IPTG残留量的
检测
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原理与标准:
本品经过实验研究,对制品中的IPTG残留量采用HPLC方法检测。根据IPTG的浓度与210nm吸收峰峰面积的相关关系,可以计算出样品中的IPTG残留量。
企业标准:成品中每毫克SA的IPTG残留量不超过20ng。 仪器与方法:
仪器:岛津LC,100
色谱条件:层析柱:Shim,Pack ODS 15 cm×0.6cm
流动相:A液: 1‰TFA水溶液
B液: 1‰TFA乙腈液
B,:0-10min:0,,50,
10-11min:50,,0,
检测波长:210nm
进样量:20ul
标准溶液:
配制1mg/ml的IPTG乙腈溶液,稀释成下列浓度:
0.375ug/ml,0.75ug/ml,1.5ug/ml,3ug/ml,6ug/ml,12ug/ml. 测定:
最低检测极限
上述标准溶液的测定表明, IPTG浓度为0.375ug/ml时进样20ul
检测不出吸收峰,IPTG浓度为0.75ug/ml时进样20ul检测出峰面积
为817,表明本方法最低检测极限低于0.75ug/ml.
标准曲线:
IPTG标准曲线
浓度(ug/ml) 面积
0.75 817
1.5 1651
3 3227
6 6417
12 13259
,=0.9998, Y=0.00091X+0.05529
样品测定:
样品:20130802P,20130811P,20130822P
每瓶样品加2ml乙腈,充分振荡后10000rpm,离心15min,取上
清,进样20ul。
结果
测定结果显示三批样品均未检出IPTG吸收峰。 即IPTG残留浓
度低于检测极限值0.75ug/ml。
SA为100mg,用2ml乙腈萃取,经计算,每mg SA的IPTG残
留量低于15ng。
结论:样品IPTG残留符合规程。