pcr 和凝胶电泳

pcr 和凝胶电泳 分子生物学技术 实验一、实验二 基因的PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测 1、实验目的 本实验通过学习用PCR扩增技术来获取特异性的基因DNA，以及扩增DNA的琼脂糖凝胶电泳检测技术，掌握有关的技术原理和实验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。 2、实验原理 2.1 特异性基因的PCR扩增: PCR扩增是指直接以待扩增的DNA为模板，加入特异性的一对引物、四种脱氧核糖核苷酸以及Tag DNA聚合酶等，进行DNA的合成反应。 2.2 琼脂糖电泳: DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子本身的大小和构型。DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 琼脂糖凝胶浓度 线形DNA的最佳分辨范围(bp) 0.5% 1,000,30,000 0.7% 800,12,000 1.0% 500,10,000 1.2% 400,7,000 1.5% 200,3,000 3、材料、试剂及器具 3.1 材料 DNA模板 3.2 试剂 4XdNTP，Taq 酶 buffer，一对引物，Taq DNA聚合酶，琼脂糖，0.5*TBE。 3.3 器具 1 分子生物学技术 PCR管，移液器，1.5ml Eppendorf管，PCR管架, Eppendorf管架，PCR 仪, 电泳仪; 紫外检测仪; 水平电泳槽; 一次性手套。 4、操作步骤 4.1特定基因DNA的扩增 1) 配模板DNA液 HO 15.3 μl 2 dNTP (10 mM ) 0.5 μl 10×Taq Buffer 2 μl 引物1 (10 μM ) 0.5 μl 引物2 (10 μM ) 0.5 μl Template 1 ul Taq DNA polymerase 0.2 μl ========================== Total 20 μl 2) 加入1 ul的模板DNA。对照组的模板为ddHO。 2 3) 进行PCR反应。按照下列反应条件进行: 预变性: 95 ? 5 min 变 性: 95 ? ,s 退火反应: (Tm-5)? ,s 引物延伸: 72 ? 1 kb/min, 循环数: 30个循环 补平反应: 72 ? 5 min。 4.2琼脂糖电泳 1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子; 2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液(一般30ml,60ml,100ml); 3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻，冷却至60?左右，在胶液内加入适量的溴化乙锭终浓度为0.5ug/ml，轻轻摇匀，倒入电泳槽中，待其凝固; 4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内; 5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去; 6.在DNA样品中加入1×体积的载样缓冲液(loading buffer)，混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内; 2 分子生物学技术 7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。一般120V电压，电泳20,40min即可; 8. 根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳; 9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 Marker比较被扩增产物的大小。 5、注意事项 1. 特定基因DNA PCR扩增的时候，由于各种成分的含量相对小，因而应先配成母液再分装。 2. 试验过程小心谨慎,不允许因为实验操作带来的失败结果。 3. 试验仪器的使用,试验过程详细讲解。 4. 进入实验室后保持实验室的安静和整洁。 5. 写出实验报告(格式:实验 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 目、实验内容、实验方法、实验结果、讨论与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 )。 6. 实验结束后分组按组，搞好实验室卫生。 实验三 质粒DNA的分离提取、鉴定 一、 实验目的 了解基因工程操作中运载基因的载体，掌握最常用的提取质粒DNA的方法，并且能够进行鉴定。 二、 实验原理 碱变性抽提质粒DNA是根据质粒DNA与染色体DNA的变性与复性差异而达到分离的目的。利用溶菌酶、强碱(NaOH)及表面活性剂(SDS)使细胞破壁、膜，释放出胞内染色体DNA、质粒DNA及其它物质。通过一系列的纯化过程:高盐除去核DNA，苯酚-氯仿抽提变性蛋白和脂类，然后用乙醇(或异丙醇)沉淀出质粒DNA和RNA等，RNA经RNase消化，得到质粒DNA。这种质粒DNA可用作基因工程的载体，更广泛地用于重组子的鉴定。通过琼脂糖凝胶电泳，可以初步鉴定抽提质粒DNA的含量、质粒DNA的完整性。 三、实验材料 大肠杆菌摇菌后的菌液 3 分子生物学技术 四、实验仪器、器皿及试剂 仪器、器皿(略) 试剂: 1、溶液1:50mmol/l 葡萄糖 10mmol/l EDTA-Na 2 25mmol/l Tris-HCl(pH8.0) 4mmol/l 溶菌酶 2、溶液2:200mmol/l NaOH 1% SDS 3、溶液3:5mol/lKAc 60ml 冰乙酸 11.5ml ddHO 28.5ml 2 4、苯酚-氯仿 5、异丙醇(或95%乙醇，100%乙醇) 6、70%乙醇 7、TE(pH8.0):10mmol/l Tris-HCl(pH8.0) 1mM EDTA-Na2 8、RNase 1mg/ml Amp 100μg/ml 五、实验步骤 1(挑取一单菌落的E.coli菌种接种到含Amp100μg/ml的LB液体培养基 中，37?震荡培养过夜。 2(吸1.4ml菌液至Eppendorf管中，在高速台式离心机上4000g离心2min， 倒去培养基。 3(重复1次，尽可能倒出培养基并将Eppendorf管倒置于吸水纸上，以吸 干管壁上残留的培养基，收集细菌。 4(将细菌悬于500μl冰冷的溶液1中，于离心机上5000g离心2min。 5(倒去溶液1，再悬于200μl冰冷的溶液1中，重悬菌液。 6(加入300μl新配制的溶液2，冰浴5min。 7(加入300μl冰冷的溶液3，中和，轻轻震荡10sec，置冰浴5min。 4 分子生物学技术 8(于离心机上，8000g离心5min。 9(取600μl上清转移至一新管中。 10(加入等体积的饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提1次，8000g 离心5min取上清液，转移至一新管。 11(加入1/10体积NaAc溶液(3mol/l)，再加入2倍体积的无水乙醇 ，, 20?沉淀20min。 12(10000g离心10min。 13(倒去无水乙醇，用1ml 70%乙醇洗涤沉淀，8000g离心5min。 14(开盖、置室温自然干燥。悬浮至40μl去离子水或TE中。 15(配制浓度为1%的琼脂糖凝胶，电泳。 六、注意事项 1(所用器具必须严格清洗，最后要用重蒸水冲洗3次，凡可以进行灭菌的 试剂与器具都要经过高压蒸汽灭菌，防止其他杂质或酶对 DNA的降解， 对 Eppendorf管、Tip与非玻璃离心管等只能湿热消毒，这些塑料制品 烤干时，温度不能超过80?，以免熔化，因此，一般用70?烘烤。 2(细菌培养容器最好用三角烧瓶，其容量至少应为培养液的四倍，从而保 证氧气的供应。 3(在碱裂解提取质粒的方法中，关键步骤之一是加入NaAc的时机，这一 步决定了DNA变性与复性的时间。既要使试剂与染色体DNA充分作用 使之变性，又要使染色体DNA不裂解成小片段，才能与质粒DNA相分 离，这就要求试剂与溶液充分摇匀。 4(加入乙醇沉淀DNA时，要把离心管加盖颠倒摇动4-5次，使水相与乙 醇混匀。 5(乙醇沉淀后，乙醇应尽量去除干净，否则既不利于DNA的溶解，又对 后面的操作有影响。 5 分子生物学技术 下面是诗情画意的句子欣赏,不需要的朋友可以编辑删除!! 谢谢!!!!! 1. 染火枫林，琼壶歌月，长歌倚楼。岁岁年年，花前月下，一尊芳酒。水落红莲，唯闻玉磬，但此情依旧。 2. 玉竹曾记凤凰游，人不见，水空流。 6 分子生物学技术 3. 他微笑着，在岁月的流失中毁掉自己。 4. 还能不动声色饮茶，踏碎这一场，盛世烟花。 5. 红尘嚣 浮华一世转瞬空。 6. 我不是我 你转身一走苏州里的不是我 。 7. 几段唏嘘几世悲欢 可笑我命由我不由天。 8. 经流年 梦回曲水边 看烟花绽出月圆。 9. 人生在世，恍若白驹过膝，忽然而已。然，我长活一世，却能记住你说的每一话。 10. 雾散，梦醒，我终于看见真实，那是千帆过尽的沉寂。 11. 纸张有些破旧，有些模糊。可每一笔勾勒，每一抹痕迹，似乎都记载着跨越千年万载的思念。 12. 生生的两端，我们彼此站成了岸 。 13. 缘聚缘散缘如水，背负万丈尘寰，只为一句，等待下一次相逢。 14. 握住苍老，禁锢了时空，一下子到了地老天荒 15. 人永远看不破的镜花水月，不过我指间烟云 世间千年,如我一瞬。 16. 相逢一醉是前缘，风雨散，飘然何处。 17. 虚幻大千两茫茫，一邂逅，终难忘。相逢主人留一笑，不相识，又何妨。 18. 天下风云出我辈,一入江湖岁月催;皇图霸业谈笑间,不胜人生一场醉。 19. 得即高歌失即休，多愁多恨亦悠悠，今朝有酒今朝醉，明日愁来明日愁。 20. 直道相思了无益，未妨惆怅是清狂。 21. 看那天地日月，恒静无言;青山长河，世代绵延;就像在我心中，你从未离去，也从未改变。 22. 就这样吧，从此山水不相逢。 23. 人天自两空，何相忘，何笑何惊人。 24. 既不回头,何必不忘。 既然无缘,何须誓言。 今日种种,似水无痕。 明夕何夕,君已陌路。 25. 有缘相遇,无缘相聚,天涯海角,但愿相忆。有幸相知,无幸相守,苍海明月,天长地久。 26. 相见得恨晚，相爱的太慢，进退让我两难。缘过了远分，缘过了聚散，是否回头就能够上岸 27. 天凉了,凉尽了天荒 地老了,人间的沧桑，爱哭了,这么难舍 心都空了,想放不能放。天亮了,照亮了泪光 泪干了,枕边地彷徨 28. 心微动奈何情己远.物也非,人也非,事事非,往日不可追 7 分子生物学技术 29. 渺渺时空,茫茫人海,与君相遇,莫失莫忘。 30. 如果换我先开口，日子是否还一样细水长流 31. 也许是前世的姻 也许是来生的缘 错在今生相见 徒增一段无果的恩怨 32. 人道海水深，不抵相思半。海水尚有涯，相思渺无畔。 33. 醉眼看别人成双作对， 34. 无人处暗弹相思泪。 35. 终于为那一身江南烟雨覆了天下，容华谢后，不过一场，山河永寂。 36. 千秋功名，一世葬你，玲珑社稷，可笑却无君王命。 37. 凤凰台上凤凰游，负约而去，一夜苦等，从此江南江北，万里哀哭。 38. 嗟叹红颜泪、英雄殁，人世苦多。山河永寂、怎堪欢颜。 39. 风华是一指流砂，苍老是一段年华。 40. 夜雨染成天水碧。有些人不需要姿态，也能成就一场惊鸿。 41. 你要记得，紫檀未灭，我亦未去。 42. 谁在岁月里长长叹息。 43. 汉霄苍茫，牵住繁华哀伤，弯眉间，命中注定，成为过往。 44. 红尘初妆，山河无疆。 最初的面庞，碾碎梦魇无常，命格无双。 45. 江南风骨，天水成碧，天教心愿与身违。 46. 山河拱手，为君一笑 。 47. 如是颠簸生世亦无悔。 48. 荏苒岁月覆盖的过往，白驹过隙，匆匆的铸成一抹哀伤。 49. 那被岁月覆盖的花开，一切白驹过隙成为空白。 50. 褪尽风华，我依然在彼岸守护你。 51. 那些繁华哀伤终成过往， 52. 请不要失望，平凡是为了最美的荡气回肠。 53. 你的路途，从此不见我的苍老。 54. 长歌当哭，为那些无法兑现的诺言，为生命中最深的爱恋，终散作云烟。 55. 随你走在天际，看繁花满地。 56. 我自是年少，韶华倾负。 57. 你要记得，那年那月，垂柳紫陌洛城东。 58. 苍茫大地一剑尽挽破，何处繁华笙歌落。 59. 寄君一曲，不问曲终人聚散。 8 分子生物学技术 60. 谁将烟焚散，散了纵横的牵绊;听弦断，断那三千痴缠。61. 清风湿润，茶烟轻扬。重温旧梦，故人已去。 1. 水滴虽小，却可以折射出太阳的光彩。 2. 梦落三千尺愁深似海，繁华遗落散满地。记忆轮回里，我举杯，在奈何桥上满口饮尽。 3. 人生没有轮回，就像花，人活一世，花开一季、人生如花，花似梦。 4. 生活的苦涩和美好给了我对人生的领悟，如今，千山万水走遍，我发现自己再也不愿离开文学的蓝天，再也不愿离开那个让我痴迷的文学舞台。 5. 在烟雨红尘中，轻拾季节花瓣飘落的音符，组成美妙曲符，然后，倚在时光的路口，撷一缕明媚，许自己一份唯美的怀想，与快乐、浪漫相约，闲淡清欢。 6. 未经历坎坷泥泞的艰难，哪能知道阳光大道的可贵;未经历风雪交加的黑夜，哪能体会风和日丽的可爱;未经历挫折和磨难的考验，怎能体会到胜利和成功的喜悦。挫折，想说恨你不容易 7. 燕子斜飞人家，炊烟零乱，柳絮飘飘，弥漫了山里人家。 8. 这样知解自己的生命即使是心灵空荡我也无所畏惧 9. 中秋之曰不可能岁月明如水，偶然的暗淡，恰似镜子的背后之面，有所缺憾，人生才会是积翠如云的空濛山色。 10. 在经受了失败和挫折后，我学会了坚韧;在遭受到误解和委屈时，我学会了宽容;在经历了失落和离别后，我懂得了珍惜。 11. 曾经盛开的蔷薇，虽经风吹雨打，但和着微风，还有屡屡暗香飘过。 12. 我只希望，不管三年，五年，或是十年以后。某一天，我们相遇，还能相认，你大喊一声，我想死你了。那一刻，我定会泪流满面。我们是朋友，永远的朋友。 13. 最爱的未必适合在一起，相爱是让彼此做自己。 14. 时间断想，时间不断。流逝，像是水，可弯可直，像是风，可柔可刚。 15. 如果说人生是一望无际的大海，那么挫折则是一个骤然翻起的浪花。如果说人生是湛蓝的天空，那么失意则是一朵飘浮的淡淡的白云。 16. 云层雾气，缠着几户古木人家，清新自然，如诗如画。 17. 我喜欢你，只是一个现在;我爱你，却是一整个未来。 18. 夜雨染成天水碧。有些人不需要姿态，也能成就一场惊鸿。 19. 再大的风不会永不停息，在浓得雾不会经久不散，风息雾散仍是阳光灿烂。 20. 牵着时光的衣襟，走进芳菲五月，轻轻地将春光拥入怀中，于一抹素白流韵中，弹奏一曲江南的婉韵，把盏，将似水流年浅斟轻酌。 9 分子生物学技术 21. 我穿越轮回而来，在奈何桥相思盈袖，凄然守候。莫落泪，纵若水落三千尺东流，云动八万里西散，我依旧会化身城碟，翩翩起舞跨过奈何桥与你相会。 22. 如果我爱你，我就会理解你，通过你的眼睛去看世界。我能理解你，是因为我能在你身上看到我自己，在我身上也看到了你。 23. 似乎风在转向，送走了缓缓袭来的味道，又将刚刚溜走的风，静静地换回来。 24. 生活告诉我，童话只不过是小孩子幻想的游戏。 25. 人生就像穿着一件长满虱子的华丽睡袍，外表美丽，而内心却充满了干啊和恐慌。 26. 必须用另一种真实方式来代替时光里已经逝去的东西 27. 岁月，依一抹浅香于心间，看年华向晚，闻花香送暖。给时光一个浅浅的回眸;给自己一份微笑从容。沉淀，馨香;念起，温暖。 28. 人生的起起落落间，总会有一些情怀需要安静回味;总会有一些伤痛需要独自体会;总会有一段路需要一个人走;总会有一些事需要坦然面对。 29. 疏影横斜水清浅，暗香浮动月黄昏。 30. 心若没有栖息的地方，到哪里都是在流浪。 31. 今后，我会从尘世中的纷争走出，远离喧嚣，把岁月打磨成诗，让自己的文字静如睡莲，动如涟漪，无论何时都能描绘成美丽的水墨丹青。 32. 全是理智的心，恰如一柄全是锋刃的刀，它叫使用它的人手上流血。——泰戈尔 33. 我们都不擅长表达，以至于我们习惯了揣测。去肯定，去否定，反反复复，后来我们就变得敏感而脆弱。 34. 心心念念的往事、曾经深爱过的人、年少琐碎的过往，它们就像缠绕之间的一阵风，来的缱绻，去的时候让人来不及挽留。 35. 如果在乎的没有那么多，想要的没有那么多，生活便会简单得很多。 36. 在极度的喧嚣中，独自微笑独自平静是憾，落花是美的，淡淡的书香，淡淡的花香，淡淡的馨香。 37. 曾芬芳过的那片土地，幸福的花儿虽早已凋谢，只留下风雨吹打的痕迹。 38. 辗转半世红尘，缘去缘灭，空留满池伤痕。雨花迟落，霜雪纷飞，池水泛冰，已益处月的苍凉。 39. 一条古道，一匹瘦马，一个人影，被落日的余晖缓缓拉长。 40. 我们人生的大幕才刚刚拉启:刀光剑影，英雄本色;是非恩怨，儿女情常。 41. 我们要去流浪，虔诚地定格住每一寸记忆;我们要去成长，潇洒地忘却掉每一条纹路。 10 分子生物学技术 42. 嗅着昨日芬芳遗留的气息，寻寻觅觅，仍不见踪迹。邂逅了一场烟火，终还是那般凄凉。迷失的夜晚，点缀了无数颗孤单的星星，不知道那是否有属于我的一颗。 43. 像这样轻飘飘的日子和平平静静的心情，也算是生活中的一种享受吧。 44. 想着远方的你，绝美的笑容，只为你一个人展露，那一泓羞涩的笑容，悄悄。 45. 细碎的声音，如羞涩的蓓蕾，夜暮花影，轻浅六月，寂寂流年，拢一阙清绝，归隐在宋词里。 46. 夕阳沉落在海水深处却不见浪花翻滚，淡淡的只留下一个让人沉思的背影。落雨是晚风中的殇，带着晨曦的翘首滑落最后的伤痕!雨尽含羞，淡抹嫣红! 47. 无影击碎了泪水，岁月在那个光年划下的痕迹原来是一刀一刀地刻在了我的心上。 48. 我收拢了梦想的翅膀，我停却了信念的脚步，却再也作不回曾经的那一天。 49. 我宁愿用尽此生，为那些尘世的硝烟尘雾，潸然泪下，为菩提落花，为世间繁华。 50. 阳光依旧在，我们穿越光影，沿着历史的足迹继续前行，创造美好生活，走向美丽明天! 51. 洋溢着春日的微笑，坚强了外表，却虚伪了内心，脆弱了，是不敢触及的。 52. 也许，就在那一刻里，梦境还在，柔情亦在。 53. 一个人的戏，自己独自导演，诠释精彩。在剧中尽情释放着自己的喜怒哀乐。笑得凄然绝美;哭得肝肠寸断。 54. 但生命中被你刻上痕迹的那些岁月无法抹去。 55. 往事悠然一笑间，不必空忧。我们一路走来，只是为了告别往事，走入下一段风景。倘若让忧伤填补了生命的空白，就真的是亵渎了生命。 56. 人生只有回不去的过去，没有过不去的当下。上帝只会给你过得去的坎，再不好过的生活，再难过的坎，咬咬牙，也就过去了。 57. 我一直以为山是水的故事，云是风的故事，你是我的故事。可是却不知道，我是不是你的故事。 58. 生命并不是一场竞赛，而是一段旅程。如果你在途中一直都试图给他人留下深刻印象，超过别人，那你就浪费了这段旅程。 59. 比如新的朋友新的感情新的思绪我想要知道的 60. 我以为我已经将爱情忘记，将你忘记。可是有一天，我听到一首歌，我的眼泪就出来了。因为这首歌，我们曾一起听过。 61. 忍花开花落，云卷云舒，品人生似棋。 11 分子生物学技术 62. 我离开你这一种信仰又会以怎样全新的姿势去面临更深沉的挑战 63. 人生路，路迢迢，谁道自古英雄多寂寥，若一朝，看透了，一身清风挣多少。 64. 只有夕阳站在那里。灵魂像无数的雪花飘过，光明闪烁，渐渐清醒。 65. 终于为那一身江南烟雨覆了天下，容华谢后，不过一场，山河永寂。 66. 荏苒岁月覆盖的过往，白驹过隙，匆匆的铸成一抹哀伤。 67. 忘川水不枯，记忆不散;奈何桥不断，思卿不弃;今夕，彼岸花又放，佳期约又到，我轮回践约而来，等你归来。红尘路上，伊人在否? 68. 十年生死两茫茫，不思量，自难忘，千里孤坟，无处话凄凉，纵使相逢应不识，尘满面，鬓如霜。 69. 天空飘过一朵云，有时是晴，有时是阴。但白昼终归还是白昼。 70. 我知道回不去，但还是会想念会回忆会心疼到无法自拔。 71. 天空不曾留下鸟的痕迹，但是我已飞过、在大地上画满窗子，让所有习惯黑暗的眼睛都习惯光明。 72. 人生首先要是望远镜，看远;再就是显微镜，看细;接下来是放大镜，看透;其次是太阳镜，看淡;最后是哈哈镜，笑看生活。 73. 我不是公主，也不会有等待救赎我的王子。 12