大肠菌群的检测方法
(日本方法)
本标准适用于出口食品中大肠菌群的检验。
本标准等同采用日本标准。
1. 设备和材料
?吸管:1ml，具有0.1ml刻度;5ml和10ml,具1ml刻度。
?培养箱:36?1?。
?均质器。
?天平:感量0.1g。
?显微镜。
?菌落计数器。
?冰箱:0,5?和,15,20?。
?微波炉。
2.培养基和试剂
?去氧胆酸盐琼脂(DC)。
?75,乙醇。
?稀释剂:灭菌生理盐水(0.85,)。
?革兰氏染色液。
3.样品制备
?以无菌操作采取有代
表
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性的样品。如有包装，则用75,乙醇在开口处擦试
后取样，如不能及时检测，应将冷冻品置于,15?保存;非冷冻易腐的食品，
应置于4?冰箱保存。检验前冷冻样品可于2,5?18小时解冻，或在45?
以下15分钟内解冻。
? 不同食品样品匀液的制备:
?液体食品
以无菌吸管取样25毫升放入盛有225毫升稀释剂的灭菌玻璃瓶内，(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，以30cm幅度，于7秒内振摇25次(或以机械振荡器振摇)，制成1:10的样品匀液。
?固体或半固体食品，以无菌操作取25克样品，放入装有225毫升稀释剂
的灭菌均质杯内，于8000r/min均质1,2分钟，制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2分钟，应在均质杯外加冰水冷却。
?稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计，用稀释剂将样品匀液制成一系
-2-3-4列十倍递增的样品稀释液，如10、10、10……。从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不得超过15分钟。
?平板接种
?对于每一样品，选用合适的三个连续稀释度的样品液进行计数。
?分别用灭菌吸管吸取1毫升样品液放入作了适宜标志的灭菌平皿内。每
个样品用两个平皿。
?分别加12,15毫升去氧胆酸盐琼脂(45?1?)到各平皿内。立即将平
皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防
止把混合物溅到平皿壁和盖上。凝固后于其表面再覆盖一薄层培养基，同时
将去氧胆酸盐琼脂倾注到空白平皿作空白对照。
?培养:待琼脂凝固后将平皿翻转，立即放入36?1?的恒温培养箱内，培养24?2小时。
?菌落计数和记录:培养后，立即数每个平板上的典型菌落数。(菌落特征:直径0.5毫米以上的明显的紫红色菌落，菌落周围有红色的胆汁沉淀环)。 ?结果
报告
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报告每克(毫升)样品中的大肠菌群菌落数。
附录A
培养基和试剂
(补充件)
A1去氧胆酸盐琼脂
蛋白胨 10.0g
乳糖 10.0g
去氧胆酸钠 1.0g
磷酸氢二钾 2.0g
柠檬酸铁铵 2.0g
中性红 0.033g
琼脂 15.0g
氯化钠 5.0g
蒸馏水 1000ml
将各成分加于蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷却至50?备用。
,勿过分加热，勿高压灭菌。
浙公网安备 33021202002483