甲苯胺蓝褪色分光光度法测定果糖二磷酸钠 --毕业论文

甲苯胺蓝褪色分光光度法测定果糖二磷酸钠 --毕业论文 【标题】甲苯胺蓝褪色分光光度法测定果糖二磷酸钠 【作者】湛 云 声 【关键词】果糖二磷酸钠 甲苯胺蓝 褪色分光光度法 【指导老师】王 祥 洪 【专业】化学 【正文】 1前言 果糖二磷酸钠(Sodium Fructose Diphosphate，这里缩写为FDP)一般从糖类物质中提取。通用名:1,6二磷酸果糖、果糖磷酸钠、1，6二磷酸果糖三钠盐，外文名:D-Fructose-1，6-diphosphate triSodium salt octahy drate，分子式:C6H11O12P2Na3?8H2O分子量:550.18。 其结构式: 图 1 果糖二磷酸钠的结构式 Fig.1 The structure of Sodium Fructose Diphosphate 果糖二磷酸钠FDP是存在于人体内的细胞代谢物，能调节葡萄糖代谢中多种酶系的活性，外源的果糖二磷酸钠，能通过激活磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的活性，使细胞内三磷酸腺苷和磷酸肌酸的浓度增加，促进钾离子内流，有益于缺血、缺氧状态下细胞的能量代谢和葡萄糖的利用，从而可使缺血心肌减轻损伤。 果糖二磷酸钠的物理性质:果糖二磷酸钠是白色或白色结晶性粉末，易吸湿，溶于水，溶液呈碱性，不溶于乙醇。 据科学资料报道，近年来FDP的应用研究有喜人的成果。FDP有其它不少的用途，它可用于肝手术后或功能障碍的恢复用药;它能治疗急性酒精中毒，同时有效地改变病人的心理反应;FDP能治疗成年人呼吸窘迫症;FDP可减轻化疗对机体损伤作用;FDP应用在农业上可提高种子的发芽率。有科学家发现，包括FDP在内的分子式为系列磷酸糖均有药理活性，可用于治疗水肿、血管破裂、烧伤、鼻炎、哮喘、糖尿病、白内障、神经病、高血脂、血栓症等等。这里面存在着大量工作可筛选出高活性的药物来。综上所述，FDP产品的发展前景是十分广阔的。 目前国内外对于果糖二磷酸钠的测定研究不多，主要有:定糖法[1]、定磷法[2]、酶法[3-7]、间苯二酚比色法[1,11]、二苯胺比色法[8]、紫外吸光光度法[9]、蒽酮-硫酸比色法[10]、电泳法[12]。在国家药品 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 中其含量测定 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 为二苯胺比色法。定糖法、定磷法不是专一性特征反应，并且测定体系中的其它杂质都可能影响实验结果，一般要先除杂再测定，操作 比较复杂。酶法测定果糖二磷酸钠专属高，快速准确可靠，适用范围广，但实验对环境温度要求较高。另外，该法所用酶试剂目前均靠进口，费用较高。间苯二酚比色法灵敏度较高，测定范围大，显色稳定性好，但步骤较繁琐，易出现误差的因素较多(如:分级分离步骤中，用乙醇洗涤沉淀并经离心弃上清需完全)。二苯胺比色法，没采取分级分离步骤，易受供试品中少量单磷酸果糖等的影响，该法仅适用于纯度很高的果糖二磷酸钠样品含量测定。紫外吸光光度法温度对吸光度的影响较大，在测定过程中温度控制困难[13]。因此进一步研究操作简便、灵敏度高、选择性好、线性范围宽的新分析方法有重要的意义。 经实验探索发现，果糖二磷酸钠在一定酸度条件下能引起染料甲苯胺蓝的显著褪色。在一定条件下，其褪色程度(?A)与果糖二磷酸钠的浓度成正比。可用于痕量果糖二磷酸钠的定量测定。方法有较高的灵敏度，对果糖二磷酸钠的检出限为201.1ng?mL-1。本文研究了染料体系的光谱特征、适宜的反应条件和影响因素，并考察了共存物质的影响， 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明方法有良好的选择性。用于果糖二磷酸钠片剂的测定，结果满意。 2实验部分 2.1主要试剂与仪器 2.1.1试剂 果糖二磷酸钠对照品(中国药品生物制品检定所)标准溶液:50ug/ml;甲苯胺蓝(国药集团化学试剂有限公司)，1×10-4 mol?L-1水溶液。 BR缓冲溶液:用0.04mol?L-1 H3PO4，H3BO3和CH3COOH与0.2mol?L-1 NaOH溶液按一定比例混合，配成不同pH值的缓冲溶液，并用酸度计校核其pH值。以上药品均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。 2.1.2仪器 日立UV-3010型紫外可见-近红外分光光度计;HI9204型便携式酸度计(北京哈纳科仪科技有限公司)。 2.2试验方法 在10 mL比色管中，依次加入2mLpH4.0的BR的缓冲溶液、甲苯胺蓝染料(1×10-4mol?L-1)溶液2.0mL和一定量果糖二磷酸钠溶液(50ug/ml)，摇匀，放置10 min后，用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀，15 min后，在最大褪色波长处以试剂空白为参比，测定吸光度。其中含有果糖二磷酸钠者记为A，试剂空白记为A0，计算ΔA = A- A0 。 3结果与讨论 3.1吸收光谱图 甲苯胺蓝,果糖二磷酸钠反应体系的吸收光谱如图2(a和b)所示. 以水作参比,由图2a可见，甲苯胺蓝的最大吸收波长位于628nm，以试剂为参比时，甲苯胺蓝,果糖二磷酸钠反应体系在波长为628nm处出现褪色峰。当果糖二磷酸钠与甲苯胺蓝反应后，甲苯胺蓝产生褪色反应，吸光度降低，最大褪色波长仍位于628nm。从图2b可以看出，在628nm处，其?A均与FDP的浓度成正比，因此可在此波长处褪色分光光度处褪色光光度法测定果糖二磷酸钠。 3.2最佳pH的确定 考察了溶液pH值对吸光度的影响。实验发现:甲苯胺蓝与FDP体系褪色反应的最佳pH值范围是3.7,5.0(见图3)。本实验还对在此范围内的BR缓冲液、Kolthoff缓冲液、HAc-NaAc缓冲液体系进行考察, 结果表明, 用BR缓冲溶液时体系的负吸光度值最大且稳定。 本实验选用 pH值为4.0的BR缓冲溶液来控制溶液酸度。 在10cm的比色管中加入2mL果糖二磷酸钠(50ug/ml)标准溶液，再在分别加入0.5，1.0，1.5，2.0，2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0mLpH值为4.0的BR缓冲溶液，最后加入2mL，1.0×10-4 mol?L-1甲苯胺蓝溶液，测定吸光度差值。 实验表明:BR缓冲液是好的缓冲环境，在pH4.0的BR缓冲介质中，在波长628nm处，吸光度差值随着缓冲溶液用量增加先增加后减小，当其用量为1.0mL，吸光度差值达最大。故选用pH4.0的BR缓冲溶液用量为1.0mL。 3.3染料用量的影响 实验结果表明，甲苯胺蓝溶液的适宜用量为2.5 mL，用量不足则反应不完全,ΔA偏低; 而用量过多, 试剂空白颜色太深, 无法测定，实验中甲苯胺蓝溶液的用量为2.5mL。 3.4吸光度的稳定性 实验了时间对体系稳定性的影响，结果表明，在室温下，果糖二磷酸钠与甲苯胺蓝的褪色反应在15 min内完成，稳定时间可达1.5 h，故实验均在摇匀后稳定15 min以后进行测定。 3.5标准曲线 在 628 nm处测量反应产物的褪色程度，并用-ΔA对相应的FDP浓度作图，绘制标准曲线，结果表明标准曲线的一元线性回归方程为: ?A=-0.06893+0.0179X，FDP定量测定范围是0.67,25.0 μg?mL-1，相关系数R = 0.9994，其表观摩尔吸光系数为8.4?103L?mol-1?cm-1, 对于FDP的检出限为 0.2ug?mL-1。 4分析应用 4.1共存物质的影响 本实验对在药物制剂中常使用的赋形剂滑石粉、乳糖、葡萄糖、淀粉、糊精、硬脂酸镁、蛋白质及部分氨基酸等共存物质进行干扰实验，结果发现一定量的氨基酸、糖类、无机离子不干扰测定(允许相对误差??5,)，说明该方法测定FDP有良好的选择性。 表1 共存物质的影响 Table1 Effect of Foreign Substance (CFDP = 2.0μg?mL-1) Foreign Substance Coexisting concentration (μg?mL-1) Relative error (%) Foreign Substance Coexisting concentration (μg?mL-1) Relative error (%) Na+ 40 -4.2 尿素 110 5.0 SiO32- 70 -4.2 滑石粉 90 -3.6 Cu2+ 30 -3.4 乳糖 110 4.0 SO42- 40 -3.4 葡萄糖 110 3.2 K+ 70 -2.8 果糖 100 4.3 Cl- 30 -2.8 淀粉 80 4.7 Br- 100 -3.9 糊精 110 3.6 NH4+ 430 -4.9 硬酯酸镁 150 -4.7 Al3+ 40 -4.6 D.L-组氨酸 40 4.5 Ca2+ 60 -3.5 L-色氨酸 100 -3.4 NO3- 80 -4.5 D-色氨酸 100 -4.5 Fe3+ 10 -4.5 L-组氨酸 30 -4.3 Pb2+ 10 -4.2 L-亮氨酸 20 -4.0 Zn2+ 10 -3.7 甘氨酸 30 -4.2 Mg2+ 10 -5.0 L-酪氨酸 90 3.4 BSA 10 -4.9 D.L-天冬氨酸 120 -3.7 HSA 10 -4.8 L-半胱氨酸 240 -3.5 4.2样品测定 取辽宁天龙药业有限公司不同批号果糖二磷酸钠片剂撵碎成粉末，称量0.005g以水溶解，过滤除去不溶物，清液用水定容到100mL(50ug/ml)，按实验方法测定果糖二磷酸钠的含量，同时按国家标准二苯胺比色法测定果糖二磷酸钠含量，见表2所示。结果表明平均含量本法为249.55mg，二苯胺比色法为249. 47mg，两种方法结果吻 合。 表2 果糖二磷酸钠片剂的测定结果 Table2 Results for the determination of FDP in tablets samples 批号Batch 标示量mg 测定值mg RSD/%(n=7) 回收率 二苯胺比色法 H20070623 250.0 249.1 4.1 99.6 249.0 H20070624 250.0 249.3 3.5 99.7 248.9 H20070625 250.0 250.3 1.9 100.1 250.5 5 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 我们用甲苯胺蓝染料与果糖二磷酸钠反应形成离子缔合物，用分光光度法分析并对样品中的果糖二磷酸钠含量进行测定。在实验中我们先是对果糖二磷酸钠、甲苯胺蓝染料性质通过资料、网上查找进行了解;还对它反应条件的选取;最终来确定其反应的体系。实验过程中:我们对待实验采取认真负责的态度，实事求是的科学对待实验数据，使我们的实验结果获得比较满意，从而使我们采用分光光度法这种分析方法的可行性和简便性测定样品中果糖二磷酸钠含量。