【doc】红芪组织培养中次生代谢产物的研究：Ⅲ.黄芪甲甙和游离？…

【doc】红芪组织培养中次生代谢产物的研究：Ⅲ.黄芪甲甙和游离？… 红芪组织培养中次生代谢产物的研究:?. 黄芪甲甙和游离,… 第35卷第'期 1999年12月 兰州大学(自.牲科学版) J0urnalofIanzhouUmversity(NaturalScienees) Vo/.35N0.4 Dec.1999 ?文章编号:0455—2o59(1999)o4一.o9004 10—1红芪组织培养中次生代谢产物右筑. ?.黄芪甲甙和游离氨基酸在红芪愈伤组织中含量变化的相关性 邢更妹,郝晋东,王仑山 (1.甘肃农业大学农学系.甘肃兰州730070~2.解放军兰州医学高等专科学技,甘肃兰州730020~ 摘要:利用HPLC和高速氨基酸 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 仪测定红芪各种敷伤组织中黄芪甲甙和游离氨基酸的含 量.结果表明,黄芪甲甙含量分化敷伤组织为最高,是未分化愈伤组织的12.5倍,而游离氨基酸 含量分化愈伤组织与未分化愈伤组织相比较表明:脯氨酸,胱氨酸,精氨酸和各氨酸都有一定程度 的降低,其中尤以脯氨酸胱氨酸的降低幅度较大.由此推测这4种氨基酸可能是次生代谢产生黄 芪的前体物质.. 关键词: —兰莹童苣里蔓游离基墨墼翻丑彼]}舌眷中围分娄号:Q557文献标识码:Al一 生代谢7-拘 人类利用植物次生代谢物的历史非常悠久,各民族传统草药和香料中的有效成分 大多是 植物次生代谢物,它们在防治疾病方面起着重要作用.红芪(H.PolybotrysHand—Mass)的主 要次生代谢物为红芪多糖,皂甙及黄酮类等,其对增强机体的免疫能力,抗衰老,利尿,降压等 都具有显着的作用.在自然界中很多有重要价值的植物次生代谢物往往含量较低,而其前体却 很丰富,应用生物技术将前体转化为具有实用价值的目的产物,转化率高,专一性强,耗能 低r.为此我们利用组织培养技术生产红芪中具有药用价值的次生代谢产物——黄芪甲甙,由 于甙类的合成与氨基酸代谢有关,所选取各种愈伤组织中黄芪甲甙含量与游离氨基酸含量 变化进行比较,以确定它们之间的相关性. 1材料和 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1游离氨基酸测定 红芪愈伤组织的培养见文献[2].参考贺正全[3],商振华等的实验方法,将培养的处于不 同生长状态的红芪愈伤组织样品在46?烘箱中烘干,称取0.5g作为待测样品,加4磺基水 杨酸1Oml,研磨后过滤,取滤液在10000r/rain离心20min,取上清液置日立835—50型高速 氨基酸分析仪中,柱规格2.6nrn~150ilm,柱温53~C,泵压100~110kg/cm,样品测定周期 72min. 收稿日期:1998—08—31. 作者简开;邢更妹(1963一),女,讲师.?通讯联系人 ] ' a 第4期邢更妹等:虹芘组绒培养中次生代谢产精的研究91 1.2HPLC法测定黄芪甲甙含量 待测样品液的制备参考贾 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 忠等的方法+称取经46C低温烘干的待测样品0.5g,用滤 纸包好置于提取器中,经80"C水浴甲醇回流至提取液无色,将回流甲醇蒸干,残渣用100ml 水溶解后,用乙酸乙酯处理3次;水层再用正丁醇提取3次,合并正丁醇后蒸干,残渣用甲醇溶 液定容至5ml容量瓶中.使用美国VARIAN一5060型高效液相色谱仪,CDS401型数据处理 机,PakspMch一5色谱柱(150nm×40nra),V(甲醇):V(水):V(冰醋酸)一8:2:1的 溶液为流动相,在流速1.0ral/rain,uv:^一2541"1121,柱温30"C,进样量l0下进行测定. 微机自动积分记录蜂面积,用黄芪甲甙标准品作标准曲线,计算出黄芪甲甙含量. 2实验结果 2.1红芪各供试材料中游离氨基酸含量(表1) 表1红芪各供试材料中游离蠹基酸含量?g/ul Table1Thecontents0ffreeaminoacidein.PolybotrysHand—Mass 2.2红芪各供试材料中黄芪甲甙含量(表2) 表2IfPLC法测定的红芪各供试材料中黄芪甲甙含量~g/pl Table2ThecontentsofAstragalin—Iin日.PolybotrysHand—Mass 92兰州大学(自燕科学版)第35卷 2.3红芪各供试材料中黄芪甲甙HPLC色谱图(附图) 3讨论 黄芪甲甙愈伤组织分化愈协舒织桶化愈伤R织 附图HPLC色谱图 Fig.HPLCpaherlns 在整体植物中,次生代谢往往是某些特化细胞或组织特有的生理现象.实际上,次生代谢 物的生物合成被认为是分化过程的一部分,分化细胞的组织他往往能阻断酶对积累代谢物的 降解.如果在培养情况下没有这种对于酶和底物之间的问隔,就不可能有次生代谢物的积累. 由此可以认为在培养情况下生产次生代谢物诱导分化是很重要的.在本实验中,红苠分化愈伤 组织黄芪甲甙的含量是未分化愈伤组织的12.5倍,前体物质的加入不仅可增加次生代谢产物 的含量,而且可缩短终产物达到最大含量的时间,还可以通过刺激和诱导次生代谢途径中一些 酶的活性来提高终产物的含量.我们测定了红苠各种愈伤组织中氨基酸含量的变化,发现分 化愈伤组织与未分化愈伤组织相比有4种游离氨基酸差别很大——各氨酸降低了8.9倍,精 氨酸为11.9倍,胱氨酸为84.7倍,脯氨酸为107.9倍,其中尤以胱氨酸,脯氨酸变化较为显 着,因此推测这4种氨基酸可能是黄苠甲甙合成的前体物质或亚前体物质,今后在以生产黄芪 甲甙为目的的红芪组织培养中可试加这4种氨基酸. 参考文献 [1]陈晓亚,刘培.植物次生代谢的分子生物学及基因工程[J].生命科学.1996,8(2):8,11. [23邢更妹,王仑山.红苠组织培养中次生代谢产物的研究I.红苠愈伤组织异柠檬酸裂解酶活性的变化 口].兰州大学(自然科学版),1999,35(2):119~128. [3]贺正全,傅原.张小刚,等.五种黄芪属植物根中游离氨基酸成分的比较分析[J].药学通报,1988,23(2): 73,75. I-4]商正华,于亿年,郭为,等.反相高效液相色谱一紫外吸收法测定灵芝中氨基酸舍 量[J].药物分析杂志, 第4期邢更妹等:虹蔗组织培养中次生代谢产物的研究93 l994,14(4):30,33. [5]贾书忠.苗长芋?.绞股蓝的质量比较——总皂甙的古量测定_J]中国中药杂 志.1992,17(5):164,167 [6]ChiBD.Francoo[sCorm[er.AccumulationofPeonidin3-ghucosideenhancedbyosmoticstressin graps(vittsviniferaI,,)cellsupspens[onD3.PlantCellTissueand()rangCulture.1991,24(1). 247, 248. TheRelationofFreeAminoAcidsandAstragalin—Iin CallusofH.PolybotrysHand—Mass XingGenmei,HaoJindong,I~.ZangLunshan. (1-DepartmentofAgriculture,GansuAgriculturalUniversity.Lanzhou.730070,China 2.LanzhouMedicalColtegeofPLA.1,anzhou,730020,China; 3.SchoolofLifeScience,I,anzhouUniversity.Lanzhou,730000.China) Abstraet:Thefreeaminoacidsandastragalin—IncallusofH.PolybootryHand— MaSSwere studiedwithHPLCandhigh— speedaminoacidanalyzer.Theresultsshowedthatthecontents ofPRO,CYSandGLUdroppedfromcallustodifferentiationcallus.Thebiggerchangewas inPROandCYS.Astragalin—Twasthehighestindifferentiationcallus.Hence,PRO,CYS andGLUmayberegardedasfrontsubstanceofAstragalin—I. Keywords:?.PolybotrysHand—Mass;Astragalin—I;freeaminoacids