养细胞的心得

ThismanuscriptwasrevisedbytheofficeonDecember22,2012养细胞的心得我养细胞1个月了，经历了失望-绝望-希望的过程，现在把学到的几点注意问题跟大家分享一下，希望能够对新手们稍有帮助，也欢迎高手指教：1.细胞不要过度消化，有些贴壁不牢的如293T，加入胰酶在台子里晃晃就可以了，不用放到温箱中；2.传代时，细胞分的稀了或者分的不均匀，形成单细胞的克隆群，细胞就会长成密密麻麻的一群，如293T会成为小方块状，而不是正常的不规则形状，这时候，即使没有长满盘，也应该消化重新铺板。3.贴壁细胞的上清看起来清亮、颜色正常时，即使在镜下检测有些悬浮物，一般不是污染而是死细胞，尤其是复苏的细胞，由于有死细胞，会有很多悬浮物。（我以前看到有悬浮物就以为污染了，还倒掉了好不容易借来复苏的一盘细胞，后悔中）。污染了会看到明显的悬浊液。4.不能让培养基变色，稍微变黄就应该传代，如果没有长满，可以换液，但是如果变黄了，细胞就会皱缩，或者死亡，大批量的浮起来。这时候就别挽救了。5.关于污染，刚开始做的时候，无论怎么小心，还是会莫名其妙的污染。师姐说是人生必经阶段。现在我也很赞同这个理论。所以，绝望后别放弃才会有希望！祝新手同志们都能顺利的迈出养细胞的第一步！把泡玻璃器皿的酸配好，把装培养基的瓶子、移液管等都找齐，刷净，泡酸后，再高压灭菌备用；细胞培养室、培养箱和超净台也要擦净，紫外线照过；2、把培养基和胎牛血清准备好，如果是养原代的话，虽然成纤维细胞很好养，但还是用进口的FBS比较好，成功率高；3、如果是做原代的话，可以先练习取细胞的过程，熟练掌握，严格无菌；4、把你实验所需的培养瓶、培养皿、或其他特殊需要的试剂都要事先找公司订好，因为如果是进口试剂的话，国内代理那里又没有现货，则至少要一个月才能到货。细胞可是许多生物学实验的主角。如果细胞心情不好，那么实验的结果也不会好到哪儿去。如何让细胞快乐？EnzoLifeSciences的科学家可有一套。资深应用科学家MorganMathieu在此介绍了让细胞快乐的十个诀窍。1.确保所有实验室材料都无菌交叉污染是细胞培养的大敌。即使是最轻微的污染，也可能毁了几个星期的成果。因培养箱内温暖潮湿，真菌极易生长，因此必须注意定期清洁。此外，在将培养瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前，应用酒精擦拭干净，以避免污染。2.小心处理您的培养物细胞培养的脆弱性怎么强调也不为过。剧烈摇晃，或连续的温度波动可能会对生长产生不利的影响。确保培养箱是水平的，温度均一，且远离电动仪器。此外，尽量避免一次处理多个细胞系，因为它可能会影响细胞的基因型和表型。您还应定期完成STR图谱分析，以确认细胞系的身份。3.在使用前正确解冻细胞尽管解冻看起来是个简单的步骤，但必须操作得当，以免伤害细胞。长时间暴露在高温条件下会使细胞无法铺板。因此，冻存管应当在37°C水浴中放置2分钟，然后用条件培养基稀释，以避免DMSO造成直接伤害。4.使用对数生长期的细胞细胞培养过程共有3个阶段：停滞期、对数期和平台期，分别代表了低细胞生长、高细胞生长和无细胞生长。最有活力的细胞是健康的，快速分裂的，在对数期以70-80%的汇合度存在。5.在传代之前不要让细胞完全汇合汇合度是指贴壁细胞占据培养瓶表面积的比例。完全汇合意味着100%的表面都被贴壁细胞覆盖。一定要避免这种状态，因为它意味着细胞不能继续生长。不过，当务之急是使用活跃生长的细胞。6.选择最佳的培养基开发策略在细胞培养过程中，培养基是控制产品质量、产量和成本的最重要因素。必须针对每种培养物来定制培养基，以优化实验结果。在决定以哪种方式来开发您的培养基时，您有几个选择。您可以购买现成的，自己开发，也可以与另一家公司合作开发特定的培养基。在这个过程中，您需要考虑时间和成本等因素。7.配制干粉培养基时评估水的质量液体培养基往往会带来比干粉培养基更高质量的结果。这可能与水的质量有关。由于细菌在水中迅速生长，故需要监控内毒素及其他污染物。商业公司有资源来监控和控制细菌生长，比如过滤器。因此使用商业化生产的液体培养基会更加可靠一点。8.利用细胞的代谢特性来优化培养基分析使用过的培养基，有助于鉴定必要成分的代谢速率，包括氨基酸和维生素。从细胞生长阶段和蛋白生产阶段收集到的动态代谢图谱可用来平衡基础培养基和添加培养基，指导培养基的重点，有助于蛋白质的生产。9.避免细胞的过度消化胰蛋白酶通过消化负责让细胞与容器结合的蛋白质，而实现贴壁细胞的传代。如果细胞暴露在胰酶中时间太长，则胰酶将开始切割细胞表面蛋白，这会影响细胞行驶正常功能的能力。10.培养基中不要一直使用抗生素随着细胞培养物更加频繁地暴露在抗生素中，对抗生素有着天然耐药性的菌株将开始出现。这种现象可掩盖潜在的污染，这对实验是非常有害的。本文转载自其他网站，不代表健康界观点。养了很久的细胞，有一些经验和体会 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 一下，和大家分享一下。关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。请大家尊重自己的权利，请勿外传，外转！谢谢！1.不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长，生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不好的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不好，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入3ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。10分钟观察一次，20分钟，30分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。这个是我师兄发明的，谢谢他了。这个方法真的很好用！3.关于培养瓶内加入培养基的量的问题。这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。（可能也是竞争很大，有优胜劣汰吧。呵呵。）对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。4.关于选择培养瓶的问题。个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，塑料瓶比玻璃瓶会好，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更好。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，塑料瓶会好一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会好一点。呵呵，暂时有这么些经验总结，再想到的话会补充的。有不对的地方还请斧正啊。:-)