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藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响

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藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响 藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响 [字体: 大 中 小] 【摘要】 目的:探讨联合 应用 藻酸盐敷料(alginate dressing)与冻干鼠表 皮生长因子(mEGF)对难愈性创面表皮干细胞(ESCs)增殖分化以及碱性成纤 维细胞生长因子(bFGF)表达的 影响 ,评价其疗效。 方法 :采用前瞻性、随 机、对照设计,选择经常规换药抗炎 治疗 1个月仍未愈合创面18例病例,随 机分成3组:藻酸盐凝胶与mEGF...

藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响
藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 皮干细胞及bFGF表达的影响 藻酸盐敷料与联合mEGF对难愈性创面表皮干细胞及bFGF表达的影响 [字体: 大 中 小] 【摘要】 目的:探讨联合 应用 藻酸盐敷料(alginate dressing)与冻干鼠表 皮生长因子(mEGF)对难愈性创面表皮干细胞(ESCs)增殖分化以及碱性成纤 维细胞生长因子(bFGF)表达的 影响 ,评价其疗效。 方法 :采用前瞻性、随 机、对照设计,选择经常规换药抗炎 治疗 1个月仍未愈合创面18例病例,随 机分成3组:藻酸盐凝胶与mEGF联合治疗组(A组)、mEGF治疗组(B组)、 常规治疗组(C组),每组6例。治疗后7 d、14 d、21 d、28 d评价其创面 愈合指数,7 d和14 d时取活检作常规病 理学 观察,采用免疫组化SP法评 定角蛋白10(CK10)、角蛋白15(CK15)和bFGF表达阳性细胞数目。结果:A 组和B组均能明显促进创面愈合,其中以A组疗效更加突出(P,0.05);A组 创面修复细胞增殖明显,表皮增厚,上皮化活跃,B组虽也有类似改变但不如A 组显著;A组和B组ESCs明显增多、增大、分层。上皮脚增多,呈多角状,以 A组尤其明显,C组无明显变化。bFGF的表达也具有以上类似的趋势,A组7 d 和14 d的表达明显强于B组和C组。结论:藻酸盐凝胶与mEGF联合应用治疗难 愈性创面,能更好地促进ESCs的增殖分化,增加bFGF的表达,较单用mEGF疗 效更佳。 【关键词】 藻酸盐敷料 表皮生长因子 干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 创伤 愈合 Abstract: Objective: To evaluate the efficacy of combined therapy with alginate dressing and mouse epidermal growth factor (mEGF) on proliferation and differentiation of epidermal stem cells (ESCs), and expression of the bFGF in patients with refractory wound. Methods: Eighteen cases of skin defects treated with dressing changing of two months adopted in this study, there were 12 males and 6 femals, aged from 18 to 61 years (mean 36.4 years). All the patients were randomly divided into 3 groups: alginate dressing and mEGF group (group A,n=6), mEGF group (group B,n=6) and control group (group C,n=6). The wound closure indexes were measured in 7, 14, 21, 28 days. The samples were harvested 7 and 14 days after treatment for pathologic examination. The positive staining cells of cytokeration 10 (CK10), cytokeration 15 (CK15) and bFGF were evaluated with SP immuohistochemical staining technique. Results: The wound healing was promoted in group A and group B, but the wound closure indexes was increased in group A (P<0.05). Pathological examination showed the epidermis was thicker in group A than that in group B and C. Treatment by the alginate dressing combined with the mEGF, angiogenesis was active and granulation was enhanced. As compared with group B and group C, SP immuohistochemical staining showed that ESCs of group A were bigger in size and larger in number. There was significant difference between group A and group B (or C) on the proliferation and differentiation of ESCs. The expression of the bFGF was shown in the fibroblasts, the blood capillaries and the basal layer of the epidermis in group A, B and C. There was significant difference between group A and group B (P<0.05), group B and group C (P<0.05). Conclusion: Combined therapy with alginate dressing and mEGF have a better results than that with mEGF only on proliferation and differentiation of ESCs in patients with refractory wound. Key words: alginate dressing; epidermal growth factor; stem cells; basic fibroblast growth factor; wound healing 皮肤创面愈合是一个复杂的病理生理过程,通常认为创面愈合是由进入创面的 成纤维细胞增殖、分化和合成分泌、细胞外基质的纤维化、新生血管长入创面 的血管化和表皮细胞增生覆盖创面等综合作用的结果。随着分子生物学的 发 展 ,特别是对各种生长因子的深入 研究 ,使得创伤修复进入到一个新的阶段。 然而, 目前 对于难愈性创面,临床上大多数仍然首选外科手术治疗来消灭创 面,而这些方法令很多患者心理上难以接受,且存在增加创伤、引起排异反应 等弊端,故如何通过促进创面的自我修复来治疗难愈性创面一直是人们不断探 索的难 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 [1-3]。本研究试图将藻酸盐敷料(alginate dressing)与冻干鼠表 皮生长因子(mEGF)联合应用于难愈性的皮肤创面,并评价其疗效,探讨有关 细胞生物学机制。 1 材料和方法 1.1 药物、试剂与器材 藻酸盐凝胶为coloplast产品,国药管械(进)字2000 第1694号。冻干鼠表皮生长因子购自杭州天目北斗生物制药有限公司 (S1999000l),使用时配制成5 000 IU/ml,置4 ?冰箱保存。SP免疫组化 试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色剂、小鼠抗人CK10单克隆抗体、小鼠抗人 CK15单克隆抗体、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)鼠抗人单克隆抗体均购自北京中山生物技术有限公司。其他常 用试剂由浙江省人民 医院 病理科提供。主要设备有德国LEIca病理系统: RM2135切片机、ST5020自动染色机、ASP300脱水机。显微摄影系统(Olympus BX51),MIAS病理图像 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 系统。 1.2 临床资料 因急性创伤所致皮肤缺损创面,经常规换药抗炎治疗1个月仍未 愈合,且创面大于12 cm2而无感染者,取得患者同意后纳入本研究。排除合并 有糖尿病、严重心肾功能不全、严重消耗性疾病及其他全身情况较差的患者。 本组18例,随机分成3组,每组6例。藻酸盐凝胶与mEGF联合治疗组(A组, 男4例,女2例):足创面3例、小腿创面2例、手创面1例;mEGF治疗组 (B组,男2例,女4例):足创面5例、小腿创面1例;常规治疗组(C组, 男6例):足创面3例、手创面3例。三组间创面所在部位的分布差异无显著 性(P,0.05)。 1.3 治疗方法 彻底清创后,周围擦拭干净。A组将mEGF以100 IU/cm2创面均 匀喷洒于合适大小藻酸盐敷料上后覆盖;B组用普通纱布代替藻酸盐敷料如前 法处理;C组用凡士林纱布贴敷创面,各组处理完毕后均覆以普通纱布。治疗过程中注意无菌操作。前1周左右创面渗出较多,每天换药,渗出减少后隔天换药。 1.4 评价指标及方法 1.4.1 取材及标本制备:治疗后7 d、14 d切取少量创面边缘组织,予10%中性甲醛固定,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡包埋后,4μm厚连续切片备用。 1.4.2 免疫组织化学染色:按照 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 书操作, 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 CK10、CK15及bFGF表达阳性的细胞数。 1.5 统计学处理方法 用SPSS12.0统计软件对数据进行统计学处理,计量资料(?s)均用单因素方差分析q检验;计数资料用多个独立样本秩和检验。 , 1 , 2 , 下一页 2, 欢迎浏览更多首页 ? 医学论文 ? 其它医学论文文章 [字体:大 中 小] 2 结果 免疫组化SP法染色发现,7 d时,A组和B组CK15染色阳性的细胞开始增多,且A组多于B组,但两组间差异无显著性(P,0.05)。镜下观察这些细胞大多体积较小,呈圆形,核大,胞质中有较多颗粒。而C组CK15染色阳性的细胞很少(P,0.05)。14 d时,A组和B组CK15阳性细胞表达继续增加,体积增大,分层明显。此时,两组差异较前一阶段更加显著,C组亦有增多,但其与A组和B组相比明显较少,三组间差异均有显著性(P,0.05)。而且A组上皮脚较其他组明显增粗、增多,呈多角状。 对CK10染色阳性细胞的观察也发现,7 d时,A组和B组开始有较多细胞表达CK10,但两组差别不如同时期CK15染色明显(P,0.05),C组细胞表达CK10较少(P,0.05)。14 d时,3组CK10表达均有增加,以A组最明显,三组间差异均有显著性(P,0.05)。该染色同样可以观察到A组上皮脚较多,细胞分层。 此外,我们还发现,bFGF染色阳性的细胞主要定位于成纤维细胞和血管内皮细胞。7 d时,A组和B组bFGF染色阳性的细胞开始增多,以A组最为明显(P,0.05)。14 d时,A组和B组阳性细胞表达继续增加,仍以A组增加较为显著(P,0.05),C组略有增多,但其与A组和B组相比差异有显著性(P,0.05)。 3 讨论 许多生长因子如bFGF、EGF、转化生长因子-β(transforming growth factor- β,TGF-β)、血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)以及角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)等在创伤修复中发挥着关键作用[1]。EGF是一种具有强烈促细胞分裂作用的小分子多肽,可与绝大部分哺乳动物细胞表面的穿膜受体结合。创伤后局部聚集的血小板释放大量无活性的EGF,与相应受体结合后,激活EGF受体胞内段酪氨酸蛋白激酶,使其磷酸化,刺激一系列下游信号传递导致相关修复细胞及其细胞外基质(extracellular matrix,ECM)大量增殖,从而促进创面愈合[2]。更为重要的是,它还可以通过调控表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)的增殖与分化来修复缺损的皮肤创面,因此适当增加创面局部EGF的含量对加速创面的愈合是非常有意义的[4,5]。 一般认为,EGF必须以一定的浓度持续地作用于创面才能达到较为理想的结果。但由于组织中EGF的含量较低,且创面组织炎症浸润和组织坏死对局部组织EGF的释放有一定的抑制作用,因此仅有内源性的EGF往往难以满足创伤后组织自身修复过程的需要。然而, 应用 EGF水剂 治疗 创面又很容易流失,尤其在一些分泌物较多的创面,它很快被稀释并随分泌物排出。Tanaka等[2]应用EGF凝胶剂则较好地解决了这一难题。他们认为凝胶剂可在创面形成薄膜,具有防止细菌污染的屏障作用,而且凝胶剂在创面停留时间较液体制剂长。此外凝胶较为柔和,可减轻敷料对创面的直接刺激,其良好的保湿性、润滑性可使创面保持一个湿润的环境,这对创面的愈合是非常有利的[6,7]。然而由于种种原因, 目前 临床应用EGF凝胶剂较少。 藻酸盐敷料是一种类似纤维素的不能溶解的多糖,其原料是从海藻中提取的藻蛋白酸,在制作敷料时它被转换成一种钙盐[3]。藻酸盐具有极强的吸收性,能吸收相当于自身重量20倍的液体,能有效控制渗液并延长使用时间。在与伤口接触时,藻酸盐中的钙离子能置换伤口渗液中的钠离子,从而在伤口表面形成一层稳定的网状凝胶,能保持创面湿润且不粘创面,使伤口同外界隔绝,形成一个密闭的无大气氧环境,这些特点与EGF凝胶剂非常相似。我们的 研究 [8,9]发现,mEGF与藻酸盐敷料联合使用能协同两者的优势,明显上调创面bFGF的表达,刺激以CK15和CK10为标志[10]的EsCs增殖、分化,加速创面肉芽组织及其毛细血管生长,促进创面修复细胞增殖,加速创面的上皮化。 内源性bFGF在皮肤创面中表达极少,而应用外源性bFGF可以明显促进溃疡创面和烧伤创面的愈合。一方面,bFGF可直接作用于成纤维细胞和血管内皮细胞膜上的特异性受体,通过细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路激活c-fos介导血管内皮细胞的迁移活性,促进其有丝分裂,使肉芽组织血管生成能力增强。此外,该细胞因子还能刺激多种细胞的分裂与增殖,激活受体分子的蛋白激酶,促进蛋白合成、基质形成,并通过与细胞膜表面的受体结合,调节细胞的生长周期,有效促进细胞DNA 合成,促使大量修复细胞如成纤维细胞等增殖。另一方面,有研究还表明,bFGF与EGF、维生素C等对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs) 具有促进增殖作用,使MSCs转化为ESCs以及血管内皮细胞、表皮细胞、皮肤附件结构等参与修复,并能表达血管特异性 的?因子[11,12]。且MSCs能分泌细胞因子和生长因子促进创面肉芽组织的形 成、再上皮化及附件的再生,使创面胶原等细胞外基质沉积,肉芽组织生长、 增厚,创面再上皮化加速从而缩短愈合时间,促进创面修复。由此可见,bFGF 的过表达与ESCs的增殖、分化在创面愈合过程中具有互相促进的作用。 综上所述,联合mEGF与藻酸盐敷料治疗难愈性皮肤缺损创面,不仅可以增加 bFGF的表达以及ESCs的增殖,而且可以通过bFGF与ESCs相互作用,进一步 促进创面快速高质量地愈合。 【 参考 文献 】 [1] Fu X, Li X, Cheng B, et al. 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