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化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法

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化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法 时间就是金钱,效率就是生命~ 附件1 化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的 检测方法 ,征求意见稿, 1 适用范围 本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的方法。 本方法适用于水剂类、香波类、膏霜类和散粉类化妆品中替硝唑(CAS:19387-91-8)、4-硝基咪唑(CAS:3034-38-6)、2-甲硝咪唑(CAS:88054-22-2)、羟基甲硝唑(CAS:4812-40-2)、甲硝唑(CA...

化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法
化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法 时间就是金钱,效率就是生命~ 附件1 化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的 检测方法 ,征求意见稿, 1 适用范围 本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的方法。 本方法适用于水剂类、香波类、膏霜类和散粉类化妆品中替硝唑(CAS:19387-91-8)、4-硝基咪唑(CAS:3034-38-6)、2-甲硝咪唑(CAS:88054-22-2)、羟基甲硝唑(CAS:4812-40-2)、甲硝唑(CAS:443-48-1)、二甲硝咪唑(CAS:551-92-8)、特尼哒唑(CAS:1077-93-6)、氯甲硝咪唑(CAS:4897-25-0)、苯硝咪唑(CAS:94-52-0)、塞克硝唑(CAS:3366-95-8)、羟基异丙硝唑(CAS:35175-14-5)、奥硝唑(CAS:16773-42-5)、异丙硝唑(CAS:14885-29-1)、羟基二甲硝咪唑(CAS:936-05-0)、洛硝哒唑(CAS:7681-76-7)等15种禁用硝基咪唑类抗生素的含量测定。本方法中各化合物的检出限、定量下限及取0.5g样品时的检出浓度及最低定量浓度见表1。 表1 15种硝基咪唑抗生素的检出限、定量下限、检出浓度及最低定量浓度 检出限 定量下限 检出浓度 最低定量浓度 化合物名称 /(ng/mL) /(ng/mL) /(,g/g) /(,g/g) 4-硝基咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 2-甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 洛硝哒唑 0.75 1.5 0.05 0.1 特尼哒唑 0.25 0.5 0.02 0.04 氯甲硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 苯硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 塞克硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 替硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ (续表) 检出限 定量下限 检出浓度 最低定量浓度 化合物名称 /(ng/mL) /(ng/mL) /(,g/g) /(,g/g) 羟基异丙硝唑 0.75 1.5 0.05 0.1 奥硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 异丙硝唑 0.1 0.2 0.005 0.01 2 方法提要 化妆品样品经过超声提取、高速离心及固相萃取后,用高效液相色谱-串联四极杆质谱进行检测 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。与平行操作的甲硝唑等15种禁用硝基咪唑的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品进行比较,以保留时间和优化的监控离子对进行定性,以其中信噪比较高、峰形好及背景干扰小的离子为定量离子进行定量,然后以标准曲线进行外标法定量。 3 试剂和 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为实验室用一级用水。 3.1 甲醇,色谱纯。 3.2 乙腈,色谱纯。 3.3 乙醇,分析纯。 3.4 甲酸,色谱纯。 3.5 4-硝基咪唑,纯度?97%。 3.6 2-甲硝咪唑,纯度?99%。 3.7 羟基甲硝唑,纯度?99%。 3.8 羟基二甲硝咪唑,纯度?98%。 3.9 甲硝唑,纯度?99%。 3.10 二甲硝咪唑,纯度?98%。 3.11 洛硝哒唑,纯度?99%。 3.12 特尼哒唑,纯度?99%。 3.13 氯甲硝咪唑,纯度?98%。 3.14 苯硝咪唑,纯度?98%。 3.15 塞克硝唑,纯度?99%。 3.16 替硝唑,纯度?99%。 3.17 羟基异丙硝唑,纯度?99%。 3.18 奥硝唑,纯度?98%。 3.19 异丙硝唑,纯度?99%。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 3.20 空白化妆品样品:被检测不含目标化合物成分的化妆品。 3.21 固相萃取柱:Oasis HLB,6 cc,500 mg。 3.22 15种硝基咪唑类抗生素的标准储备溶液:准确称取10 mg(精确至0.0001 g)硝基咪唑抗生素标准品,置于10 mL容量瓶中,用甲醇(3.1)溶解并稀释种刻度,混匀,得到每种硝基咪唑浓度为1000 ,g/mL的标准储备液。 3.23 15种硝基咪唑类抗生素的混合标准储备液:分别精密量取每种硝基咪唑抗生素的标准储备液(3.21)各5 mL 置于100 mL 容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,混匀,得到50 ,g/mL 的硝基咪唑类抗生素混合标准储备液。 3.24 15种硝基咪唑类抗生素的标准工作液:精密量取一定体积的混合标准储备液(3.22)置于10 mL 容量瓶中,用 10 % 甲醇/水稀释至刻度,使得各硝基咪唑抗生素的浓度分别为0.1 ,g/L、0.2 ,g/L、0.5 ,g/L、1 ,g/L、2 ,g/L、5 ,g/L、10 ,g/L、20 ,g/L、50 ,g/L、100,g/L、200 ,g/L、500 ,g/L、1000 ,g/L、2000 ,g/L、5000 ,g/L。 4 仪器和设备 4.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪。 4.2 分析天平:感量为0.001 g。 4.3 分析天平:感量为0.0001 g。 4.4 超纯水器。 4.5 涡旋振荡器。 4.6 精密移液器。 4.7 超声波清洗机。 4.8 通风柜。 4.9 旋转蒸发仪。 装置。 4.10 氮吹仪:配有加热 4.11离心机:离心速率可达5000 rpm。 5 分析步骤 5.1 样品预处理 水剂类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)水剂类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 香波类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)香波类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得香波中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 膏霜类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)膏霜类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得膏霜中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 散粉类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)散粉类样品,置于10 mL 比色管中,加入50% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得散粉中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取 /水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 30 min,冷却至室温后,用50%甲醇 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 5.2 液相色谱/质谱参考条件 5.2.1 色谱参考条件 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 色谱柱:C色谱柱(2.1 mm×150 mm,3.5 ,m); 18 流动相:乙腈(A)和 0.1% 甲酸-水(B); 梯度洗脱程序见表 2; 表 2 梯度洗脱条件 Time(min) Flow(mL/min) A(%) B(%) 0.00 0.25 5.0 95.0 2.00 0.25 5.0 95.0 17.00 0.25 35.0 65.0 19.00 0.25 95.0 5.0 20.00 0.25 95.0 5.0 20.10 0.25 5.0 95.0 22.00 0.25 5.0 95.0 注:对于梯度洗脱条件,操作者可根据实际样品的不同而选择最佳色谱分离条件,使得禁用硝 基咪唑类成分与其他组分峰获得分离。 柱温:30?; 进样量:5 ,L。 5.2.2 质谱参考条件 毛细管电压:3.0 kV; 萃取电压:3.0 V; 射频透镜电压:0.1 V; 离子源温度:150 ?; 脱溶剂气温度:400 ?; 脱溶剂气流量:800 L/hr; 锥孔气流量:50 L/hr; -3 碰撞室压力:3.2×10mbar; 低质量端1分辨率:3.0; 高质量端1分辨率:15.0; 离子能量1:0.5 V; 碰撞室入口电压:1 V; 碰撞室出口电压:1V; 低质量端2分辨率:3.0; 高质量端2分辨率:15.0; 离子能量2:0.5 V; 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 碰撞气体:氩气; 数据采集模式:MRM(多反应监测)。 0,2.5 min:不进入质谱仪分析,2.5,15 min:进入质谱仪分析。 15种硝基咪唑类抗生素的质谱参数见表3。15种硝基咪唑类抗生素的MRM色谱 图见图1。 表3 15种禁用硝基咪唑类抗生素的质谱相关参数 电离 监控离子对锥孔电压碰撞能量保留时间化合物名称 方式 (m/z) (V) (eV) (min) 114.2/68.2* 15 +4-硝基咪唑 ESI 25 2.94 114.2/84.2 12 128.2/82.1* 15 +2-甲硝唑 ESI 20 3.97 128.2/111.1 15 188.2/123.2* 15 +羟基甲硝唑 ESI 20 4.18 188.2/126.2 14 158.2/140.2* 15 +羟基二甲硝咪唑 ESI 20 5.24 158.2/55.2 15 172.2/128.2 15 +甲硝唑 ESI 20 5.43 172.2/82.1* 20 142.2/96.2* 15 +二甲硝咪唑 ESI 25 6.26 142.2/81.2 20 201.2/140.2* 12 +洛硝哒唑 ESI 15 6.50 201.2/55.2 20 186.2/128.2 15 +特呢哒唑 ESI 20 7.05 186.2/82.2* 25 162.2/116.1* 17 +氯甲硝咪唑 ESI 25 8.38 162.2/145.1 15 164.2/118.2* 18 +苯硝咪唑 ESI 30 8.11 164.2/91.1 30 186.2/128.2* 15 +塞克硝唑 ESI 20 7.90 186.2/82.1 20 248.2/121.2* 15 +替硝唑 ESI 25 8.91 248.2/128.2 20 186.2/168.2* 15 +羟基异丙硝唑 ESI 20 10.07 186.2/122.2 20 220.2/128.2 15 +奥硝唑 ESI 25 10.65 220.2/82.1* 25 170.2/124.2* 17 +异丙硝唑 ESI 30 12.90 170.2/109.2 24 *: 定量离子对 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图 1 15种禁用硝基咪唑类抗生素的MRM色谱图 1. 4-硝基咪唑;2. 2-甲硝咪唑;3. 羟基甲硝唑;4.羟基二甲硝唑;5. 甲硝唑;6. 二甲硝咪唑;7. 洛硝哒唑;8. 特呢哒唑;9. 塞克硝唑;10. 苯硝咪唑;11. 氯甲硝唑;12. 替硝唑;13. 羟基异丙硝唑;14. 奥硝唑;15. 异丙硝唑 5.3 定性判定 液相色谱-串联四极杆质谱对样品进行定性测定,在相同试验条件下,样品中被测禁用物质的质量色谱峰保留时间与标准溶液中对应物质的质量色谱峰保留时间应一致(变化范围在?2.5% 之内);样品色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与相当浓度标准溶液的离子相对丰度比的偏差不超过表4 规定范围,则可以判断样品中存在对应的禁用硝基咪唑类物质。 表4 定性判定时相对离子丰度的最大允许偏差 k?50% 50 %> k ? 20 % 20 %> k ? 10 % k? 10 % 相对离子丰度(k) ?20% ?25% ?30% ?50% 允许的最大偏差 5.4 定量测定 在“5.2”项液相色谱-串联四极杆质谱分析条件下,用系列浓度基质标准工作溶液分别进样,以系列浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,进行线性回归,建立基质标准曲线。取“5.1”项下处理得到的待测溶液进样5 ,L,按“6” 项公式计算,得出样品中禁用硝基咪唑的质量分数。 5.5 平行试验 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 按照所建立的方法操作,对同一样品独立进行测定,获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算数平均值的10% 。 6 计算 W(目标物含量) =ρV/ m 式中: w——化妆品样品中硝基咪唑抗生素的质量分数,,g/g; ρ——从标准工作曲线中得出的试样中硝基咪唑抗生素的浓度,,g/mL; V——按稀释倍数折算的被测样总体积,mL; m——试样取样质量,g。 7 回收率和精密度 本方法在低、中、高3个添加水平范围内的平均提取回收率为80.00%,98.52% ,相对标准偏差均小于5%,平均方法回收率为 85.42%,108.33%,并且相对标准偏差均小于5%。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素的 检测方法起草说明 为加强化妆品中禁限用物质的监督管理,国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司于2012年3月9日委托中国检验检疫科学研究院开展化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素检测方法标准建立和验证工作,现就起草工作有关情况说明如下: 一、起草的必要性 替硝唑、甲硝唑、奥硝唑和4-硝基咪唑等15种硝基咪唑类抗生素为临床常用的硝基咪唑类抗微生物药物,具有抗菌和消炎的作用。我国已明确规定化妆品中严禁添加甲硝唑等硝基咪唑类抗生素,但仍有部分化妆品生产企业为追求经济利益,不顾消费者的健康安全,在生产过程中违法添加这些禁用物质。在祛痘化妆品中违法添加甲硝唑等抗生素,虽然在短期内可能起到除螨、祛痘作用,但长期使用会刺激皮肤,引起接触性皮炎,严重时可导致对硝基咪唑类抗生素的耐药性,造成皮肤健康隐患。因此,对化妆品中甲硝唑等违禁药物进行监督、检测,保证化妆品卫生质量十分必要。 根据所查文献,目前检测硝基咪唑类化合物的中文文献以有关蜂蜜、肉类、动物内脏和饲料等居多,国外学者对硝基咪唑类抗生素的研究也比较广泛,但鲜有化妆品中硝基咪唑化合物检测方法的报道和文献,主要研究对象为猪及家禽肌肉、动物肠衣、蜂蜜、血清、鸡蛋、动物排泄物等。关于化妆品中硝基咪唑类化合物的文献较少,而且尚未见通过液相色谱-串联质谱联用方法同时检测化妆品中15种禁用硝基咪唑类化合物的报道。本研究建立的液相色谱-串联质谱检测方法,灵敏、定性可靠、操作简单,可以快速同时检测化妆品中的15种禁用硝基咪唑抗生素,能够为化妆品中禁用硝基咪唑类抗生素的监测和风险评估提供参考依据。 二、起草依据及文献 (1)《化妆品卫生 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 》 (2)《化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范》 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ (3)《欧盟化妆品管理法规及检测方法与指南(第二版)》 (4)徐娟, 陈捷, 邵琳智等. 超高效液相色谱-串联质谱法同时检测口腔卫生用 品中的硝基咪唑类药物[J]. 色谱,2011,29(5):450-453. (5)殷居易,谢东华,刘永明等. 蜂产品中9种硝基咪唑类药物原药及代谢物残 留量的HPLC- APCI (+) MS /MS分析[J]. 分析测试学报,2009,28 (8):935-939. (6)刘永明,曹彦忠,李金等. 液相色谱-串联质谱法快速测定蜂蜜中3 种硝基 咪唑类药物残留[J]. 色谱,2010,28(6):596-600. (7)谢文,陈笑梅,丁慧瑛等. 液相色谱串联质谱同位素稀释法对蜂王浆中10 29(5):497-501 种硝基咪唑类药物残留的检测[J]. 分析测试学报,2010, (8)尚彬如,陈义强,张丽英. 液相色谱-串联质谱测定饲料中7种硝基咪唑类药 物[J]. 中国畜牧杂志,2011,47(3):66-70. (9)李存,皇甫伟国,杨挺等. 液相色谱串联质谱法快速测定猪尿中10种镇静剂 类药物残留量[J]. 分析化学,2010,38(7):1015-1018. (10)尚彬如,张丽英. 硝基咪唑类药物检测技术研究进展[J]. 中国畜牧杂志, 2010,46(1):61-64. (11) M. Gaugain, J.P. Abjean. High-performance thin-layer chromatographic method for the fluorescence detection of three nitroimidazole residues in pork and poultry tissue. Journal of Chromatography A . 1996, 737:343-346 (12) Aerts RM, Egberink IM, Kan CA, Keukens HJ, Beek WM. Liquid chromatographic multicomponent method for determination of residues of ipronidazole, ronidazole, and dimetridazole and some relevant metabolites in eggs, plasma, and feces and its use in depletion studies in laying hens. Journal-Association of Official Analytical Chemists. 1991, 74:46-55 (13) S. Semeniuk, A. Posyniak, N. Niedzielska. Determination of Nitroimidazole Residues in Poultry Tissues,Serum and Eggs by High-Performance Liquid Chromatography. Biomedical Chromatography. 199, 59:238-42 (14) Newkirk DR, Righter HF, Schenck FJ, Okrasinski JL Jr, Barnes CJ. Gas chromatographic determination of incurred dimetridazole residues in swine tissues. Journal-Association of Official Analytical Chemists. 1990, 73:702-4 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 三、起草原则 本检测方法兼具先进性与可行性,条理清晰,可操作性强,尽量采用目前化妆品检测实验室普遍具备的先进的分析技术,选择准确、可行、便于实际操作的分析条件,保证检测方法的可操作性和重现性。 四、起草过程 国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司于2012年3月9日委托中国检验检疫科学研究院开展化妆品中甲硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素检测方法标准建立和验证工作,中国检验检疫科学研究院经过查阅国内外相关文献资料等调研工作后,开始了实验研究;2012年8月6日就该项工作的进展情况向国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司进行了汇报。2012年10月,11月,中国科学院长春应用化学研究所、广东出入境检验检疫局技术中心、苏州出入境检验检疫局技术中心等三家单位对本项目建立的化妆品中甲硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素检测方法进行了验证,于11月上旬陆续将验证材料报送中国检验检疫科学研究院。 五、重点说明的问 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 (1)关于体例 本检测方法的体例主要参照现行《化妆品卫生规范》(2007版)的卫生化学检测方法的体例,便于化妆品检验领域相关检测人员的阅读和实际操作。 (2)关于15种禁用硝基咪唑类抗生素 替硝唑、甲硝唑、奥硝唑和4-硝基咪唑等15种硝基咪唑类抗生素为临床常用的硝基咪唑类抗微生物药物,具有抗菌和消炎的作用。在化妆品中违法添加甲硝唑等抗生素,虽然短期内可能起到除螨、祛痘作用,但长期使用会刺激皮肤,引起接触性皮炎,严重时可导致对硝唑类抗生素的耐药性,造成健康隐患。我国已明确规定化妆品中严禁添加甲硝唑等硝基咪唑类抗生素。 (3)关于检测方法的建立和验证。经过对化妆品样品前处理方法的摸索及分析测试条件的优化,最终建立了化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的液相色谱-串联质谱检测方法。 方法验证表明,本研究所建立的化妆品中15种禁用硝基咪唑的检测方法线性良好(相关系数大于0.99),检出限均低于2 ng/mL,最低定量浓度均低于0.1 ,g/g,高、唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 中、低三个浓度水平的平均方法回收率在85.42%,108.33% 之间,相对标准偏差RSD小于5%,满足相关技术要求,表明所建立方法可以作为化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法。 三家实验室验证结果表明,回收率、精密度、标准曲线均符合要求,验证了所建立方法可以作为化妆品中15种禁用硝基咪唑类抗生素的检测方法。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 化妆品中替硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素 检测方法编制说明 1 任务来源 受国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司的委托,负责化妆品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑和4-硝基咪唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素检测方法的研制及标准起草工作,建立化妆品中甲硝唑、替硝唑、奥硝唑和4-硝基咪唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素快速、准确和灵敏的高效液相色谱串联质谱检测方法。 2 研究背景 随着国民生活水平的提高和人们对美的追求,化妆品特别是一些日用的护肤、美白、清洁用品等已经成为人们日常生活中不可或缺的必需品。因此,化妆品的安全性也越来越成为相关部门和广大消费者关注的热点问题。 硝基咪唑类抗生素广泛用于抗厌氧菌感染,对毛囊虫病、痤疮、酒渣鼻也有一定的疗效。因此,为增强使化妆品的祛痘和美白效果,部分化妆品生产企业在生产过程中通常加入某种或某几种硝基咪唑类抗生素药物。硝基咪唑是一类具有硝基咪唑环结构的药物,其性状为白色或淡黄色结晶,弱碱性,能和酸结合成盐,易溶于甲醇,微溶于水。它属于抗微生物药物,具有抗菌和消炎的作用。我国已明确规定化妆品中严禁添加甲硝唑等硝基咪唑类抗生素药物。在祛痘化妆品中违法添加硝基咪唑类抗生素,虽然短期内可能起到除螨、祛痘的作用,但长期使用会刺激皮肤,引起接触性皮炎,严重时可导致对硝基咪唑类化合物的耐药性,造成健康隐患。因此对化妆品中是否添加硝基咪唑类等违禁药物进行监督、检测,保证化妆品卫生质量十分必要。 3 研究现状 根据所查文献,目前检测硝基咪唑类化合物的文献以有关蜂蜜、肉类、动物内脏和饲料居多,关于化妆品中硝基咪唑类化合物的文献较少,而且尚未见通过液相色谱-串联质谱联用方法同时检测化妆品中15种硝基咪唑类化合物的报道,本研究建立液相色谱-串联质谱检测方法,灵敏、定性可靠、特异性强、操作简单,可以快速同时检测唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 化妆品中的15种禁用硝基咪唑类抗生素,能够为化妆品中禁用硝基咪唑类抗生素的监 测和风险评估提供参考依据。硝基咪唑的基本信息见遍5。 表5 15种禁用硝基咪唑类抗生素的CAS编号、分子式、分子量和结构式 中文名称 英文名称 CAS 分子式 分子量 结构式 4-硝基 4-Nitroimidazole 3034-38-6 CHNO 113.08 3332咪唑 2-甲硝 Menidazole 88054-22-2 CHNO 127.10 4532咪唑 羟基甲 metronidazole- 4812-40-2 CHNO 187.16 6934硝唑 OH 2-Hydroxymethyl-1-羟基二甲methyl-5-nitroimidaz936-05-0 CHNO 157.13 5733硝咪唑 ole 甲硝唑 Metronidazole 443-48-1 CHNO 171.16 6933 二甲硝 Dimetridazole 551-92-8 CHNO 141.13 5732咪唑 洛硝哒唑 Ronidazole 7681-76-7 CHNO 200.15 6844 特尼哒唑 Ternidazole 1077-93-6 CHNO 185.18 71133 氯甲硝 1-Methyl-5-chloro-4-4897-25-0 CHClNO 161.55 4432咪唑 nitroimidazole 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 5-Nitrobenzimidazol苯硝咪唑 94-52-0 CHNO 163.14 7532e 塞克硝唑 Secnidazole 3366-95-8 CHNO 185.18 71133 替硝唑 Tinidazole 19387-91-8 CHNOS 247.28 81334 羟基异丙Ipronidazole-OH 35175-14-5 CHNO 185.18 71133硝唑 奥硝唑 Ornidazole 16773-42-5 CHClNO 219.63 71033 异丙硝唑 Ipronidazole 14885-29-1 CHNO 169.18 71132 4 方法提要 样品经提取、离心、净化以及滤膜过滤之后,用液相色谱-串联四极杆质谱检测, 经与平行操作的甲硝唑等15种禁用硝基咪唑类抗生素对照品比较,以保留时间和监控 离子对定性,峰面积进行定量,以标准曲线法计算含量。本方法对各种硝基咪唑类抗 生素的检出限、定量下限、检出浓度及最低定量浓度见下表6。 表6 15种硝基咪唑抗生素的检出限、定量下限、检出浓度及最低定量浓度 检出限 定量下限 检出浓度 最低定量浓度 化合物名称 /(ng/mL) /(ng/mL) /(,g/g) /(,g/g) 4-硝基咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 2-甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 洛硝哒唑 0.75 1.5 0.05 0.1 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 特尼哒唑 0.25 0.5 0.02 0.04 氯甲硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 苯硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 塞克硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 替硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基异丙硝唑 0.75 1.5 0.05 0.1 奥硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 异丙硝唑 0.1 0.2 0.005 0.01 5 材料与方法 5.1 材料 5.1.1 仪器 超高效液相色谱-串联四极杆质谱仪(Waters XEVO TQ ,美国Waters 公司);高速冷冻离心机(CR 21G,日本Hitachi公司);超纯水器(Milli-Q,美国Millipore公司); 固相萃取柱(Oasis HLB,6cc,500mg,美国Waters公司);超声波清洗器(KQ-600,江苏省昆山市超声仪器有限公司);电子天平(AB204-S,美国METTLER TOLEDO公司); 通风柜(FC-150,大连莱博泰克实验室设备有限公司); 旋转蒸发仪(EYELA,日本东京理化器械株式会社);氮吹仪(N-EVP 112,美国Organomation Associates Inc); 固相萃取装置(Visiprep DL,美国SUPELCO公司)。 5.1.2 试剂 4-硝基咪唑(4-Nitroimidazole,CAS:3034-38-6,纯度?97%)、2-甲硝咪唑(Menidazole,CAS:88054-22-2,纯度?99%)、羟基甲硝唑(Metronidazole-OH,CAS:4812-40-2,纯度?99%)、甲硝唑(Metronidazole,CAS:443-48-1,纯度?99%)、二甲硝咪唑(Dimetridazole,CAS:551-92-8,纯度?98%)、特尼哒唑(Ternidazole,CAS:1077-93-6,纯度?99%)、氯甲硝咪唑(1-Methyl-5-chloro-4-nitroimidazole,CAS:4897-25-0,纯度?98%)、苯硝咪唑(5-nitrobenzimidazole,CAS:94-52-0,纯度?98%)、塞克硝唑(Secnidazole,CAS:3366-95-8,纯度?99%)、替硝唑(Tinidazole,CAS:19387-91-8,纯度?99%)、羟基异丙硝唑(Ipronidazole-OH,CAS:35175-14-5,纯度?99%)、奥硝唑(Ornidazole,CAS:16773-42-5,纯度?98%)、异丙硝唑(Ipronidazole,CAS:14885-29-1,纯度?99%)(美国Sigma 公司);羟基二甲硝咪唑(2-Hydroxymethyl-1-methyl-5-nitroimidazole,CAS:936-05-0,纯度?98%)、洛硝哒唑(Ronidazole,CAS:7681-76-7,纯度?99%)(德国Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司);唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 甲醇、乙腈及甲酸均为色谱纯试剂(美国Fisher公司);乙醇等其它试剂为分析纯(北京化工厂)。 5.2 方法的选择与优化 5.2.1 提取溶剂的选择 分别称取空白样品(水剂类、散粉类、香波类和膏霜类)各12份,每份0.50 g(精确至0.001 g),置于10mL比色管中,向每份空白样品中各加入浓度为2.5 ,g/mL的15种硝基咪唑抗生素混合标准溶液400 ,L,涡旋振荡混匀。向每份样品中分别加入甲醇、乙醇、乙腈、甲醇与水的混合液(V:V=1:1)、乙醇与水的混合液(V:V=1:1)、乙腈与水的混合液(V:V=1:1),每两份为一组平行样品,涡旋振荡混匀,定容至10 mL,分别超声提取30 min,放置室温。将所有样品转移至具塞塑料离心管中,以5000 r/min离心10 min,上清液经0.45 ,m滤膜过滤,滤液作为试样,进行HPLC-MS/MS分析。 实验结果表明,四种类型的化妆品空白样品均以甲醇与水的混合液(V:V=1:1)提取效果最好,然后,再对甲醇与水的比例进行优化,分别考察了25% 甲醇-水、50% 甲醇-水、75% 甲醇-水和100% 甲醇对空白样品加标的提取效果。由于硝基咪唑类物质微溶于水,因此,实验中未设置纯水作为提取溶剂。结果表明,散粉类空白加标样品以50%甲醇-水提取效果最佳,水剂、香波、膏霜类空白加标样品以25%甲醇-水提取效果最佳。 5.2.2 提取时间的选择 分别称取空白样品(水剂类、散粉类、香波类和膏霜类)各12份,每份0.50 g(精确至0.001 g),置于10 mL比色管中,向每份空白样品中各加入浓度为2.5 ,g/mL的 混合标准溶液400 ,L,涡旋振荡混匀。向每份水剂类、香波类15种硝基咪唑类抗生素 和膏霜类样品中加入25%甲醇/水,散粉类样品中加入50% 甲醇/水,每两份为一组平行样品,涡旋振荡混匀,定容至10 mL,分别进行提取10 min、20 min、30 min、40 min、50 min和60 min,放置室温。将所有样品转移至具塞塑料离心管中,以5000 r/min离心10 min,上清液经0.2 ,m滤膜过滤,滤液作为试样,进行HPLC-MS/MS分析。 实验结果表明,当超声提取30 min时,目标化合物已基本提取完全。 5.2.3 净化条件的优化 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 实验主要考察了Oasis HLB(6 cc,200 mg及6 cc,500 mg)、Agilent Bond Elut PLEXA及Sep-Pak C几种固相萃取柱,实验结果表明,Oasis HLB(6 cc,500 mg)18 柱对所有目标化合物均有所保留,因此,本实验选用该固相萃取柱作为净化柱。 采用Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱,考察了不同配比的甲醇-水溶液(0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90% 和100% 甲醇-水溶液,用量均为4 mL)淋洗系统,分析比较不同淋洗系统的淋洗效果。洗脱曲线见下图2,图中显示,随着淋洗系统中甲醇的比例逐渐增大,目标化合物越多被洗脱下来。当20%甲醇-水作为淋洗液时,目标化合物仍保留在固相萃取柱上,不会被洗脱下来,而当30%甲醇-水作为淋洗液时,少量目标化合物会被洗脱下来。因此,选用20%甲醇-水作为淋洗液去除样品中的杂质,从而抑制样基质效应。4 mL 90%甲醇-水溶液可将大部分的目标化合物完全洗脱下来,只有异丙硝唑仍未洗脱完全,增加洗脱液的用量,发现当用8 mL 90%甲醇-水洗脱时,异丙硝唑即被洗脱完全,见图3。因此,选用4 mL 20%甲醇-水作为淋洗液,8 mL 90%甲醇-水作为洗脱液。 图2 15种硝基咪唑类抗生素在Oasis HLB(6cc,500mg)柱上的洗脱曲线 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图3 不同体积的90%甲醇-水对异丙硝唑的洗脱效果 通过上述实验中样品提取及净化的考察,确定了样品前处理的方法。 水剂类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)水剂类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得水剂中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 香波类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)香波类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得香波中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 膏霜类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)膏霜类样品,置于10 mL 比色管中,加入25% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得膏霜中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 30 min,冷却至室温后,用25%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5 mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8 mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 散粉类化妆品:称取0.5 g(精确至0.001 g)散粉类样品,置于10 mL 比色管中,加入50% 甲醇/水溶液,涡旋振荡使得散粉中的基质与提取溶剂充分混匀,超声提取30 min,冷却至室温后,用50%甲醇/水定容至刻度,混匀,然后试样全部转移至50 mL 离心管中,以5000 r/min 离心10 min,取3 mL上清液过Oasis HLB(6 cc,500 mg)固相萃取柱(预先用5mL 甲醇活化,5 mL 水平衡),先用4 mL 20% 甲醇/水淋洗,然后用8mL 90% 甲醇/水进行洗脱,收集洗脱液进行旋蒸近干,剩余部分转移至氮吹管进行氮吹干涸,准确加入3 mL 10%甲醇/水溶解残渣,过0.45 ,m 微孔滤膜,滤液按选定的仪器的工作条件进行测定。 5.2.4 色谱条件的优化 5.2.4.1 色谱柱的选择 色谱柱的填料性质及颗粒大小是影响样品组分分离度的主要因素,为获得更高的分离度、灵敏度和样品通量,常采用亚微米小颗粒填料色谱柱。实验中分别考察了四种规格相同(2.1 mm×150 mm,3.5 ,m)、选择性不同的色谱柱,包括XSelect CSH C、18Sunfire C18、XBridge C18和XBridge Phenyl。实验结果表明,15种硝基咪唑类抗生素物质在XSelect CSH C色谱柱上的色谱峰形最优,并且经梯度洗脱获得了最为理想的18 分离效果。 为验证本研究中的硝基咪唑类化合物对其它C色谱柱的适用性,本研究还考察了18 另外两种C色谱柱,通过流动相梯度洗脱程序的优化,15种硝基咪唑类化合物的MRM18 色谱图如下图4和图5所示。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图4 15种硝基咪唑类化合物在其他品牌C色谱柱上优化后分离效果图1 18 图5 15种硝基咪唑类化合物在其他品牌C色谱柱上优化后分离效果图2 18 5.2.4.2 流动相的选择 基于硝基咪唑类抗生素易溶于甲醇和乙腈,微溶于水的物理性质,分别考察了反相色谱常用的流动相体系甲醇与纯水、乙腈与纯水、甲醇与0.1%甲酸/水以及乙腈与0.1%甲酸/水作为流动相时的分离效果。实验表明,以乙腈和0.1%甲酸-水作为流动相时初始体积比5:95,经15 min过渡到35:65,能将难以分离的塞克硝唑、苯硝咪唑、氯甲硝唑和替硝唑良好的分离,且其余峰尖锐,对称性良好,采用其它洗脱曲线类型均无法达到上述四种硝基咪唑抗生素的良好分离。 5.2.4.3 流速的选择 在液相分析或液相色谱-质谱分析时,流速大小的合理设置在谱峰分离及峰形优差方面也起着至关重要的作用,流速过大(在色谱柱的耐受范围之内),色谱峰分离不开;流速太小,容易造成拖尾峰,也会造成分析时间过长,降低工作效率。在液相色谱-质谱分析时,流速大小的选择还应考虑离子化效率的问题。分别考察了流速为0.2 , 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 mL时色谱峰的分离效果及峰形,结果表明,当流速为0.25 mL/min时,各组分的色谱峰分离较好,并且峰形最优,同时,这种较低的流速也有利于提高离子化的效率。 5.2.4.5 柱温的选择 色谱柱温度的设置不仅影响色谱峰的分离效果,而且还要考虑填料和所分析样品的性质。虽然XSelect CSH C色谱柱可耐受80?高温,但考虑到硝基咪唑类抗生素在18 高温条件下分析不稳定的因素,分别考察了20?、30?、40? 时色谱峰的分离效果,结果显示,温度对15种硝基咪唑类抗生素的分离效果并不明显。综合考虑,选择室温30?作为样品分析时的色谱柱温度。 5.2.5 质谱条件的优化 准确称取每种硝基咪唑类抗生素标准品10 mg(精确至0.0001g),分别用甲醇配制成1000 ,g/mL的标准储备液,保存于4?冰箱。用甲醇稀释每种标准储备液浓度至500 ,g/L,进行质谱调谐方法的优化。用蠕动泵以10 ,L/min 的流速连续注射,分别将15 种500 ,g/L 的硝基咪唑类抗生素标准溶液注入ESI 离子源中,在正离子检测方式 +下对硝基咪唑类抗生素进行一级质谱分析(Q1 扫描),得到准分子离子[M+H] 信息;对准分子离子峰进行二级质谱分析(子离子扫描),得到碎片离子信息,选择合理丢失且丰度较大的的两个碎片离子作为定性离子,以其中丰度较大的碎片离子作为定量离子。在此过程中,对锥孔电压、碰撞能量、离子源温度、雾化气等质谱参数进行了优化。 通过上述实验条件的优化,确定采用如下色谱质谱条件: 色谱参考条件: 色谱柱:C柱(2.1 mm×150 mm,3.5 ,m) 18 流动相:乙腈(A)和 0.1% 甲酸水溶液(B); ; 梯度洗脱程序见表7 表7 梯度洗脱条件 Time (min) Flow (mL/min) A (%) B (%) 0.00 0.25 5.0 95.0 2.00 0.25 5.0 95.0 17.00 0.25 35.0 65.0 19.00 0.25 95.0 5.0 20.00 0.25 95.0 5.0 20.10 0.25 5.0 95.0 22.00 0.25 5.0 95.0 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 注:对于梯度洗脱条件,操作者可根据实际样品的不同而选择最佳色谱分离条件, 使得硝基咪唑类成分与其他组分峰获得分离。 柱温:30?; 进样量:5 ,L。 质谱参考条件: 毛细管电压:3.0 kV; 萃取电压:3 V; 射频透镜电压:0.1 V; 离子源温度:150 ?; 脱溶剂气温度:400 ?; 脱溶剂气流量:800 L/hr; 锥孔气流量:50 L/hr; -3 碰撞室压力:3.2×10mbar; 低质量端1分辨率:3.0; 高质量端1分辨率:15.0; 离子能量1:0.5 V; 碰撞室入口电压:1 V; 碰撞室出口电压:1V; 低质量端2分辨率:3.0; 高质量端2分辨率:15.0; 离子能量2:0.5 V; 碰撞气体:氩气; 数据采集模式:MRM(多反应监测)。 0,2.5 min:不进入质谱仪分析,2.5,15 min:进入质谱仪分析。 15种硝基咪唑类抗生素的质谱参数见表8。15种禁用硝基咪唑类抗生素的MRM 色谱图见图6。 表8 15种禁用硝基咪唑类抗生素的质谱相关参数 电离 监控离子对锥孔电压 碰撞能量 保留时间化合物名称 方式 (m/z) (V) (eV) (min) 114.2/68.2* 15 +4-硝基咪唑 ESI 25 2.94 114.2/84.2 12 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 128.2/82.1* 15 +2-甲硝唑 ESI 20 3.97 128.2/111.1 15 188.2/123.2* 15 +羟基甲硝唑 ESI 20 4.18 188.2/126.2 14 158.2/140.2* 15 +羟基二甲硝咪唑 ESI 20 5.24 158.2/55.2 15 172.2/128.2 15 +甲硝唑 ESI 20 5.43 172.2/82.1* 20 142.2/96.2* 15 +二甲硝咪唑 ESI 25 6.26 142.2/81.2 20 201.2/140.2* 12 +洛硝哒唑 ESI 15 6.50 201.2/55.2 20 186.2/128.2 15 +特呢哒唑 ESI 20 7.05 186.2/82.2* 25 162.2/116.1* 17 +氯甲硝咪唑 ESI 25 8.38 162.2/145.1 15 164.2/118.2* 18 +苯硝咪唑 ESI 30 8.11 164.2/91.1 30 186.2/128.2* 15 +塞克硝唑 ESI 20 7.90 186.2/82.1 20 248.2/121.2* 15 +替硝唑 ESI 25 8.91 248.2/128.2 20 186.2/168.2* 15 +羟基异丙硝唑 ESI 20 10.07 186.2/122.2 20 220.2/128.2 15 +奥硝唑 ESI 25 10.65 220.2/82.1* 25 170.2/124.2* 17 +异丙硝唑 ESI 30 12.90 170.2/109.2 24 * :定量离子对 图 6 15种禁用硝基咪唑类抗生素的MRM色谱图 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 1. 4-硝基咪唑;2. 2-甲硝咪唑;3. 羟基甲硝唑;4.羟基二甲硝唑;5. 甲硝唑;6. 二甲硝咪唑;7. 洛硝哒唑;8. 特呢哒唑;9. 塞克硝唑;10. 苯硝咪唑;11. 氯甲硝唑;12. 替硝唑;13. 羟基异丙硝唑;14. 奥硝唑;15. 异丙硝唑 5.3 实验室内验证 5.3.1 方法的特异性 分别取具代表性的空白样品基质及空白基质添加混合对照品的样品,按照确定的样品预处理方法处理后,进行检测。MRM色谱图见图7至图14。 图7 水剂类空白样品的MRM色谱图 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图8 水剂类空白样品添加标准品浓度为0.1 ,g/g MRM色谱图 图9 香波类空白样品的MRM色谱图 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图10 香波类空白样品添加标准品浓度为0.1 ,g/g MRM色谱图 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图11 散粉类空白样的MRM色谱图 图12 散粉类空白样品添加标准品浓度为0.1 ,g/g MRM色谱图 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 图13 膏霜类空白样品的MRM色谱图 图14 散粉类空白样品添加标准品浓度为0.1 ,g/g MRM色谱图 5.3.2 线性及线性范围 5.3.2.1 标准溶液的配制 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 5.3.2.1.1 15种硝基咪唑类抗生素的标准储备溶液:准确称取10 mg(精确至0.0001 g)硝基咪唑抗生素标准品,置于10 mL容量瓶中,用甲醇(3.1)溶解并稀释种刻度,混匀,得到每种硝基咪唑抗生素浓度为1000 ,g/mL的标准储备液。 5.3.2.1.2 15种硝基咪唑类抗生素的混合标准储备液:分别精密量取每种硝基咪唑抗生素的标准储备液(3.21)各5 mL 置于100 mL 容量瓶中,用甲醇稀释并定容至刻度,混匀,得到50 ,g/mL 的硝基咪唑抗生素混合标准储备液。 5.3.2.1.3 15种硝基咪唑抗生素的标准工作液:精密量取一定体积的混合标准储备液(3.22)置于10 mL 容量瓶中,用 10% 甲醇/水稀释至刻度,使得各硝基咪唑抗生素的浓度分别为0.1 ,g/L、0.2 ,g/L、0.5 ,g/L、1 ,g/L、2 ,g/L、5 ,g/L、10 ,g/L、20 ,g/L、50 ,g/L、100 ,g/L、200 ,g/L、500 ,g/L、1000 ,g/L、2000 ,g/L、5000 ,g/L。 5.3.2.2 线性及线性范围 在选定的色谱质谱条件下,配制不同浓度的混合标注工作溶液,依次进样,以测得目标物的峰面积为纵坐标(y),以所测目标物的浓度为横坐标(x),建立标准曲线,并进行线性分析得到线性方程和回归系数(r),实验结果显示,15种硝基咪唑呈良好的线性关系,线性方程及相关系数见表9。 表 9 15种硝基咪唑抗生素的线性回归方程、相关系数及线性范围 溶剂/ 相关系数线性范围 目标化合物 线性方程 2基质 (r) (,g/L) 4-硝基咪唑 y=90673.2x+546.899 0.9931 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=133510x+55.9653 0.9980 0.5,500 羟基甲硝唑 y=115115x-232.21 0.9995 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=119196x-365.544 0.9996 0.5,500 甲硝唑 y=87807.6x-173.408 0.9985 0.5,500 二甲硝咪唑 y=64281.5x-740.294 0.9986 0.5,500 洛硝哒唑 y=24942.8x-17.0933 0.9985 0.5,500 10%甲醇 特尼哒唑 y=58909x+258.811 0.9964 0.5,500 -水 氯甲硝咪唑 y=17716.2x+24.5195 0.9991 0.5,500 苯硝咪唑 y=73814.2x+766.393 0.9998 0.5,500 塞克硝唑 y=65339.6x-73.8955 0.9996 0.5,500 替硝唑 y=121617x-231.079 0.9999 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=117725x-614.359 0.9985 0.5,500 奥硝唑 y=854015x+69.7173 0.9995 0.5,500 异丙硝唑 y=369453x-816.023 0.9986 0.5,500 4-硝基咪唑 y=66044.7x+172.665 0.9946 0.5,500 水剂类 2-甲硝咪唑 y=96086.7x+13.22 0.9978 0.5,500 基质 羟基甲硝唑 y=97906.8x-319.753 0.9985 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=77204.3x-563.589 0.9972 0.5,500 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 甲硝唑 y=47296.9x+40.519 0.9987 0.5,500 二甲硝咪唑 y=27164.8x-244.71 0.9984 0.5,500 洛硝哒唑 y=9644.66x-64.8438 0.9965 0.5,500 特尼哒唑 y=27908.8x+46.4697 0.9981 0.5,500 氯甲硝咪唑 y=8762.78x-93.8359 0.9982 0.5,500 苯硝咪唑 y=34117x+285.745 0.9981 0.5,500 塞克硝唑 y=36822.9x-178.566 0.9998 0.5,500 替硝唑 y=162464x+511.498 0.9974 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=61433.4x-495.328 0.9966 0.5,500 奥硝唑 y=44247.1x-133.515 0.9991 0.5,500 异丙硝唑 y=460849x+414.277 0.9988 0.5,500 4-硝基咪唑 y=38670.2x-1394.41 0.9970 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=108179x-2394.27 0.9949 0.5,500 羟基甲硝唑 y=68127.6x-1559.82 0.9988 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=93187.6x-1033.82 0.9994 0.5,500 甲硝唑 y=52268.4x-766.415 0.9954 0.5,500 二甲硝咪唑 y=35564x-831.935 0.9948 0.5,500 洛硝哒唑 y=11613.9x-492.257 0.9999 0.5,500 香波类 特尼哒唑 y=33546.6x-131.149 0.9980 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 y=11674.7x-522.264 0.9964 0.5,500 苯硝咪唑 y=2594.92x-672.865 0.9991 0.5,500 塞克硝唑 y=33287.4x-930.962 0.9983 0.5,500 替硝唑 y=118803x-4956.44 0.9954 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=86851.8x-3227.37 0.9921 0.5,500 奥硝唑 y=59680.4x-1530.84 0.9967 0.5,500 异丙硝唑 y=387401x-22265.2 0.9942 0.5,500 4-硝基咪唑 y=88309.9x+176.424 0.9977 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=95777.5x-221.842 0.9996 0.5,500 羟基甲硝唑 y=92493.9x-575.82 0.9983 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=78721.8x-925.712 0.9918 0.5,500 甲硝唑 y=55278.3x-274.845 0.9995 0.5,500 二甲硝咪唑 y=30085.4x-462.847 0.9940 0.5,500 洛硝哒唑 y=11138.1x-91.7097 0.9994 0.5,500 膏霜类 特尼哒唑 y=30644.8x-26.7149 0.9990 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 y=10310.7x-53.9251 0.9976 0.5,500 苯硝咪唑 y=42134.2x-326.635 0.9984 0.5,500 塞克硝唑 y=44695.3x-280.082 0.9994 0.5,500 替硝唑 y=82866.5x-479.43 0.9979 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=77459.4x-152.588 0.9946 0.5,500 奥硝唑 y=52949.8x-319.613 0.9988 0.5,500 异丙硝唑 y=466524x-583.692 0.9997 0.5,500 4-硝基咪唑 y=95134.8x-166.294 0.9991 0.5,500 散粉类 2-甲硝咪唑 y=108239x-192.783 0.9974 0.5,500 基质 羟基甲硝唑 y=105335x-132.217 0.9955 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=94187x-455.756 0.9995 0.5,500 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 甲硝唑 y=56840.8x-87.1783 0.9959 0.5,500 二甲硝咪唑 y=32970.4x-203.614 0.9947 0.5,500 洛硝哒唑 y=11746.2x-168.715 0.9985 0.5,500 特尼哒唑 y=30939x-127.18 0.9977 0.5,500 氯甲硝咪唑 y=11107.7x-79.6282 0.9979 0.5,500 苯硝咪唑 y=41079.1x+146.717 0.9986 0.5,500 塞克硝唑 y=30925x-144.374 0.9994 0.5,500 替硝唑 y=20167.8x-139.719 0.9996 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=71061.3x-95.4582 0.9989 0.5,500 奥硝唑 y=46903.8x-33.8552 0.9993 0.5,500 异丙硝唑 y=289936x-1251.96 0.9985 0.5,500 5.3.3 检出限、定量下限、检出浓度及最低定量浓度 逐级稀释并检测15种硝基咪唑抗生素混合标准溶液,以所测目标物峰信噪比为10:1时目标物的浓度确定为本方法对该化合物的定量下限,以所测目标物峰信噪比为3:1时目标物的浓度确定为本方法对对该化合物的检出限,结果见表8。 向不含15种禁用硝基咪唑抗生素的空白样品定量添加该15种化合物,按照确定的前处理方法处理后,以所测目标物峰信噪比为10:1时目标物的浓度确定为本方法对该化合物的最低定量浓度,以所测目标物峰信噪比为3:1时目标物的浓度确定为本方法对对该化合物的最低检出浓度,结果见表10。 表10 15种硝基咪唑抗生素的检出限、定量下限、检出浓度及最低定量浓度 检出限 定量下限 检出浓度 最低定量浓度 化合物名称 /(ng/mL) /(ng/mL) /(,g/g) /(,g/g) 4-硝基咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 2-甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 甲硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 二甲硝咪唑 0.25 0.5 0.02 0.04 洛硝哒唑 0.75 1.5 0.05 0.1 特尼哒唑 0.25 0.5 0.02 0.04 氯甲硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 苯硝咪唑 0.75 1.5 0.05 0.1 塞克硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 替硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 羟基异丙硝唑 0.75 1.5 0.05 0.1 奥硝唑 0.25 0.5 0.02 0.04 异丙硝唑 0.1 0.2 0.005 0.01 5.3.4 精密度及稳定性 5.3.4.1 日内精密度及稳定性 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 制备高低两种不同浓度的日内稳定性样品,分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h按照选定的色谱质谱条件进行测定,所测得的峰面积代入随行的标准曲线中,计算相对标准偏差RSD,实验结果见表9,表明样品处理后室温放置24 h是稳定的。 5.3.4.2 日间精密度及稳定性 制备高低两种不同浓度的日间稳定性样品,连续7天分别按照选定的色谱质谱条件进行测定,所测得的峰面积代入随行的标准曲线中,计算RSD,实验结果见表11,表明样品处理后4?放置7天是稳定的。 表11 日内和日间精密度及稳定性(n=7) 日内精密度RSD/% 日间精密度RSD/% 溶剂/基质 化合物 0.05 1 0.05 1 ,g/mL ,g/mL ,g/mL ,g/mL 4-硝基咪唑 2.19 1.43 2.88 3.28 2-甲硝咪唑 1.08 2.39 247 3.64 羟基甲硝唑 2.93 1.93 3.80 4.19 羟基二甲硝咪唑 1.16 2.96 1.69 2.83 甲硝唑 1.43 2.70 2.33 2.77 二甲硝咪唑 3.93 1.70 3.10 2.50 洛硝哒唑 2.61 1.33 3.40 1.97 10%甲醇/特尼哒唑 2.52 1.66 2.87 1.27 水 氯甲硝咪唑 1.86 2.38 2.25 2.75 苯硝咪唑 2.13 1.47 2.25 2.26 塞克硝唑 1.55 2.14 2.34 1.29 替硝唑 2.08 1.14 2.00 2.51 羟基异丙硝唑 2.46 1.58 3.53 4.74 奥硝唑 3.67 2.68 3.78 4.95 异丙硝唑 4.04 1.11 3.24 3.06 4-硝基咪唑 1.43 0.34 4.11 1.92 2-甲硝咪唑 3.06 1.23 3.43 4.75 羟基甲硝唑 2.24 1.40 3.66 2.23 羟基二甲硝咪唑 4.97 1.81 3.52 3.58 甲硝唑 1.56 0.88 1.71 2.32 二甲硝咪唑 4.18 3.43 2.94 3.50 洛硝哒唑 3.64 1.74 2.07 2.40 水剂类基质 特尼哒唑 1.69 3.27 2.41 3.58 氯甲硝咪唑 4.01 1.10 3.17 2.76 苯硝咪唑 2.42 1.03 2.09 2.84 塞克硝唑 4.75 3.15 4.04 4.79 替硝唑 3.00 1.00 3.34 3.63 羟基异丙硝唑 3.64 1.61 3.18 4.62 奥硝唑 2.46 1.23 2.50 4.86 异丙硝唑 1.06 1.35 4.07 3.88 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 4-硝基咪唑 2.53 3.80 3.32 3.52 2-甲硝咪唑 3.21 3.79 3.78 2.00 羟基甲硝唑 1.73 1.49 2.11 1.80 羟基二甲硝咪唑 0.96 1.64 2.01 3.76 甲硝唑 1.70 3.05 2.52 0.91 二甲硝咪唑 2.21 3.69 4.00 3.84 洛硝哒唑 3.08 4.49 2.47 3.39 香波类基质 特尼哒唑 4.37 3.19 3.99 4.27 氯甲硝咪唑 3.52 1.86 4.40 3.01 苯硝咪唑 4.13 4.26 4.90 2.41 塞克硝唑 3.89 3.89 3.41 2.05 替硝唑 2.83 3.23 2.18 3.79 羟基异丙硝唑 2.66 3.72 2.34 1.70 奥硝唑 1.21 4.58 3.39 4.55 异丙硝唑 3.14 1.23 3.71 2.05 4-硝基咪唑 1.80 0.99 4.26 1.85 2-甲硝咪唑 2.65 1.32 3.85 3.16 羟基甲硝唑 4.17 0.87 3.57 2.86 羟基二甲硝咪唑 3.81 2.21 3.91 3.67 甲硝唑 2.03 2.86 4.16 2.08 二甲硝咪唑 4.47 3.17 4.93 3.81 洛硝哒唑 2.94 2.36 2.24 3.53 膏霜类基质 特尼哒唑 2.63 3.86 3.15 4.48 氯甲硝咪唑 2.31 3.42 2.09 4.11 苯硝咪唑 1.94 4.22 1.21 4.66 塞克硝唑 3.03 3.77 3.37 2.58 替硝唑 3.29 3.27 2.39 4.46 羟基异丙硝唑 2.26 3.07 3.77 3.48 奥硝唑 4.59 3.50 4.33 3.43 异丙硝唑 1.59 0.46 3.18 2.05 4-硝基咪唑 1.13 2.27 2.24 2.22 2-甲硝咪唑 2.26 1.83 2.87 3.84 羟基甲硝唑 2.39 1.11 4.32 3.18 羟基二甲硝咪唑 0.92 2.32 4.19 2.44 甲硝唑 2.09 2.35 3.33 2.98 二甲硝咪唑 3.30 3.49 2.99 3.69 洛硝哒唑 3.55 3.05 4.55 2.35 散粉类基质 特尼哒唑 4.81 2.88 4.82 4.20 氯甲硝咪唑 3.78 4.26 3.32 3.15 苯硝咪唑 2.52 3.25 2.58 4.33 塞克硝唑 2.72 2.84 3.69 2.64 替硝唑 3.48 2.47 3.53 4.00 羟基异丙硝唑 2.88 2.99 3.16 2.77 奥硝唑 3.58 1.89 4.76 4.28 异丙硝唑 0.95 0.94 2.52 1.25 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 由上表可见,本方法的日内及日间精密度均符合《化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范》的要求,即目标物含量大于1 ,g/g时精密度的相对标准偏差应不超过5% 。 5.3.5 回收率及精密度 称取经测定不含15种禁用硝基咪唑抗生素的空白化妆品0.5 g,平行6份,分别添加低、中、高三个浓度标准混合溶液,涡旋振荡混匀,按照本实验确定的实验方法进行测定,将所测目标化合物的峰面积代入随行的溶液标准曲线和方法标准曲线,计算出相应目标化合物的回收率及精密度值,结果见表12,15。 表12 水剂类空白化妆品添加15种禁用硝基咪唑抗生素的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.42 2.43 81.25 1.45 4-硝基咪唑 0.4 91.08 4.21 97.08 1.21 4 86.74 4.30 94.60 4.40 0.04 85.50 3.22 90.83 2.52 2-甲硝咪唑 0.4 80.08 2.35 92.25 3.95 4 94.17 4.91 94.74 4.21 0.04 86.67 3.42 95.83 1.66 0.4 88.75 3.94 94.42 2.13 羟基甲硝唑 4 90.80 4.42 93.65 3.87 0.04 88.75 4.39 91.25 2.37 羟基二甲硝咪0.4 86.88 4.95 86.63 2.98 唑 4 93.42 4.71 93.53 3.32 0.04 86.50 3.45 97.50 1.60 甲硝唑 0.4 85.63 3.63 87.54 1.63 4 88.45 4.25 94.07 3.12 0.04 85.83 2.70 90.83 2.51 二甲硝咪唑 0.4 80.75 4.07 104.50 3.74 4 89.05 4.45 93.28 2.99 0.1 85.00 1.64 90.83 2.02 洛硝哒唑 1 84.87 3.78 94.82 2.21 10 91.78 4.73 97.40 4.44 0.04 81.25 2.52 91.25 1.58 特尼哒唑 0.4 86.58 4.69 88.88 2.87 4 85.37 3.46 96.69 2.18 0.1 86.67 3.74 96.67 1.13 氯甲硝咪唑 1 81.73 4.91 83.25 3.73 10 89.36 3.73 81.67 4.71 苯硝咪唑 0.1 86.00 1.04 93.42 3.15 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 1 86.42 1.81 80.50 3.25 10 92.66 4.78 93.33 4.11 0.04 85.83 3.50 104.58 2.85 塞克硝唑 0.4 96.00 3.93 100.88 2.45 4 93.67 4.61 96.33 3.53 0.04 85.75 3.37 95.42 2.55 替硝唑 0.4 90.00 2.95 90.67 3.00 4 87.32 3.53 93.45 3.63 0.1 89.17 1.03 96.17 3.94 羟基异丙硝唑 1 88.53 5.07 92.55 3.01 10 90.00 4.60 93.91 4.09 0.04 87.67 3.62 108.33 4.62 奥硝唑 0.4 87.63 4.96 103.63 3.76 4 96.17 3.10 96.89 2.46 0.01 85.00 3.28 88.87 3.02 异丙硝唑 0.1 89.67 4.45 87.33 2.49 1 93.72 3.18 97.33 3.69 表13 香波类空白化妆品添加15种禁用硝基咪唑抗生素的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 86.50 2.44 83.33 2.52 4-硝基咪唑 0.4 86.71 4.02 91.50 3.78 4 94.43 4.07 96.32 3.50 0.04 85.42 3.44 88.75 3.52 2-甲硝咪唑 0.4 90.50 2.04 92.25 2.46 4 90.68 4.02 95.36 1.81 0.04 86.58 2.34 88.33 3.36 羟基甲硝唑 0.4 86.67 2.44 89.04 2.25 4 87.95 1.98 94.63 2.80 0.04 85.00 3.13 90.42 3.19 羟基二甲硝咪0.4 86.13 2.12 86.67 2.79 唑 4 88.56 4.93 94.75 2.33 0.04 86.25 1.45 80.42 3.19 甲硝唑 0.4 87.38 2.94 91.17 3.59 4 90.26 4.91 96.06 4.27 0.04 86.25 1.06 82.50 3.44 二甲硝咪唑 0.4 86.79 1.40 94.21 4.05 4 86.59 4.03 97.25 2.88 0.1 87.50 1.28 89.53 2.81 洛硝哒唑 1 89.32 2.45 86.83 4.16 10 89.01 4.10 97.45 3.49 0.04 86.67 1.01 80.83 4.44 特尼哒唑 0.4 85.25 5.12 88.38 3.33 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 4 85.13 4.97 94.37 1.59 0.1 85.17 1.80 86.00 3.71 氯甲硝咪唑 1 86.28 9.02 87.57 3.97 10 97.25 2.59 99.36 4.38 0.1 86.00 2.64 90.67 3.63 苯硝咪唑 1 88.23 2.88 89.97 4.24 10 89.98 3.06 96.62 3.84 0.04 86.25 2.76 89.58 4.20 塞克硝唑 0.4 92.29 3.99 96.38 2.06 4 91.48 3.80 97.01 3.73 0.04 86.67 3.84 84.17 3.52 替硝唑 0.4 87.71 3.31 87.38 3.48 4 91.45 2.74 96.19 3.84 0.1 86.00 3.52 94.67 2.88 羟基异丙硝唑 1 87.57 1.62 84.52 4.20 10 91.58 2.16 94.06 3.80 0.04 86.08 2.74 94.17 3.45 奥硝唑 0.4 88.50 2.93 97.79 4.56 4 91.09 2.31 94.50 2.43 0.01 85.00 4.09 88.33 3.08 异丙硝唑 0.1 87.33 1.97 91.83 2.69 1 85.55 3.34 90.57 3.51 表14 膏霜类空白化妆品添加15种禁用硝基咪唑抗生素的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.83 2.63 88.75 3.41 0.4 90.29 2.88 94.67 2.77 4-硝基咪唑 4 96.94 1.22 97.90 2.61 0.04 93.33 2.99 97.08 3.45 2-甲硝咪唑 0.4 89.92 3.58 91.29 2.77 4 97.53 1.32 99.23 4.43 0.04 93.33 2.29 98.75 3.38 羟基甲硝唑 0.4 92.33 2.21 97.21 2.96 4 96.57 3.89 99.49 4.88 0.04 93.33 1.37 96.25 2.39 羟基二甲硝咪0.4 87.42 3.25 93.79 1.45 唑 4 96.55 3.36 98.15 4.48 0.04 89.58 2.50 94.17 3.52 甲硝唑 0.4 88.83 4.00 95.50 2.82 4 96.95 2.73 98.18 2.99 0.04 92.92 3.44 96.25 3.57 二甲硝咪唑 0.4 89.21 4.73 90.50 2.91 4 96.57 1.97 97.28 1.23 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.1 95.50 3.89 100.83 1.07 洛硝哒唑 1 90.58 4.28 94.40 3.72 10 96.43 4.25 98.66 4.62 0.04 90.00 0.45 99.58 3.51 特尼哒唑 0.4 92.29 3.88 93.96 2.82 4 95.29 4.76 97.72 3.85 0.1 91.67 1.13 93.67 1.09 氯甲硝咪唑 1 96.92 7.53 97.15 2.74 10 98.45 4.98 99.64 4.65 0.1 86.00 0.49 91.67 1.22 苯硝咪唑 1 94.42 4.58 97.35 4.52 10 98.22 3.37 99.79 3.27 0.04 92.92 2.39 95.83 3.41 塞克硝唑 0.4 93.58 2.97 94.71 3.09 4 95.88 4.64 98.20 2.73 0.04 86.25 3.49 87.92 3.51 替硝唑 0.4 88.92 4.14 90.08 2.85 4 95.98 3.88 98.31 3.01 0.1 89.83 3.95 97.67 1.07 羟基异丙硝唑 1 91.43 4.02 96.65 4.42 10 97.90 3.94 99.71 4.29 0.04 87.92 3.40 88.33 4.37 0.4 93.83 4.11 96.46 2.34 奥硝唑 4 95.80 3.89 98.86 3.64 0.01 88.33 4.08 90.00 4.09 异丙硝唑 0.1 93.83 1.07 97.00 1.12 1 94.28 3.06 99.33 3.99 表15 散粉类空白化妆品添加15种禁用硝基咪唑抗生素的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.92 3.82 88.75 2.98 4-硝基咪唑 0.4 93.96 3.99 99.88 1.45 4 96.48 3.55 98.76 2.11 0.04 85.83 3.63 92.92 3.71 2-甲硝咪唑 0.4 96.29 1.14 97.29 3.10 4 96.13 3.00 99.83 4.90 0.04 89.17 4.63 91.67 2.69 羟基甲硝唑 0.4 89.38 3.27 96.29 3.81 4 96.18 4.88 98.75 3.71 0.04 86.33 3.35 92.08 2.47 羟基二甲硝咪0.4 94.88 1.58 96.17 1.26 唑 4 95.62 4.45 99.23 3.50 甲硝唑 0.04 91.25 3.34 97.50 3.23 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 95.83 2.57 98.75 2.01 4 95.95 4.07 98.35 3.65 0.04 86.25 2.52 90.42 3.50 二甲硝咪唑 0.4 97.21 1.29 97.92 1.53 4 95.44 4.87 98.96 4.69 0.1 90.83 3.74 97.67 1.24 洛硝哒唑 1 87.88 3.61 94.45 2.63 10 94.77 1.00 95.33 3.95 0.04 87.50 3.25 92.50 3.75 特尼哒唑 0.4 97.08 2.77 97.42 4.91 4 96.93 4.82 98.95 4.82 0.1 91.33 3.62 95.67 1.46 氯甲硝咪唑 1 88.07 3.70 92.33 4.12 10 98.24 3.64 99.58 4.04 0.1 90.67 2.81 94.67 3.98 1 87.85 4.56 94.95 4.06 苯硝咪唑 10 98.52 2.14 99.87 3.64 0.04 92.08 4.52 92.92 4.55 塞克硝唑 0.4 91.75 2.24 93.33 2.47 4 96.52 3.38 100.13 1.89 0.04 86.25 4.57 91.25 2.48 替硝唑 0.4 90.04 3.11 91.75 2.67 4 96.65 2.52 100.04 3.22 0.1 91.33 1.02 92.17 1.05 羟基异丙硝唑 1 89.57 3.32 94.43 1.63 10 98.36 3.74 100.17 2.20 0.04 89.58 2.73 94.58 4.40 奥硝唑 0.4 95.71 1.36 97.38 3.74 4 97.41 4.37 99.73 2.33 0.01 93.33 3.27 95.00 3.33 异丙硝唑 0.1 93.50 3.61 95.50 1.07 1 95.37 4.44 96.62 2.28 注:平均提取回收率,即所测目标化合物的浓度用溶液标准曲线计算所得;平均方法回收率,即所测目标化合物的浓度用基质标准曲线计算所得。 由上表可见,对于15种禁用硝基咪唑类抗生素,本方法在低、中、高3个添加水平范围内的平均提取回收率为80.00%,98.52% ,相对标准偏差均小于5%,平均方法回收率为85.42%,108.33%,并且相对标准偏差均小于5%,符合《化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范》的要求(最低定量浓度的方法回收率在80%,120%之间,提取回收率在85%,115%之间)。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 6 实际样品测定 应用本研究所建立的方法,分别对从市场收集的不同剂型、不同产地、不同品牌的化妆品16份进行15种禁用硝基咪唑类抗生素成分的测定,实际化妆品样品的相关信息见表16。检测结果经与标准品比对,其中1例化妆品样品被检出含有4-硝基咪唑成分,含量为58.16 mg/kg,样品的MRM色谱图如图15所示。 表16 实际化妆品样品信息 化妆品名称 生产厂家 购买途径 玉兰油美白润肤霜 广州宝洁有限公司 当地市场 伊诗蒙美肤营养素 漳州市格莱雅化妆品有限公司 当地市场 玉兰油乳液嫩白面乳 广州宝洁有限公司 当地市场 皙怡美妋宝透润补水柔肤水 上海蝶莱雅生物科技有限公司 当地市场 奥琪抗皱美容霜 北京宏丽源有限责任公司 当地市场 皙怡美妋宝无暇晶白粉底液 上海蝶莱雅生物科技有限公司 当地市场 皙怡美妋宝丝滑保湿霜 上海蝶莱雅生物科技有限公司 当地市场 威士达玉兰油美白嫩肤霜 汕头市威仕达化妆品有限公司 当地市场 丁家宜面容一洗白 南京丁家宜生化有限公司 当地市场 友谊护肤脂 上海家化联合股份有限公司 当地市场 百雀羚雪花膏 上海百雀羚日用化学有限公司 当地市场 DODO 红色恋人 散粉 韩国DODO化妆品生产公司 当地超市 卡托尼丝柔透肌 散粉 法国倩碧(广州) 当地超市 玫琳凯男士沐浴香波 玫琳凯(中国)化妆品有限公司 当地超市 新时代清新养护净爽香波 Sunstar Inc(日本) 当地超市 台湾韵竹美白祛斑日霜 广州祥发松竹化妆品公司 当地超市 图15 实际样品MRM 色谱图 7 多家实验室方法比对验证 7.1 基质标准曲线及线性范围 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 表17 验证单位1验证15种硝基咪唑的线性回归方程、相关系数及线性范围 溶剂/ 相关系数 线性范围 目标化合物 线性方程 2基质 (r) (,g/L) 4-硝基咪唑 0.5,500 y=90669.5x+542.786 0.9946 2-甲硝咪唑 y=133507x+54.6975 0.9959 0.5,500 羟基甲硝唑 y=115114x-233.09 0.9986 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=119192x-364.99 0.9988 0.5,500 甲硝唑 0.5,500 y=87806.9x-174.091 0.9979 二甲硝咪唑 0.5,500 y=64219.9x-739.896 0.9986 洛硝哒唑 0.5,500 y=24941.9x-17.1021 0.9965 10%甲特尼哒唑 y=58911x+257.922 0.9956 0.5,500 醇-水 氯甲硝咪唑 y=17717.1x+24.4968 0.9989 0.5,500 苯硝咪唑 y=73813.9x+767.289 0.9988 0.5,500 塞克硝唑 0.5,500 y=65338.9x-74.1122 0.9991 替硝唑 0.5,500 y=121615x-230.798 0.9982 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=117723x-613.268 0.9990 奥硝唑 y=854018x+68.6345 0.9976 0.5,500 异丙硝唑 y=369460x-815.892 0.9940 0.5,500 4-硝基咪唑 y=66043.9x+173.367 0.9933 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=96087.2x+12.99 0.9946 0.5,500 羟基甲硝唑 0.5,500 y=97907.9x-318.921 0.9950 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=77203.9x-562.638 0.9967 甲硝唑 0.5,500 y=47297.1x+39.636 0.9956 二甲硝咪唑 y=27163.9x-244.012 0.9977 0.5,500 洛硝哒唑 y=9643.98x-63.6822 0.9986 0.5,500 水剂类特尼哒唑 y=27906.7x+44.3671 0.9979 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=8763.96x-94.6578 0.9976 苯硝咪唑 0.5,500 y=34115x+286.836 0.9979 塞克硝唑 0.5,500 y=36823.1x-179.311 0.9988 替硝唑 y=162467x+512.301 0.9931 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=61429.9x-492.798 0.9945 0.5,500 奥硝唑 y=44246.8x-132.967 0.9988 0.5,500 异丙硝唑 0.5,500 y=460838x+415.689 0.9969 4-硝基咪唑 0.5,500 y=38669.8x-1393.62 0.9968 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=108167x-2393.22 0.9977 羟基甲硝唑 0.5,500 y=68126.9x-1558.62 0.9967 羟基二甲硝咪唑 y=93188.1x-1034.21 0.9981 0.5,500 甲硝唑 y=52272.1x-769.621 0.9937 0.5,500 香波类二甲硝咪唑 y=35559x-830.678 0.9939 0.5,500 基质 洛硝哒唑 0.5,500 y=11612.8x-491.689 0.9986 特尼哒唑 0.5,500 y=33547.8x-132.326 0.9976 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=11668.6x-520.369 0.9955 苯硝咪唑 y=2593.68x-670.961 0.9976 0.5,500 塞克硝唑 y=33286.8x-929.863 0.9977 0.5,500 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 替硝唑 0.5,500 y=118801x-4954.26 0.9965 羟基异丙硝唑 y=86852.1x-3221.29 0.9944 0.5,500 奥硝唑 y=59619.2x-1529.62 0.9956 0.5,500 异丙硝唑 y=387402x-22263.7 0.9951 0.5,500 4-硝基咪唑 y=88308.2x+177.268 0.9957 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=95776.9x-220.678 0.9965 0.5,500 羟基甲硝唑 0.5,500 y=92492.8x-574.21 0.9962 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=78719.7x-923.678 0.9932 甲硝唑 y=55277.6x-273.612 0.9987 0.5,500 二甲硝咪唑 y=30082.3x-461.654 0.9941 0.5,500 洛硝哒唑 y=11137.9x-90.9813 0.9955 0.5,500 膏霜类特尼哒唑 y=30643.9x-25.6130 0.9982 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=10309.8x-52.8961 0.9951 苯硝咪唑 0.5,500 y=42133.6x-325.618 0.9963 塞克硝唑 y=44694.7x-279.564 0.9996 0.5,500 替硝唑 y=82867.6x-477.811 0.9987 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=77458.7x-151.238 0.9956 0.5,500 奥硝唑 y=52948.7x-318.712 0.9990 0.5,500 异丙硝唑 0.5,500 y=466537x-582.978 0.9965 4-硝基咪唑 0.5,500 y=95133.9x-165.261 0.9978 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=108241x-193.678 0.9950 羟基甲硝唑 y=105329x-121.074 0.9998 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=94166x-432.681 0.9987 0.5,500 甲硝唑 y=56839.7x-86.8175 0.9961 0.5,500 二甲硝咪唑 y=32969.7x-201.328 0.9978 0.5,500 洛硝哒唑 0.5,500 y=11745.9x-167.318 0.9951 特尼哒唑 0.5,500 y=30937x-124.89 0.9986 氯甲硝咪唑 y=11106.9x-78.3647 0.9976 0.5,500 苯硝咪唑 y=41078.9x+147.269 0.9949 0.5,500 散粉类塞克硝唑 y=30923x-143.981 0.9967 0.5,500 基质 替硝唑 y=20166.8x-138.216 0.9977 0.5,500 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=71062.1x-96.2147 0.9950 奥硝唑 0.5,500 y=46904.2x-36.2188 0.9948 异丙硝唑 y=289940x-1263.86 0.9989 0.5,500 表18 验证单位2验证15种硝基咪唑的线性回归方程、相关系数及线性范围 溶剂/ 相关系数 线性范围 目标化合物 线性方程 2基质 (r) (,g/L) 4-硝基咪唑 0.5,500 y=90572.483x+529.922 0.9939 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=133364.147x+53.401 0.9952 羟基甲硝唑 0.5,500 y=114990.82x-227.566 0.9979 10%甲 羟基二甲硝咪唑 醇-水 0.5,500 y=119064.46x-356.34 0.9981 甲硝唑 0.5,500 y=87712.94x-169.965 0.9972 二甲硝咪唑 0.5,500 y=64151.184x-722.36 0.9979 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 洛硝哒唑 0.5,500 y=24915.21x-16.697 0.9958 特尼哒唑 0.5,500 y=58847.96x+251.809 0.9949 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=17698.14x-23.916 0.9982 苯硝咪唑 0.5,500 y=73734.91x-749.104 0.9981 塞克硝唑 0.5,500 y=65268.987x-72.35 0.9984 替硝唑 0.5,500 y=121484.87x+225.32 0.9975 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=117597.03x-598.733 0.9983 奥硝唑 0.5,500 y=853104.2x-67.007 0.9969 异丙硝唑 0.5,500 y=369064.67x-796.55 0.9933 4-硝基咪唑 0.5,500 y=65973.23x-169.258 0.9926 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=95984.38x-12.68 0.9939 羟基甲硝唑 0.5,500 y=97803.13x+311.362 0.9943 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=77121.29x-549.303 0.9960 甲硝唑 0.5,500 y=47246.49x-38.696 0.9949 二甲硝咪唑 0.5,500 y=27134.83x-238.228 0.9970 洛硝哒唑 0.5,500 y=9633.66x-62.172 0.9979 水剂类特尼哒唑 0.5,500 y=27876.83x-43.31 0.9972 基质 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=8754.58x-92.414 0.9969 苯硝咪唑 0.5,500 y=34078.49x-280.037 0.9972 塞克硝唑 0.5,500 y=36783.69x+175.06 0.9981 替硝唑 0.5,500 y=162293.16x-500.1594 0.9924 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=61364.1x-481.118 0.9938 奥硝唑 0.5,500 y=44199.455x-129.81 0.9981 异丙硝唑 0.5,500 y=460344.9x-405.837 0.9962 4-硝基咪唑 0.5,500 y=38628.423x-1360.59 0.9961 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=108051.26x-2336.5 0.9970 羟基甲硝唑 0.5,500 y=68054.004x-1521.68 0.996 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=93088.388x-1009.699 0.9974 甲硝唑 0.5,500 y=52216.16x-751.38 0.9930 二甲硝咪唑 0.5,500 y=35520.95x-810.99 0.9932 洛硝哒唑 0.5,500 y=11600.374x+480.0359 0.9979 香波类特尼哒唑 0.5,500 y=33511.903x-129.189 0.9969 基质 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=11656.114x-508.036 0.9948 苯硝咪唑 0.5,500 y=2590.904x-655.059 0.9969 塞克硝唑 0.5,500 y=33251.18x-907.82 0.9970 替硝唑 0.5,500 y=118673.88x-4836.84 0.9958 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=86759.16x-3144.9 0.9937 奥硝唑 0.5,500 y=59555.407x+1493.368 0.9949 异丙硝唑 0.5,500 y=386987.47x-21736.05 0.9944 4-硝基咪唑 膏霜类0.5,500 y=88213.71x-173.06 0.9950 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 基质 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=95674.418x-215.447 0.9958 羟基甲硝唑 0.5,500 y=92393.83x-560.6 0.9955 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=78635.469x-901.78 0.9925 甲硝唑 0.5,500 y=55218.452x+267.127 0.9980 二甲硝咪唑 0.5,500 y=30050.11x+450.71 0.9934 洛硝哒唑 0.5,500 y=11125.982x-88.825 0.9948 特尼哒唑 0.5,500 y=30611.111x-25.005 0.9975 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=10298.76x-51.642 0.9944 苯硝咪唑 0.5,500 y=42088.517x-317.9 0.9956 塞克硝唑 0.5,500 y=44646.876x-272.938 0.9989 替硝唑 0.5,500 y=82778.93x-466.48 0.9980 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=77375.819x-147.653 0.9949 奥硝唑 0.5,500 y=52892.04x-311.158 0.9983 异丙硝唑 0.5,500 y=466037.80x-569.16 0.9958 4-硝基咪唑 0.5,500 y=95032.106x-161.34 0.9971 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=108125.18x-189.087 0.9943 羟基甲硝唑 0.5,500 y=105216.29x-118.204 0.9991 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=94065.24x-422.426 0.9980 甲硝唑 0.5,500 y=56778.881x+84.75 0.9954 二甲硝咪唑 0.5,500 y=32934.42x-196.5565 0.9971 洛硝哒唑 0.5,500 y=11733.331x-163.35 0.9944 特尼哒唑 散粉类0.5,500 y=30903.89x-121.93 0.9979 基质 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=11095.01x-76.5074 0.9969 苯硝咪唑 0.5,500 y=41034.94x-143.77 0.9942 塞克硝唑 0.5,500 y=30889.91x-140.568 0.9960 替硝唑 0.5,500 y=20145.22x-134.94 0.9970 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=70986.063x-93.934 0.9943 奥硝唑 0.5,500 y=46854.012x+35.3604 0.9941 异丙硝唑 0.5,500 y=289629.76x+1233.906 0.9982 表19 验证单位3验证15种硝基咪唑的线性回归方程、相关系数及线性范围 溶剂/相关系数 线性范围 目标化合物 线性方程 2基质 (r) (,g/L) 4-硝基咪唑 y=91875.4x+566.68 0.9943 0.5,500 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=135282.64x+57.105 0.9956 羟基甲硝唑 0.5,500 y=116645.02x-243.353 0.9983 10%甲羟基二甲硝咪唑 y=120777.25x-381.061 0.9985 0.5,500 醇-水 甲硝唑 y=88974.73x-181.75 0.9976 0.5,500 二甲硝咪唑 y=65074.02x-772.475 0.9983 0.5,500 洛硝哒唑 y=25273.63x+17.8551 0.9962 0.5,500 特尼哒唑 0.5,500 y=59694.52x-269.2788 0.9953 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=17952.74x-25.5754 0.9986 苯硝咪唑 y=74795.62x+801.074 0.9985 0.5,500 塞克硝唑 y=66207.91x+77.379 0.9988 0.5,500 替硝唑 y=123232.48x-240.496 0.9979 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=119288.72x-640.4125 0.9987 0.5,500 奥硝唑 0.5,500 y=865376.44x-71.661 0.9973 异丙硝唑 0.5,500 y=374373.82x-851.3511 0.9937 4-硝基咪唑 0.5,500 y=66922.28x-181.6946 0.9930 2-甲硝咪唑 y=97365.16x+13.5659 0.9943 0.5,500 羟基甲硝唑 y=99210.08x-332.9273 0.9947 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=78230.71x+587.727 0.9964 0.5,500 甲硝唑 y=47926.15x-41.5209 0.9953 0.5,500 二甲硝咪唑 0.5,500 y=27525.18x-254.348 0.9974 洛硝哒唑 0.5,500 y=9772.24x-66.421 0.9983 水剂类特尼哒唑 y=28277.86x-46.3185 0.9976 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 y=8880.52x-98.8162 0.9973 0.5,500 苯硝咪唑 y=34568.73x-299.9608 0.9976 0.5,500 塞克硝唑 y=37312.85x+187.4208 0.9985 0.5,500 替硝唑 0.5,500 y=164627.81x-534.6342 0.9928 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=62246.92x-514.8782 0.9942 奥硝唑 y=44835.28x+138.8021 0.9985 0.5,500 异丙硝唑 y=466967.15x-433.6153 0.9966 0.5,500 4-硝基咪唑 y=39184.11x-1454.9867 0.9965 0.5,500 2-甲硝咪唑 y=109605.62x-2498.8247 0.9974 0.5,500 羟基甲硝唑 y=69032.99x+1627.9145 0.9964 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 0.5,500 y=94427.50x-1079.8328 0.9978 甲硝唑 0.5,500 y=52967.32x-803.9467 0.9934 二甲硝咪唑 y=36031.93x-867.4082 0.9936 0.5,500 洛硝哒唑 y=11767.25x-513.0468 0.9983 0.5,500 香波类特尼哒唑 y=33993.99x+138.5775 0.9973 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 y=11823.79x-543.8843 0.9952 0.5,500 苯硝咪唑 0.5,500 y=2628.18x-700.7503 0.9973 塞克硝唑 0.5,500 y=33729.51x-970.7214 0.9974 替硝唑 y=120381.05x-5172.4943 0.9962 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=88007.23x+3363.1982 0.9941 0.5,500 奥硝唑 y=60412.14x-1596.218 0.9953 0.5,500 异丙硝唑 y=392554.45x-23244.009 0.9948 0.5,500 4-硝基咪唑 y=89482.70x+185.0734 0.9954 0.5,500 2-甲硝咪唑 0.5,500 y=97050.73x+230.3922 0.9962 羟基甲硝唑 0.5,500 y=93722.95x-599.4909 0.9959 膏霜类羟基二甲硝咪唑 y=79766.67x+964.3835 0.9929 0.5,500 基质 甲硝唑 y=56012.79x-285.6818 0.9984 0.5,500 二甲硝咪唑 y=30482.39x-481.9458 0.9938 0.5,500 洛硝哒唑 y=11286.03x-94.8799 0.9952 0.5,500 特尼哒唑 0.5,500 y=31051.46x+26.79145 0.9979 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 氯甲硝咪唑 0.5,500 y=10446.92x-55.2072 0.9948 苯硝咪唑 y=42693.98x-339.6096 0.9960 0.5,500 塞克硝唑 y=45289.14x-291.7602 0.9993 0.5,500 替硝唑 y=83969.74x-498.85 0.9984 0.5,500 羟基异丙硝唑 y=78488.90x-157.3106 0.9953 0.5,500 奥硝唑 0.5,500 y=53652.92x-332.5247 0.9987 异丙硝唑 0.5,500 y=472741.94x+608.6834 0.9962 4-硝基咪唑 0.5,500 y=96399.18x-172.7712 0.9975 2-甲硝咪唑 y=109680.61x-202.0284 0.9947 0.5,500 羟基甲硝唑 y=106729.88x-126.51296 0.9995 0.5,500 羟基二甲硝咪唑 y=95418.41x-451.8069 0.9984 0.5,500 甲硝唑 y=57595.67x-90.4758 0.9958 0.5,500 二甲硝咪唑 0.5,500 y=33408.20x+210.8732 0.9975 洛硝哒唑 0.5,500 y=11902.12x-174.3451 0.9948 散粉类特尼哒唑 y=31348.46x+130.1556 0.9983 0.5,500 基质 氯甲硝咪唑 y=11254.62x-81.5395 0.9973 0.5,500 苯硝咪唑 y=41625.25x+153.5476 0.9946 0.5,500 塞克硝唑 y=31334.28x-150.7704 0.9964 0.5,500 替硝唑 0.5,500 y=20435.02x-144.1926 0.9974 羟基异丙硝唑 0.5,500 y=72007.23x-100.1225 0.9947 奥硝唑 y=47528.03x+37.8596 0.9945 0.5,500 异丙硝唑 y=293796.20x+1319.027 0.9986 0.5,500 7. 2 日内及日间精密度 表23 验证单位1验证日内和日间精密度及稳定性(n=7) 日内精密度日间精密度RSD/% RSD/% 溶剂/基质 化合物 0.05 1 0.05 1 ,g/mL ,g/mL ,g/mL ,g/mL 4-硝基咪唑 2.45 1.54 2.63 3.23 2-甲硝咪唑 1.38 2.56 2.65 3.76 羟基甲硝唑 2.71 1.44 3.97 4.78 羟基二甲硝咪唑 1.64 2.77 1.24 2.68 甲硝唑 1.97 2.97 2.64 2.97 二甲硝咪唑 3.97 1.17 3.54 2.67 洛硝哒唑 2.99 1.94 3.21 1.69 10%甲醇/水 特尼哒唑 2.64 1.64 2.78 1.49 氯甲硝咪唑 2.01 2.91 2.59 2.11 苯硝咪唑 1.99 1.54 2.61 2.18 塞克硝唑 1.99 2.48 2.99 1.95 替硝唑 2.99 1.59 2.07 2.77 羟基异丙硝唑 2.87 1.95 3.91 4.16 奥硝唑 3.99 2.89 3.59 4.18 异丙硝唑 4.18 1.59 3.47 3.48 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 4-硝基咪唑 1.22 0.78 4.05 1.88 2-甲硝咪唑 3.19 1.62 3.26 4.15 羟基甲硝唑 2.78 1.56 3.15 2.18 羟基二甲硝咪唑 4.89 2.08 3.21 3.67 甲硝唑 1.89 0.91 1.68 2.44 二甲硝咪唑 4.51 3.58 2.69 3.14 洛硝哒唑 3.29 1.81 2.18 2.88 水剂类基质 特尼哒唑 1.89 3.48 2.72 3.51 氯甲硝咪唑 3.94 1.55 3.15 2.69 苯硝咪唑 2.66 1.59 2.19 2.61 塞克硝唑 4.18 3.69 4.17 4.29 替硝唑 2.59 1.59 3.06 3.05 羟基异丙硝唑 3.41 1.59 3.19 4.06 奥硝唑 2.16 1.44 2.91 4.16 异丙硝唑 1.59 1.59 4.16 3.26 4-硝基咪唑 2.61 3.99 3.16 3.75 2-甲硝咪唑 3.11 3.56 3.19 2.57 羟基甲硝唑 1.26 1.55 2.19 1.48 羟基二甲硝咪唑 0.86 1.59 2.55 3.44 甲硝唑 1.81 3.14 2.85 1.06 二甲硝咪唑 2.05 3.15 4.11 3.92 洛硝哒唑 3.29 4.05 2.78 3.19 香波类基质 特尼哒唑 4.06 3.59 3.15 4.19 氯甲硝咪唑 3.88 1.92 4.11 3.59 苯硝咪唑 4.26 4.62 4.05 2.89 塞克硝唑 3.69 3.41 3.51 2.74 替硝唑 2.05 3.28 2.18 3.16 羟基异丙硝唑 2.46 3.20 2.99 1.77 奥硝唑 1.08 4.05 3.11 4.69 异丙硝唑 3.92 1.65 3.18 2.56 4-硝基咪唑 2.03 1.20 5.24 2.03 2-甲硝咪唑 2.99 1.76 4.74 2.99 羟基甲硝唑 4.71 1.16 4.39 4.71 羟基二甲硝咪唑 4.31 2.94 4.81 4.31 甲硝唑 2.29 3.80 4.12 2.29 膏霜类基质 二甲硝咪唑 4.05 4.22 4.06 3.05 洛硝哒唑 3.32 3.14 2.76 3.32 特尼哒唑 2.97 4.13 3.87 2.97 氯甲硝咪唑 2.61 4.55 2.57 2.61 苯硝咪唑 2.19 4.61 1.49 2.19 塞克硝唑 3.42 3.01 4.15 3.42 替硝唑 3.72 4.35 2.94 3.72 羟基异丙硝唑 2.55 4.08 4.64 2.55 奥硝唑 3.19 4.66 4.33 4.19 异丙硝唑 1.80 0.61 3.91 1.80 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 4-硝基咪唑 1.28 3.02 2.76 1.28 2-甲硝咪唑 2.55 2.43 3.53 2.55 羟基甲硝唑 2.70 1.48 3.31 2.70 羟基二甲硝咪唑 1.04 3.09 3.15 1.04 甲硝唑 2.36 3.13 4.10 2.36 散粉类基质 二甲硝咪唑 3.73 4.64 3.68 3.73 洛硝哒唑 4.01 4.06 4.60 4.01 特尼哒唑 4.44 3.83 4.93 4.44 氯甲硝咪唑 4.27 3.67 4.08 4.27 苯硝咪唑 2.85 4.32 3.17 2.85 塞克硝唑 3.07 3.78 4.54 3.07 替硝唑 3.93 3.29 4.34 3.93 羟基异丙硝唑 3.25 3.98 3.89 3.25 奥硝唑 4.05 2.51 4.85 4.05 异丙硝唑 1.07 1.25 3.10 1.07 表24 验证单位2验证日内和日间精密度及稳定性(n=7) 日内精密度日间精密度RSD/% RSD/% 溶剂/基质 化合物 0.05 1 0.05 1 ,g/mL ,g/mL ,g/mL ,g/mL 4-硝基咪唑 2.51 1.58 2.69 3.30 2-甲硝咪唑 1.41 2.62 2.71 3.85 羟基甲硝唑 2.77 1.47 4.06 4.89 羟基二甲硝咪唑 1.68 2.83 1.27 2.74 甲硝唑 2.02 3.04 2.70 3.04 二甲硝咪唑 4.06 1.20 3.62 2.73 洛硝哒唑 3.06 1.98 3.28 1.73 特尼哒唑 10%甲醇/水 2.70 1.68 2.84 1.52 氯甲硝咪唑 2.06 2.98 2.65 2.16 苯硝咪唑 2.04 1.58 2.67 2.23 塞克硝唑 2.04 2.54 3.06 1.99 替硝唑 3.06 1.63 2.12 2.83 羟基异丙硝唑 2.94 1.99 4.00 4.26 奥硝唑 4.08 2.96 3.67 4.28 异丙硝唑 4.28 1.63 3.55 3.56 4-硝基咪唑 1.25 0.80 4.14 1.92 2-甲硝咪唑 3.26 1.66 3.33 4.25 羟基甲硝唑 2.84 1.60 3.22 2.23 羟基二甲硝咪唑 4.00 2.13 3.28 3.75 水剂类基质 甲硝唑 1.93 0.93 1.72 2.50 二甲硝咪唑 4.61 3.66 2.75 3.21 洛硝哒唑 3.37 1.85 2.23 2.95 特尼哒唑 1.93 3.56 2.78 3.59 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 氯甲硝咪唑 4.03 1.59 3.22 2.75 苯硝咪唑 2.72 1.63 2.24 2.67 塞克硝唑 4.28 3.77 4.27 4.39 替硝唑 2.65 1.63 3.13 3.12 羟基异丙硝唑 3.49 1.63 3.26 4.18 奥硝唑 2.21 1.47 2.98 4.26 异丙硝唑 1.63 1.63 4.26 3.33 4-硝基咪唑 2.67 4.08 3.23 3.84 2-甲硝咪唑 3.18 3.64 3.26 2.63 羟基甲硝唑 1.29 1.59 2.24 1.51 羟基二甲硝咪唑 0.88 1.63 2.61 3.52 甲硝唑 1.85 3.21 2.92 1.08 二甲硝咪唑 2.10 3.22 4.20 4.01 洛硝哒唑 3.37 4.14 2.84 3.26 香波类基质 特尼哒唑 4.15 3.67 3.22 4.29 氯甲硝咪唑 3.97 1.96 4.20 3.67 苯硝咪唑 4.36 4.73 4.14 2.96 塞克硝唑 3.77 3.49 3.59 2.80 替硝唑 2.10 3.36 2.23 3.23 羟基异丙硝唑 2.52 3.27 3.06 1.81 奥硝唑 1.10 4.14 3.18 4.80 异丙硝唑 4.01 1.69 3.25 2.62 4-硝基咪唑 1.84 0.18 4.36 1.89 2-甲硝咪唑 2.71 1.35 3.94 3.23 羟基甲硝唑 4.27 0.89 3.65 2.93 羟基二甲硝咪唑 3.90 2.26 4.00 3.75 甲硝唑 2.08 2.93 4.26 2.13 二甲硝咪唑 4.57 3.24 4.04 3.9 洛硝哒唑 3.01 2.41 2.29 3.61 膏霜类基质 特尼哒唑 2.69 3.95 3.22 4.58 氯甲硝咪唑 2.36 3.50 2.14 4.2 苯硝咪唑 1.98 4.32 1.24 4.77 塞克硝唑 3.10 3.86 3.45 2.64 替硝唑 3.37 3.35 2.44 4.56 羟基异丙硝唑 2.31 3.14 3.86 3.56 奥硝唑 4.7 3.58 4.43 3.51 异丙硝唑 1.63 0.47 3.25 2.10 4-硝基咪唑 1.16 2.32 2.29 2.27 2-甲硝咪唑 2.31 1.87 2.94 3.93 羟基甲硝唑 2.44 1.14 4.42 3.25 散粉类基质 羟基二甲硝咪唑 0.94 2.37 4.29 2.50 甲硝唑 2.14 2.4 3.41 3.05 二甲硝咪唑 3.38 3.57 3.06 3.77 洛硝哒唑 3.63 3.12 4.65 2.40 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 特尼哒唑 4.92 2.95 4.93 4.30 氯甲硝咪唑 3.87 4.36 3.40 3.22 苯硝咪唑 2.58 3.32 2.64 4.43 塞克硝唑 2.78 2.91 3.77 2.70 替硝唑 3.56 2.53 3.61 4.09 羟基异丙硝唑 2.95 3.06 3.23 2.83 奥硝唑 3.66 1.93 4.87 4.38 异丙硝唑 0.97 0.96 2.58 1.28 表25 验证单位3验证日内和日间精密度及稳定性(n=7) 日内精密度RSD/% 日间精密度RSD/% 溶剂/基质 化合物 0.05 1 0.05 1 ,g/mL ,g/mL ,g/mL ,g/mL 4-硝基咪唑 2.77 1.74 2.97 3.64 2-甲硝咪唑 1.56 2.89 2.99 4.25 羟基甲硝唑 3.06 1.62 4.48 4.40 羟基二甲硝咪唑 1.85 3.12 1.40 3.02 甲硝唑 2.23 3.35 2.98 3.35 二甲硝咪唑 4.48 1.32 3.99 3.01 洛硝哒唑 3.38 2.18 3.62 1.91 特尼哒唑 10%甲醇/2.98 1.85 3.13 1.68 水 氯甲硝咪唑 2.27 3.29 2.92 2.38 苯硝咪唑 2.25 1.74 2.95 2.46 塞克硝唑 2.25 2.80 3.38 2.20 替硝唑 3.38 1.80 2.34 3.12 羟基异丙硝唑 3.24 2.20 4.41 4.70 奥硝唑 4.50 3.27 4.05 4.72 异丙硝唑 4.72 1.80 3.92 3.93 4-硝基咪唑 1.38 0.88 4.57 2.12 2-甲硝咪唑 3.6 1.83 3.67 4.69 羟基甲硝唑 3.13 1.77 3.55 2.46 羟基二甲硝咪唑 4.52 2.35 3.62 4.14 甲硝唑 2.13 1.03 1.90 2.76 二甲硝咪唑 3.09 4.04 3.03 3.54 水剂类基质 洛硝哒唑 3.72 2.04 2.46 3.25 特尼哒唑 2.13 3.93 3.07 3.96 氯甲硝咪唑 4.45 1.75 3.55 3.03 苯硝咪唑 3.00 1.80 2.47 2.95 塞克硝唑 4.72 4.16 4.71 4.84 替硝唑 2.92 1.8 3.45 3.44 羟基异丙硝唑 3.85 1.80 3.60 4.72 奥硝唑 2.44 1.62 3.29 4.70 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 异丙硝唑 1.80 1.80 4.70 3.67 4-硝基咪唑 2.95 4.50 3.56 4.24 2-甲硝咪唑 3.51 4.02 3.60 2.90 羟基甲硝唑 1.42 1.75 2.47 1.67 羟基二甲硝咪唑 0.97 1.80 2.88 3.88 甲硝唑 2.04 3.54 3.22 1.19 二甲硝咪唑 2.32 3.55 4.63 4.42 洛硝哒唑 3.72 4.57 3.13 3.6 特尼哒唑 香波类基质 4.58 4.05 3.55 4.73 氯甲硝咪唑 4.38 2.16 4.63 4.05 苯硝咪唑 4.81 4.22 4.57 3.27 塞克硝唑 4.16 3.85 3.96 3.09 替硝唑 2.32 3.71 2.46 3.56 羟基异丙硝唑 2.78 3.61 3.38 2.00 奥硝唑 1.21 4.57 3.51 4.30 异丙硝唑 4.42 1.86 3.59 2.89 4-硝基咪唑 2.03 1.20 4.81 2.09 2-甲硝咪唑 2.99 1.49 4.35 3.56 羟基甲硝唑 4.71 0.98 4.03 3.23 羟基二甲硝咪唑 4.30 2.49 4.41 4.14 甲硝唑 2.29 3.23 4.70 2.35 膏霜类基质 二甲硝咪唑 4.04 3.57 3.56 4.30 洛硝哒唑 3.32 2.66 2.53 3.98 特尼哒唑 2.97 4.36 3.55 4.05 氯甲硝咪唑 2.60 3.86 2.36 4.63 苯硝咪唑 2.18 4.77 1.37 3.26 塞克硝唑 3.42 4.26 3.81 2.91 替硝唑 3.72 3.70 2.69 4.03 羟基异丙硝唑 2.55 3.46 4.26 3.93 奥硝唑 3.19 3.95 4.89 3.87 异丙硝唑 1.80 0.52 3.59 2.32 4-硝基咪唑 1.28 2.56 2.53 2.50 2-甲硝咪唑 2.55 2.06 3.24 4.34 羟基甲硝唑 2.69 1.26 4.88 3.59 羟基二甲硝咪唑 1.04 2.61 4.73 2.76 甲硝唑 2.36 2.65 3.76 3.37 散粉类基质 二甲硝咪唑 3.73 3.94 3.38 4.16 洛硝哒唑 4.01 3.44 3.13 2.65 特尼哒唑 3.43 3.25 2.44 4.74 氯甲硝咪唑 4.27 4.81 3.75 3.55 苯硝咪唑 2.85 3.66 2.91 4.89 塞克硝唑 3.07 3.21 4.16 2.98 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 替硝唑 3.93 2.79 3.98 4.51 羟基异丙硝唑 3.25 3.38 3.56 3.12 奥硝唑 4.04 2.13 3.37 4.83 异丙硝唑 1.07 1.06 2.85 1.41 7.3 回收率 表26 验证单位1验证水剂类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.42 2.43 81.25 1.45 4-硝基咪唑 0.4 91.08 3.89 97.08 1.21 4 86.74 4.30 94.60 4.40 0.04 85.50 3.22 90.83 2.52 2-甲硝咪唑 0.4 80.08 2.35 92.25 3.95 4 94.17 4.91 94.74 4.21 0.04 86.67 3.42 95.83 1.66 0.4 88.75 3.94 94.42 2.13 羟基甲硝唑 4 90.80 4.42 93.65 3.87 0.04 88.75 4.39 91.25 2.37 羟基二甲硝咪0.4 86.88 4.95 86.63 2.98 唑 4 93.42 4.71 93.53 3.32 0.04 86.50 3.45 97.50 1.60 甲硝唑 0.4 85.63 3.63 87.54 1.63 4 88.45 4.25 94.07 3.12 0.04 85.83 2.70 90.83 2.51 二甲硝咪唑 0.4 80.75 4.07 104.50 3.74 4 89.05 4.45 93.28 2.99 0.1 85.00 1.64 90.83 2.02 洛硝哒唑 1 84.87 3.78 94.82 2.21 10 91.78 4.73 97.40 4.44 0.04 81.25 2.52 91.25 1.58 特尼哒唑 0.4 86.58 4.69 88.88 2.87 4 85.37 3.46 96.69 2.18 0.1 86.67 3.74 96.67 1.13 氯甲硝咪唑 1 81.73 4.91 83.25 3.73 10 89.36 3.73 81.67 4.71 0.1 86.00 1.04 93.42 3.15 苯硝咪唑 1 86.42 1.81 80.50 3.25 10 92.66 4.78 93.33 4.11 0.04 85.83 3.50 104.58 2.85 塞克硝唑 0.4 96.00 3.93 100.88 2.45 4 93.67 4.61 96.33 3.53 0.04 85.75 3.37 95.42 2.55 替硝唑 0.4 90.00 2.95 90.67 3.00 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 4 87.32 3.53 93.45 3.63 0.1 89.17 1.03 96.17 3.94 羟基异丙硝唑 1 88.53 4.07 92.55 3.01 10 90.00 4.60 93.91 4.09 0.04 87.67 3.62 108.33 4.62 奥硝唑 0.4 87.63 4.96 103.63 3.76 4 96.17 3.10 96.89 2.46 0.01 85.00 3.28 88.87 3.02 异丙硝唑 0.1 89.67 4.45 87.33 2.49 1 93.72 3.18 97.33 3.69 表27 验证单位1验证香波类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 86.50 2.44 83.33 2.52 4-硝基咪唑 0.4 86.71 4.02 91.50 3.78 4 94.43 4.07 96.32 3.50 0.04 85.42 3.44 88.75 3.52 2-甲硝咪唑 0.4 90.50 2.04 92.25 2.46 4 90.68 4.02 95.36 1.81 0.04 86.58 2.34 88.33 3.36 羟基甲硝唑 0.4 86.67 2.44 89.04 2.25 4 87.95 1.98 94.63 2.80 0.04 85.00 3.13 90.42 3.19 羟基二甲硝咪0.4 86.13 2.12 86.67 2.79 唑 4 88.56 4.93 94.75 2.33 0.04 86.25 1.45 80.42 3.19 甲硝唑 0.4 87.38 2.94 91.17 3.59 4 90.26 4.91 96.06 4.27 0.04 86.25 1.06 82.50 3.44 二甲硝咪唑 0.4 86.79 1.40 94.21 4.05 4 86.59 4.03 97.25 2.88 0.1 87.50 1.28 89.53 2.81 洛硝哒唑 1 89.32 2.45 86.83 4.16 10 89.01 4.10 97.45 3.49 0.04 86.67 1.01 80.83 4.44 特尼哒唑 0.4 85.25 4.12 88.38 3.33 4 85.13 4.97 94.37 1.59 0.1 85.17 1.80 86.00 3.71 氯甲硝咪唑 1 86.28 4.02 87.57 3.97 10 97.25 2.59 99.36 4.38 0.1 86.00 2.64 90.67 3.63 苯硝咪唑 1 88.23 2.88 89.97 4.24 10 89.98 3.06 96.62 3.84 塞克硝唑 0.04 86.25 2.76 89.58 4.20 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 92.29 3.99 96.38 2.06 4 91.48 3.80 97.01 3.73 0.04 86.67 3.84 84.17 3.52 替硝唑 0.4 87.71 3.31 87.38 3.48 4 91.45 2.74 96.19 3.84 0.1 86.00 3.52 94.67 2.88 羟基异丙硝唑 1 87.57 1.62 84.52 4.20 10 91.58 2.16 94.06 3.80 0.04 86.08 2.74 94.17 3.45 奥硝唑 0.4 88.50 2.93 97.79 4.56 4 91.09 2.31 94.50 2.43 0.01 85.00 4.09 88.33 3.08 异丙硝唑 0.1 87.33 1.97 91.83 2.69 1 85.55 3.34 90.57 3.51 表28 验证单位1验证膏霜类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.83 2.63 88.75 3.41 0.4 90.29 2.88 94.67 2.77 4-硝基咪唑 4 96.94 1.22 97.90 2.61 0.04 93.33 2.99 97.08 3.45 2-甲硝咪唑 0.4 89.92 3.58 91.29 2.77 4 97.53 1.32 99.23 4.43 0.04 93.33 2.29 98.75 3.38 羟基甲硝唑 0.4 92.33 2.21 97.21 2.96 4 96.57 3.89 99.49 4.88 0.04 93.33 1.37 96.25 2.39 羟基二甲硝咪0.4 87.42 3.25 93.79 1.45 唑 4 96.55 3.36 98.15 4.48 0.04 89.58 2.50 94.17 3.52 甲硝唑 0.4 88.83 4.00 95.50 2.82 4 96.95 2.73 98.18 2.99 0.04 92.92 3.44 96.25 3.57 二甲硝咪唑 0.4 89.21 4.73 90.50 2.91 4 96.57 1.97 97.28 1.23 0.1 95.50 3.89 100.83 1.07 洛硝哒唑 1 90.58 4.28 94.40 3.72 10 96.43 4.25 98.66 4.62 0.04 90.00 0.45 99.58 3.51 特尼哒唑 0.4 92.29 3.88 93.96 2.82 4 95.29 4.76 97.72 3.85 0.1 91.67 1.13 93.67 1.09 氯甲硝咪唑 1 96.92 3.53 97.15 2.74 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 10 98.45 4.98 99.64 4.65 0.1 86.00 0.49 91.67 1.22 苯硝咪唑 1 94.42 4.58 97.35 4.52 10 98.22 3.37 99.79 3.27 0.04 92.92 2.39 95.83 3.41 塞克硝唑 0.4 93.58 2.97 94.71 3.09 4 95.88 4.64 98.20 2.73 0.04 86.25 3.49 87.92 3.51 替硝唑 0.4 88.92 4.14 90.08 2.85 4 95.98 3.88 98.31 3.01 0.1 89.83 3.95 97.67 1.07 羟基异丙硝唑 1 91.43 4.02 96.65 4.42 10 97.90 3.94 99.71 4.29 0.04 87.92 3.40 88.33 4.37 0.4 93.83 4.11 96.46 2.34 奥硝唑 4 95.80 3.89 98.86 3.64 0.01 88.33 4.08 90.00 4.09 异丙硝唑 0.1 93.83 1.07 97.00 1.12 1 94.28 3.06 99.33 3.99 表29 验证单位1验证散粉类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.92 3.82 88.75 2.98 4-硝基咪唑 0.4 93.96 3.99 99.88 1.45 4 96.48 3.55 98.76 2.11 0.04 85.83 3.63 92.92 3.71 2-甲硝咪唑 0.4 96.29 1.14 97.29 3.10 4 96.13 3.00 99.83 4.90 0.04 89.17 4.63 91.67 2.69 羟基甲硝唑 0.4 89.38 3.27 96.29 3.81 4 96.18 4.88 98.75 3.71 0.04 86.33 3.35 92.08 2.47 羟基二甲硝咪0.4 94.88 1.58 96.17 1.26 唑 4 95.62 4.45 99.23 3.50 0.04 91.25 3.34 97.50 3.23 甲硝唑 0.4 95.83 2.57 98.75 2.01 4 95.95 4.07 98.35 3.65 0.04 86.25 2.52 90.42 3.50 二甲硝咪唑 0.4 97.21 1.29 97.92 1.53 4 95.44 4.87 98.96 4.69 0.1 90.83 3.74 97.67 1.24 洛硝哒唑 1 87.88 3.61 94.45 2.63 10 94.77 1.00 95.33 3.95 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.04 87.50 3.25 92.50 3.75 特尼哒唑 0.4 97.08 2.77 97.42 4.91 4 96.93 4.82 98.95 4.82 0.1 91.33 3.62 95.67 1.46 氯甲硝咪唑 1 88.07 3.70 92.33 4.12 10 98.24 3.64 99.58 4.04 0.1 90.67 2.81 94.67 3.98 苯硝咪唑 1 87.85 4.56 94.95 4.06 10 98.52 2.14 99.87 3.64 0.04 92.08 4.52 92.92 4.55 塞克硝唑 0.4 91.75 2.24 93.33 2.47 4 96.52 3.38 100.13 1.89 0.04 86.25 4.57 91.25 2.48 替硝唑 0.4 90.04 3.11 91.75 2.67 4 96.65 2.52 100.04 3.22 0.1 91.33 1.02 92.17 1.05 羟基异丙硝唑 1 89.57 3.32 94.43 1.63 10 98.36 3.74 100.17 2.20 0.04 89.58 2.73 94.58 4.40 奥硝唑 0.4 95.71 1.36 97.38 3.74 4 97.41 4.37 99.73 2.33 0.01 93.33 3.27 95.00 3.33 异丙硝唑 0.1 93.50 3.61 95.50 1.07 1 95.37 4.44 96.62 2.28 表30 验证单位2验证水剂类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 86.47 2.46 82.25 1.47 4-硝基咪唑 0.4 92.20 2.97 98.27 1.22 4 87.81 4.35 95.76 4.45 0.04 86.55 3.26 91.95 2.55 2-甲硝咪唑 0.4 81.06 2.38 93.38 4.00 4 95.33 4.97 95.91 4.26 0.04 87.74 3.46 97.01 1.68 0.4 89.84 3.99 95.58 2.16 羟基甲硝唑 4 91.92 4.47 94.80 3.92 0.04 89.84 4.44 92.37 2.40 羟基二甲硝咪0.4 87.95 5.01 87.70 3.02 唑 4 94.57 4.77 94.68 3.36 0.04 87.56 3.49 98.70 1.62 甲硝唑 0.4 86.68 3.67 88.62 1.65 4 89.54 4.30 95.23 3.16 二甲硝咪唑 0.04 86.89 2.73 91.95 2.54 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 81.74 4.12 105.79 3.79 4 90.15 4.50 94.43 3.03 0.1 86.05 1.66 91.95 2.04 洛硝哒唑 1 85.91 3.83 95.99 2.24 10 92.91 4.79 98.60 4.49 0.04 82.25 2.55 92.37 1.60 特尼哒唑 0.4 87.64 4.75 89.97 2.91 4 86.42 3.50 97.88 2.21 0.1 87.74 3.79 97.86 1.14 氯甲硝咪唑 1 82.74 4.97 84.27 3.78 10 90.46 3.78 82.67 4.77 0.1 87.06 1.05 94.57 3.19 苯硝咪唑 1 87.48 1.83 81.49 3.29 10 93.80 4.84 94.48 4.16 0.04 86.89 3.54 105.87 2.89 塞克硝唑 0.4 97.18 3.98 102.12 2.48 4 94.82 4.67 97.51 3.57 0.04 86.80 3.41 96.59 2.58 替硝唑 0.4 91.11 2.99 91.79 3.04 4 88.39 3.57 94.60 3.67 0.1 90.27 1.04 97.35 3.99 羟基异丙硝唑 1 89.62 3.13 93.69 3.05 10 91.11 4.66 95.07 4.14 0.04 88.75 3.66 109.66 4.68 奥硝唑 0.4 88.71 3.02 104.90 3.81 4 97.35 3.14 98.08 2.49 0.01 86.05 3.32 89.96 3.06 异丙硝唑 0.1 90.77 4.50 88.40 2.52 1 94.87 3.22 98.53 3.74 表31 验证单位2验证香波类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 87.39 2.47 84.19 2.55 4-硝基咪唑 0.4 87.61 4.06 92.44 3.82 4 95.40 4.11 97.31 3.54 0.04 86.30 3.48 89.67 3.56 2-甲硝咪唑 0.4 91.43 2.06 93.20 2.49 4 91.62 4.06 96.34 1.83 0.04 87.47 2.36 89.24 3.39 羟基甲硝唑 0.4 87.56 2.47 89.96 2.27 4 88.86 2.00 95.61 2.83 0.04 85.88 3.16 91.35 3.22 羟基二甲硝咪0.4 87.02 2.14 87.56 2.82 唑 4 89.47 4.98 95.73 2.35 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.04 87.14 1.46 81.25 3.22 甲硝唑 0.4 88.28 2.97 92.11 3.63 4 91.19 4.96 97.05 4.31 0.04 87.14 1.07 83.35 3.48 二甲硝咪唑 0.4 87.69 1.41 95.18 4.09 4 87.48 4.07 98.25 2.91 0.1 88.40 1.29 90.45 2.84 洛硝哒唑 1 90.24 2.48 87.73 4.20 10 89.93 4.14 98.46 3.53 0.04 87.56 1.02 81.66 4.49 特尼哒唑 0.4 86.13 4.17 89.29 3.36 4 86.01 4.02 95.34 1.61 0.1 86.05 1.82 86.89 3.75 氯甲硝咪唑 1 87.17 3.11 88.47 4.01 10 98.25 2.62 100.39 4.43 0.1 86.89 2.67 91.61 3.67 苯硝咪唑 1 89.14 2.91 90.90 4.28 10 90.91 3.09 97.62 3.88 0.04 87.14 2.79 90.50 4.24 塞克硝唑 0.4 93.24 4.03 97.37 2.08 4 92.42 3.84 98.01 3.77 0.04 87.56 3.88 85.04 3.56 替硝唑 0.4 88.62 3.34 88.28 3.52 4 92.39 2.77 97.18 3.88 0.1 86.89 3.56 95.65 2.91 羟基异丙硝唑 1 88.47 1.64 85.39 4.24 10 92.53 2.18 95.03 3.84 0.04 86.97 2.77 95.14 3.49 奥硝唑 0.4 89.41 2.96 98.80 4.61 4 92.03 2.33 95.48 2.46 0.01 85.88 4.13 89.24 3.11 异丙硝唑 0.1 88.23 1.99 92.78 2.72 1 86.43 3.37 91.50 3.55 表32 验证单位2验证膏霜类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 87.83 2.69 90.82 3.49 0.4 92.39 2.95 96.88 2.83 4-硝基咪唑 4 99.20 1.25 100.18 2.67 0.04 95.50 3.06 99.34 3.53 2-甲硝咪唑 0.4 92.02 3.66 93.42 2.83 4 99.80 1.35 101.54 4.53 羟基甲硝唑 0.04 95.50 2.34 101.05 3.46 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 94.48 2.26 99.47 3.03 4 98.82 3.98 101.81 4.99 0.04 95.50 1.40 98.49 2.45 羟基二甲硝咪0.4 89.46 3.33 95.98 1.48 唑 4 98.80 3.44 100.44 4.58 0.04 91.67 2.56 96.36 3.60 甲硝唑 0.4 90.90 4.09 97.73 2.89 4 99.21 2.79 100.47 3.06 0.04 95.09 3.52 98.49 3.65 二甲硝咪唑 0.4 91.29 4.84 92.61 2.98 4 98.82 2.02 99.55 1.26 0.1 97.73 3.98 103.18 1.09 洛硝哒唑 1 92.69 4.38 96.60 3.81 10 98.68 4.35 100.96 4.73 0.04 92.10 1.46 101.90 3.59 特尼哒唑 0.4 94.44 3.97 96.15 2.89 4 97.51 4.87 100.00 3.94 0.1 93.81 1.16 95.85 1.12 氯甲硝咪唑 1 99.18 4.71 99.41 2.80 10 100.74 4.10 101.96 4.76 0.1 88.00 1.50 93.81 1.25 苯硝咪唑 1 96.62 4.69 99.62 4.63 10 100.51 3.45 102.12 3.35 0.04 95.09 2.45 98.06 3.49 塞克硝唑 0.4 95.76 3.04 96.92 3.16 4 98.11 4.75 100.49 2.79 0.04 88.26 3.57 89.97 3.59 替硝唑 0.4 90.99 4.24 92.18 2.92 4 98.22 3.97 100.60 3.08 0.1 91.92 4.04 99.95 1.09 羟基异丙硝唑 1 93.56 4.11 98.90 4.52 10 100.18 4.03 102.03 4.39 0.04 89.97 3.48 90.39 4.47 0.4 96.02 4.21 98.71 2.39 奥硝唑 4 98.03 3.98 101.16 3.72 0.01 90.39 4.18 92.10 4.19 异丙硝唑 0.1 96.02 1.09 99.26 1.15 1 96.48 3.13 101.64 4.08 表33 验证单位2验证散粉类空白化妆品添加15种禁用硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 88.87 3.95 91.80 3.08 4-硝基咪唑 0.4 97.19 4.13 103.31 1.50 4 99.79 3.67 102.15 2.18 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.04 88.78 3.75 96.11 3.84 2-甲硝咪唑 0.4 99.60 1.18 100.63 3.21 4 99.43 3.10 103.26 4.07 0.04 92.23 4.79 94.82 2.78 羟基甲硝唑 0.4 92.45 3.38 99.60 3.94 4 99.48 4.05 102.14 3.84 0.04 89.29 3.47 95.24 2.55 羟基二甲硝咪0.4 98.14 1.63 99.47 1.30 唑 4 98.90 4.60 102.64 3.62 0.04 94.38 3.45 100.85 3.34 甲硝唑 0.4 99.12 2.66 102.14 2.08 4 99.24 4.21 101.73 3.78 0.04 89.21 2.61 93.52 3.62 二甲硝咪唑 0.4 100.55 1.33 101.28 1.58 4 98.72 4.04 102.36 4.85 0.1 93.95 3.87 101.02 1.28 洛硝哒唑 1 90.90 3.73 97.69 2.72 10 98.02 1.03 98.60 4.09 0.04 90.50 3.36 95.68 3.88 特尼哒唑 0.4 100.41 2.87 100.76 4.08 4 100.26 4.99 102.35 4.99 0.1 94.47 3.74 98.95 1.51 氯甲硝咪唑 1 91.09 3.83 95.50 4.26 10 101.61 3.76 103.00 4.18 0.1 93.78 2.91 97.92 4.12 苯硝咪唑 1 90.87 4.72 98.21 4.20 10 101.90 2.21 103.30 3.76 0.04 95.24 4.68 96.11 4.71 塞克硝唑 0.4 94.90 2.32 96.53 2.55 4 99.83 3.50 103.57 1.95 0.04 89.21 4.73 94.38 2.57 替硝唑 0.4 93.13 3.22 94.90 2.76 4 99.97 2.61 103.47 3.33 0.1 94.47 1.06 95.33 1.09 羟基异丙硝唑 1 92.64 3.43 97.67 1.69 10 101.74 3.87 103.61 2.28 0.04 92.66 2.82 97.83 4.55 奥硝唑 0.4 99.00 1.41 100.72 3.87 4 100.75 4.52 103.15 2.41 0.01 96.53 3.38 98.26 3.44 异丙硝唑 0.1 96.71 3.73 98.78 1.11 1 98.64 4.59 99.94 2.36 表34 验证单位3验证水剂类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 目标化合物 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.50 2.43 81.32 1.45 4-硝基咪唑 0.4 91.16 3.89 97.16 1.21 4 86.82 4.30 94.68 4.40 0.04 85.57 3.22 90.91 2.52 2-甲硝咪唑 0.4 80.15 2.35 92.33 3.95 4 94.26 4.91 94.83 4.21 0.04 86.75 3.42 95.92 1.66 0.4 88.83 3.95 94.50 2.14 羟基甲硝唑 4 90.88 4.42 93.73 3.88 0.04 88.83 4.39 91.33 2.37 羟基二甲硝咪0.4 86.96 4.95 86.71 2.99 唑 4 93.50 4.72 93.61 3.32 0.04 86.57 3.45 97.59 1.60 甲硝唑 0.4 85.70 3.63 87.62 1.63 4 88.53 4.25 94.16 3.12 0.04 85.91 2.70 90.91 2.51 二甲硝咪唑 0.4 80.82 4.07 104.60 3.75 4 89.13 4.45 93.37 3.00 0.1 85.08 1.64 90.91 2.02 洛硝哒唑 1 84.94 3.79 94.91 2.21 10 91.86 4.74 97.49 4.44 0.04 81.32 2.52 91.33 1.58 特尼哒唑 0.4 86.65 4.70 88.96 2.88 4 85.45 3.46 96.78 2.19 0.1 86.75 3.75 96.76 1.13 氯甲硝咪唑 1 81.81 4.91 83.32 3.74 10 89.44 3.74 81.74 4.72 0.1 86.08 1.04 93.50 3.15 苯硝咪唑 1 86.49 1.81 80.57 3.25 10 92.74 4.79 93.42 4.11 0.04 85.91 3.50 104.68 2.86 塞克硝唑 0.4 96.08 3.94 100.97 2.45 4 93.75 4.62 96.41 3.53 0.04 85.82 3.37 95.50 2.55 替硝唑 0.4 90.08 2.96 90.76 3.01 4 87.39 3.53 93.53 3.63 0.1 89.25 1.03 96.25 3.95 羟基异丙硝唑 1 88.61 4.07 92.63 3.02 10 90.08 4.61 94.00 4.09 0.04 87.75 3.62 108.42 4.63 奥硝唑 0.4 87.71 4.96 103.72 3.77 4 96.25 3.10 96.97 2.46 0.01 85.08 3.28 88.95 3.03 异丙硝唑 0.1 89.75 4.45 87.40 2.49 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 1 93.80 3.18 97.42 3.70 表35 验证单位3验证香波类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 85.92 2.43 82.78 2.51 4-硝基咪唑 0.4 86.14 3.99 90.89 3.76 4 93.80 4.04 95.68 3.48 0.04 84.85 3.42 88.17 3.50 2-甲硝咪唑 0.4 89.90 2.03 91.64 2.45 4 90.08 3.99 94.72 1.80 0.04 86.00 2.32 87.74 3.33 羟基甲硝唑 0.4 86.09 2.43 88.45 2.23 4 87.37 1.97 94.01 2.78 0.04 84.44 3.11 89.82 3.17 羟基二甲硝咪0.4 85.56 2.10 86.09 2.77 唑 4 87.97 4.90 94.12 2.31 0.04 85.68 1.44 79.89 3.17 甲硝唑 0.4 86.80 2.92 90.57 3.57 4 89.66 4.88 95.42 4.24 0.04 85.68 1.05 81.95 3.42 二甲硝咪唑 0.4 86.22 1.39 93.58 4.02 4 86.01 4.00 96.60 2.86 0.1 86.92 1.27 88.93 2.79 洛硝哒唑 1 88.73 2.44 86.26 4.13 10 88.42 4.07 96.81 3.47 0.04 86.09 1.00 80.29 4.41 特尼哒唑 0.4 84.69 4.08 87.79 3.30 4 84.57 4.94 93.74 1.58 0.1 84.61 1.79 85.43 3.69 氯甲硝咪唑 1 85.71 8.96 86.99 3.94 10 96.60 2.58 98.71 4.36 0.1 85.43 2.63 90.07 3.61 苯硝咪唑 1 87.65 2.86 89.38 4.21 10 89.39 3.04 95.98 3.81 0.04 85.68 2.74 88.98 4.17 塞克硝唑 0.4 91.68 3.96 95.74 2.05 4 90.87 3.78 96.37 3.71 0.04 86.09 3.81 83.61 3.50 替硝唑 0.4 87.13 3.28 86.80 3.46 4 90.84 2.72 95.55 3.81 0.1 85.43 3.50 94.05 2.86 羟基异丙硝唑 1 86.99 1.61 83.96 4.17 10 90.98 2.14 93.44 3.78 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.04 85.51 2.72 93.54 3.43 奥硝唑 0.4 87.91 2.91 97.14 4.53 4 90.49 2.29 93.88 2.42 0.01 84.44 4.06 87.74 3.06 异丙硝唑 0.1 86.75 1.96 91.22 2.67 1 84.98 3.31 89.97 3.49 表36 验证单位3验证膏霜类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 86.01 2.63 88.94 3.42 0.4 90.48 2.89 94.88 2.77 4-硝基咪唑 4 97.15 1.22 98.11 2.61 0.04 93.53 3.00 97.29 3.46 2-甲硝咪唑 0.4 90.12 3.58 91.49 2.77 4 97.74 1.32 99.44 4.44 0.04 93.53 2.29 98.96 3.39 羟基甲硝唑 0.4 92.53 2.21 97.41 2.97 4 96.78 3.90 99.71 4.89 0.04 93.53 1.37 96.45 2.40 羟基二甲硝咪0.4 87.61 3.26 94.00 1.45 唑 4 96.76 3.37 98.36 4.49 0.04 89.78 2.51 94.37 3.53 甲硝唑 0.4 89.02 4.01 95.71 2.83 4 97.16 2.73 98.39 3.00 0.04 93.12 3.45 96.45 3.57 二甲硝咪唑 0.4 89.40 4.74 90.70 2.92 4 96.78 1.98 97.49 1.23 0.1 95.71 3.90 101.05 1.07 洛硝哒唑 1 90.77 4.29 94.60 3.73 10 96.64 4.26 98.87 4.63 0.04 90.20 1.45 99.79 3.52 特尼哒唑 0.4 92.49 3.89 94.16 2.83 4 95.49 4.77 97.93 3.86 0.1 91.87 1.14 93.87 1.10 氯甲硝咪唑 1 97.13 3.55 97.36 2.74 10 98.66 4.99 99.85 4.66 0.1 86.18 1.49 91.87 1.22 苯硝咪唑 1 94.62 4.59 97.56 4.53 10 98.43 3.38 100.01 3.28 0.04 93.12 2.40 96.03 3.42 塞克硝唑 0.4 93.78 2.98 94.92 3.09 4 96.08 4.65 98.41 2.73 替硝唑 0.04 86.44 3.50 88.11 3.52 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 0.4 89.11 4.15 90.27 2.86 4 96.19 3.89 98.52 3.02 0.1 90.02 3.96 97.88 1.07 羟基异丙硝唑 1 91.63 4.03 96.86 4.43 10 98.11 3.95 99.92 4.30 0.04 88.11 3.41 88.52 4.38 0.4 94.04 4.12 96.67 2.34 奥硝唑 4 96.00 3.90 99.07 3.64 0.01 88.52 4.09 90.20 4.10 异丙硝唑 0.1 94.04 1.07 97.21 1.13 1 94.49 3.07 99.54 4.00 表37 验证单位3验证散粉类空白化妆品添加硝基咪唑的回收率及精密度 添加浓度平均提取回收率RSD 平均方法回收RSD 目标化合物 (mg/kg) (%) (%) 率(%) (%) 0.04 87.92 3.91 90.82 3.05 4-硝基咪唑 0.4 96.15 4.09 102.21 1.48 4 98.73 3.63 101.06 2.16 0.04 87.83 3.71 95.09 3.80 2-甲硝咪唑 0.4 98.54 1.17 99.56 3.18 4 98.37 3.07 102.16 4.92 0.04 91.25 4.74 93.81 2.75 羟基甲硝唑 0.4 91.46 3.34 98.54 3.90 4 98.42 4.90 101.05 3.80 0.04 88.34 3.43 94.22 2.52 羟基二甲硝咪0.4 97.09 1.61 98.41 1.29 唑 4 97.85 4.55 101.55 3.58 0.04 93.37 3.41 99.77 3.30 甲硝唑 0.4 98.06 2.63 101.05 2.06 4 98.18 4.17 100.65 3.74 0.04 88.26 2.58 92.52 3.58 二甲硝咪唑 0.4 99.48 1.32 100.20 1.56 4 97.67 4.99 101.27 4.80 0.1 92.95 3.83 99.94 1.27 洛硝哒唑 1 89.93 3.69 96.65 2.69 10 96.98 1.02 97.55 4.05 0.04 89.54 3.32 94.66 3.84 特尼哒唑 0.4 99.34 2.84 99.69 4.61 4 99.19 4.94 101.26 4.94 0.1 93.46 3.70 97.90 1.49 氯甲硝咪唑 1 90.12 3.79 94.48 4.21 10 100.53 3.72 101.90 4.14 0.1 92.78 2.88 96.88 4.08 苯硝咪唑 1 89.90 4.67 97.16 4.16 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~ 时间就是金钱,效率就是生命~ 10 100.81 2.19 102.20 3.72 0.04 94.22 4.63 95.09 4.66 塞克硝唑 0.4 93.89 2.30 95.50 2.52 4 98.77 3.46 102.47 1.93 0.04 88.26 4.68 93.37 2.54 替硝唑 0.4 92.14 3.19 93.89 2.73 4 98.90 2.58 102.37 3.29 0.1 93.46 1.05 94.31 1.08 羟基异丙硝唑 1 91.65 3.39 96.63 1.67 10 100.66 3.83 102.51 2.26 0.04 91.67 2.79 96.79 4.50 奥硝唑 0.4 97.94 1.39 99.65 3.83 4 99.68 4.47 102.05 2.38 0.01 95.50 3.34 97.21 3.40 异丙硝唑 0.1 95.68 3.69 97.73 1.10 1 97.59 4.54 98.87 2.33 7.4 实际样品测定 三家单位各自从市场上分别购买了水剂类、膏霜类、散粉类和香波类化妆品各3份,严格按照本研究所建立的方法进行实际样品的检测,均未发现15种禁用硝基咪唑类抗生素的检出情况。 唯有惜时才能成功,唯有努力方可成就~
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