝子治疗鸡球虫病的药效研究 川楝子治疗鸡球虫病的药效研究 畜牧兽医杂志第29卷第6期2010年9 川楝子治疗鸡球虫病的药效研究 李宗波,孔德江,易栋,柴保平,何晓玲 (1.河北省动物卫生监督所,河北石家庄050031;2.峰峰矿区动物卫生监督所; 3.峰峰矿区动物疫病预防控制中心;4.峰峰矿区动物防疫监督站) 摘要:选用川楝子治疗鸡球虫病及其对机体免疫力影响的研究,通过测定用药前后球虫虫卵数量 的变化,以及测定用药前后血清和胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量,结果为 川楝子组血清和胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量都较球虫感染对照组差异 显着(P<0.05)或差异极显着(P<0.01);川楝子组对鸡免疫器官胸腺,脾,法氏囊指数指数均较 球虫感染对照组差异显着或差异极显着.说明川楝子治疗鸡球虫病效果明显,且能够促进鸡免疫 器官的发育和增强机体的免疫力,为研究驱杀球虫中药对免疫功能的影响提供了一种可行性的 方法. 关键词:鸡;球虫病;川楝子;免疫;研究 [中图分类号]$859.7[文献标识码]A[文章编号]1004-6704(2010)06-0009-05 StudyofTreatmentEffectsofFructusMeliaeToosendan onChickenCoccidiosis LIZong—bo,KONGDe-jiang,YIDong,CHAIBao—ping,HEXiao—ling (1.InstituteofAnimalSanitationSu~rvisioninHebeiProvince,ShijiazhuangHebei050031, China; 2.InstituteofAnimalHygiene.seninFengfengCoalMineArea;3.CenterforDise~eControla ndPreventionin FengfengCoalMineArea;4.SupervisingAgencyforAnimalEpidemicPreventioninFengfengCoalMineArea) Abstract:Inthisexperiment,traditionalChinesemedicineFructusMeliaeToosendanwasselectedtostudytheeffectsonchicken coccidiosistreatingandorganismimmunityofchicken.BymeasuringchangeofcoccidiaeggsnumberandcontentofNO,NOS,SOD andMDAinserum,tissuehomogenateofthymus,spleenandbursaoffabricius,theresultsshowedthatcontentofNO,NOS,SOD, MDAinseYum,andtissuehomogenateofthethymus,spleen,bursaoffabriciusinFructusMeliaeToosendangroupweresignificant difference(P<0.05)orextremelysignificantdifference(P<0.01)comparedwithcontrolgroupinfectedwithcoccidia.Indexesof chickenimmuneorgansofThymusgland,spleenandBursaofFabriciusinFructusMeliaeToosendangroupweresignificantlydifference orextremelydifferencecomparedwithcontrolgroupinfectedwithcocidia.FructusMeliaeToosendancanpromotechickenimmuneo卜 gandevelopmentandenhancetheimmunity,italsoprovideakindoffeasibleapproachfortraditionalChinesemedicineonrefoulement tenellaimmunefunction. Keywords:chicken;coccidiosis;FructusMeliaeToosendan;immune;study 鸡球虫病是由孢子虫纲,艾美尔科,艾美尔属中 的一种或数种单细胞寄生原虫寄生于鸡肠道上皮细 胞所引起的以下痢,血便,生长迟缓,饲料转化率降 低,死亡为特征的疾病.本病在世界各地普遍发生, 对雏鸡和育成鸡的危害十分严重,以15—40日龄鸡 最易感染且患病严重死亡率可达80%.防治该病 需要长期不问断的用药,导致药物残留严重,又极易 产生耐药性,这一顽疾给养鸡业带来巨大的经济损 失.目前,关于使用中药治疗鸡球虫病的研究发展 较快,本试验选用具有清肝火,除湿热,理气止痛, [收稿日期]2009-08-18 [作者简介]李宗波(1967一),男,河北隆化人,硕士,高级兽医 师,研究方向为中兽药免疫学. [通讯作者]孔德江,E-mail:djkongff@163.COB 驱杀积虫等功效的川楝子作为试验药物,探讨其在 治疗鸡球虫病中的药效. l试验材料' 1.1试验动物 120只1日龄公鸡由石家庄河欣种禽有限公司 提供. 1.2试剂与药品 川楝子粉(铝箔包装100'g/包)由陕西瑞康生物 工程有限公司生产,柔嫩艾美尔球虫卵由河北农业 大学寄生虫实验室提供,一氧化氮(NO)试剂盒,一 氧化氮合酶(NOS)试剂盒,超氧化物歧化酶(SOD) 试剂盒,丙二醛(MDA)试剂盒购于南京生物工程研 10JournalofAnimalScienceandVetefina~MedicineVo1.29No.62010 究所. 1.3主要仪器设备 Y?一2高速离心机,数显恒温水浴锅HH一4, FA1104N电子天平,SP一756紫外分光光度计,生物 洁净安全柜,不锈钢手提式灭菌器(DSX一280A 型),XSZ一107光学显微镜,PHS一3C型精密pH 计,电热恒温干燥箱,灭菌试管,50mL注射器. 2试验设计与方法 2.1分组饲养与药物用量 分健康对照组(第1组),感染对照组(第2 组),川楝子组(第3组)共3组,其中,感染对照组 为60只,其他组为每组3O只. 由于鸡的数量比较大,采用饮水给药,用药浓度 一 般是1g生药/mL,用量参照《兽医中药学》为川 楝子2g,每日早晚各1次. 2.2各组球虫虫卵数量的变化 第2,3组每只鸡的接种剂量为2×10个,卵囊 混悬液以每只鸡0.3mL滴口.第1,2组分别从第 1,5周测定球虫卵囊个/g粪便,其中第2组有鸡只 死亡,选择活鸡作为试验对象.第3组前1周只作 临床观察,从第2周开始用药. 2.3临床观察及病理变化 临床主要观察精神,活动量,饮欲,食欲,姿势, 粪便等情况.病理变化主要检查肠道特别是盲肠和 小肠的肠壁薄厚,出血情况,其它脏器如肝脏,肾脏, 法氏囊,脾脏,胸腺等. 2.4血清中NO,NOS,SOD,MDA含量测定 采用鸡心脏采血1.5mL室温下静置分离血清. 2.4.1血清中NO的测定 操作步骤:按一氧化氮(NO)试剂盒(硝酸还原 酶法)说明书操作,用紫外分光光度计测定空白管, 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 管和测定管的吸光度值. 计算公式:NO含量(umol/L)= 薯噩薏差差×标准品浓度×标准管吸光度一空白管吸光度" 样品测试前稀释倍数 2.4.2血清中NOS的测定 操作步骤:按一氧化氮合酶(NOS)试剂盒(化 学比色法)说明书操作,用紫外分光光度计测定空 白管和总NOS测定管的吸光度值. 计算公式:总NOS活力(U/mL)= 总NOS测定管OD值一空白管OD值,, 呈色物纳摩尔消光系数" × 1 ?1000取样量比色光径×反应时间一 一!璺墨蕉篁Q里笪二窒自笪Q里笪. 38.3×10一,, :!?:三×一?100 0.03—1×15' 2.4.3血清中MDA测定 操作步骤:按丙二醛(MDA)试剂盒(硫酸巴比 妥酸法)说明书操作,用紫外分光光度计测定标准 管,标准空白管,测定管和测定空白管的吸光度值. 计算公式:测定样品中丙二醛含量(nM/mL): (测定管吸光度一测定空白管吸光度)?(标准管吸 光度一标准空白管吸光度)x标准品浓度(10nM/ mE)×样品测试前稀释倍数. 2.4.4血清中SOD测定 试验操作:按超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒 (黄嘌呤氧化酶法)说明书操作,用紫外分光光度计 测定测定管和对照管的吸光度值. 计算公式:总SOD活力(U/mL)= 过筻墓廑?50%×反应体系的对照管吸光度" 稀释倍数×样本测试前的稀释倍数 2.4.5数据以又?s表示,用"t检验"进行统计分析 2.5胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆中NO,NOS, SOD,MDA含量测定 具体实验过程与测定血清中的NO,NOS,SOD, MDA含量类似. 2.6测定免疫器官指数 鸡称重后剖杀,立即取胸腺,脾,法氏囊并除去 脂肪,称取各免疫器官重量,按免疫器官重/体重,计 算免疫器官指数. 3试验结果 3.1各组球虫卵囊数量的变化 采取粪便抹片镜检,各组椭圆形球虫卵囊数量 情况见(表1). 表1各组球虫个卵囊/克粪便(OPG) 注:表示差异极显着,下同. 结果显示:川楝子组较感染对照组差异极显着 (P<0.01). 3.2临床及病理变化 感染对照组精神不振,闭目呆立,羽毛蓬松,双 畜牧兽医杂志第29卷第6期2010年11 翅下垂,食欲不振,喜多喝水,先便秘后下痢,肛门周 围羽毛粘在一起.以后双翅轻瘫,走路失调,嗉囊充 满液体,拒食,粪便水样带血,黏膜和冠呈苍白,消 瘦.发病6,10d内有死亡的鸡,死亡率为46%. 川楝子组开始精神萎靡,食欲不振,喜喝水,出 现血便,用药后逐渐好转,血便得到控制,饮食欲恢 复正常. 经对死亡鸡只进行剖检,发现鸡体消瘦,盲肠黏 膜出血及坏死,肠 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 物血样,内含坏死剥脱的黏 膜,或混有血的干酪样凝栓.肠腔高度扩张,肠腔积 血,肠壁发绿.肠内容物絮状,多汁或含有多量纤维 素和脱落的肠黏膜.心脏,肝组织正常. 3.3血清NO,NOS,SOD,MDA含量测定 3.3.1血清中NO测定结果见表2,图1. 表2鸡血清中一氧化氮(NO)含量变化Ixmo1.L 注:表示差异显着,下同. +健康对照组 采血周龄 对照组 图1鸡血清中一氧化氮(NO)含量变化 由表2和图1可见,Jlie子组较感染对照组差 异显着(P<0.05). 3.3.2血清中NOS测定结果(表3,图2) 表3鸡血清中一氧化氮合酶(NOS)含量变化txmo1.L 由表3和图2可知,川楝子组较感染对照组差 异显着(P<0.05). 3.3.3血清中SOD测定结果(表4,图3) 3.3.4血清中MDA测定结果(表5,图4) ? H o 置 e ? 缸 g C 0 Z — 健康对照组 … 臣一?球虫感染对照组 采血周龄 图2鸡血清中一氧化氮合酶(NOS)含量变化 表4鸡血清中超氧化物歧化酶(SOD) 含量变化Ixmo1.L一 由表4和图3可知,川楝子组较球虫感染对照 组差异显着(P<0.05). OO 9O 80 70 6O 5O 4,0 3O 2O 1O 00 — _.-一健康对照组 … 昏一球虫感染对照组 图3鸡血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量变化 表5不同日龄鸡血清中丙二醛(MDA) 影响Ixmo1.L 一_.1.I县鍪8? ?勰拍盟约M ^1..【o量一一扭g呈 12JournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicineVo1.29No.62010 由表5和图4可知,川楝子组较感染对照组差 异显着(P<0.05). 上6 — _?_一健康对照组 富球虫感染对照组 l楝子组 采血周龄 图4鸡血清中丙二醛(MDA)影响 3.4胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆中NO,NOS, SOD,MDA含量测定 分别在每周剖杀6只,剖杀后,将胸腺,脾脏,法 氏囊称重后,分别测定胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆 中的NO,NOS,SOD,MDA含量. 3.4.1胸腺组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量 测定(表6) 结果显示:川楝子组较感染对照组NO,NOS与 MDA含量差异极显着(P<0.01),SOD含量差异显 着(P<0.05). 表6胸腺组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量 3.4.2脾脏组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量 测定(表7). SOD含量差异极显着(P<0.01),MDA含量差异显 着(P<0.05); 结果显示:川楝子组较感染对照组NO,NOS,3.5免疫器官指数测定 SOD与MDA含量差异极显着(P<0.01).免疫器官指数反映免疫器官的生长发育 状况, 3.4.3法氏囊组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含与机体免疫功能密切相关.测定结 果见表3.9.结 量测定(表8)果显示:川楝子组较感染对照组胸腺,脾,法氏囊指 结果显示:川楝子组较感染对照组NO,NOS与数差异极显着(P<0.01). 表7脾脏组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量 畜牧兽医杂志第29卷第6期2010年13 表8法氏囊组织匀浆中NO,NOS,SOD,MDA含量 4讨论与小结 4.1用药前后球虫虫卵数量的变化说明川楝子抗 球虫的作用 鸡球虫病是通过球虫卵囊传播而感染,本试验 测定川楝子组较球虫感染对照组差异极显着,说明 川楝子治疗鸡球虫病效果明显. 4.2各组鸡胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆和血清中 NO,NOS,SOD,MDA情况 4.2.1鸡胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆和血清中NO 变化分析NO在炎症及其免疫机制中发挥着双重 的作用:一方面,它能显着抑制细胞内外微生物和肿 它又介导细胞毒性.球虫 瘤细胞的活性;另一方面, 感染后主要是引起炎症,炎症反应时致炎物或炎症 介质(如白三烯B4等)可诱导或增加局部NO的合 成和释放.本试验通过测定鸡的胸腺,脾脏,法氏囊 组织匀浆中NO和血清中NO含量的变化,比较各组 NO含量的变化,说明川楝子可通过非特异性杀伤 细菌,真菌和寄生虫等病原体从而减轻炎症,增强机 体免疫. 4.2.2鸡胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆和血清中 NOS变化分析适度的NO合酶(NOS)表达有助于 宿主抗感染及抗肿瘤,并在免疫反应中起微妙的调 节作用,但NOS的过度表达致NO产生过量时往往 促发免疫病理过程而造成组织损伤.本试验测定表 明川楝子都能够不同程度的降低血清中的NOS含 量从而减轻炎症,说明川楝子对抑制球虫感染有效 且增强机体的免疫. 4.2.3鸡胸腺,脾脏,法氏囊组织匀浆和血清中 SOD和MDA的变化分析SOD对机体的氧化与抗 氧化平衡起着至关重要的作用,其活性的高低间接 反映机体清除自由基的能力,MDA含量的高低间接 反映机体受超氧自由基攻击的严重程度.本试验测 定表明川楝子可以增加机体清除自由基的能力,减 少自由基对机体的损伤,从而保护机体,增强机体免 疫力,对抑制球虫感染有效. 4.3川楝子能够促进鸡免疫器官的发育和增强机 体的免疫力 胸腺,法氏囊和脾脏是禽类最重要的免疫器官, 参与机体的体液免疫和细胞免疫,他们的发育状 态及机能强弱决定着机体的免疫机能.免疫器官相 对重量的增加意味着免疫系统成熟较快,机体免 疫功能较强.川楝子组对鸡免疫器官指数的影响均 较球虫感染对照组差异显着或差异极显着,说明川 楝子能够促进鸡免疫器官的发育而增强机体免 疫力