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bca蛋白浓度测定bca蛋白浓度测定 化学名称:2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠 CAS号:979-88-4 分子式:C20H10N2Na2O4 ? xH2O 分子量:388.28 化学性质:淡黄色粉末、有吸湿性,溶解于水或者乙醇。 质量标准 外观Appearance 淡黄色粉末 红外光谱鉴别Infrared spectrometry< 符合 纯度Purity ?98.0% (HPLC) 水分Moistrue ?4% 铁Iron(Fe) <5PPM 重金属Heavy Metals <5PPM ...

bca蛋白浓度测定
bca蛋白浓度测定 化学名称:2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠 CAS号:979-88-4 分子式:C20H10N2Na2O4 ? xH2O 分子量:388.28 化学性质:淡黄色粉末、有吸湿性,溶解于水或者乙醇。 质量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 外观Appearance 淡黄色粉末 红外光谱鉴别Infrared spectrometry< 符合 纯度Purity ?98.0% (HPLC) 水分Moistrue ?4% 铁Iron(Fe) <5PPM 重金属Heavy Metals <5PPM 灼烧残渣Residue On Ignition ?0.1% 水溶性试验Solubility 500mg/ml水 摩尔吸收系数Molar Absorptivity 3.74*104(氧化产物) 应用范围 该复合物在562 nm处有最大吸光值,并与蛋白浓度成正比。以BSA为标准品求得标准曲线,进而计算未知蛋白样品的浓度,故BCA常用于蛋白定量 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 ,是蛋白定量试剂的重要原料。应用 BCA法是近来广为应用的蛋白定量 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。其原理与Lowery法蛋白定量相似,即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物,在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比,据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比,BCA蛋白测定方法灵敏度高,操作简单,试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳,并且受干扰物质影响小。与Bradford法相比,BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。 器材 1. 7220型分光光度计 2. 比色杯 3. 恒温水浴箱 4. 中试管7支 5. 枪式移液管 试剂 1. 试剂A: 1%BCA二钠盐 2%无水碳酸钠 0.16%酒石酸钠 0.4%氢氧化钠 0.95%碳酸氢钠混合调PH值至11.25。 2. 试剂B:4%硫酸铜。 3. CA工作液:试剂A100ml+试剂B2ml混合。 4. 蛋白质标准液:用结晶牛血清白蛋白根据其纯度用生理盐水配制成1~5mg/ml的蛋白质标准液。(纯度可经凯氏定氮法测定蛋白质含量而确定) 5. 待测样品:用双缩脲测定法的样品稀释而成。 注意事项 1) 使用BCA蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量。 2) 低温或长期保存,若发现BCA试剂A或者试剂B有沉淀发生。请37ºC温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应丢弃,避免对实验结果造成影响。 3) 实验操作规范,提高上样量的精确度。 4) 每次测定都需做相应的标准曲线,因为显色反应与温度和时间的变化有关,精准的蛋白定量宜每次都做标准曲线。 操作方法 一、配制标准品和工作液 1. 配制BSA标准品体系 注:标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS进行稀释。 BSA标准品体系配制可参考 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 一。 表一BSA标准品体系配制(微孔板检测,线性范围20-2000μg/ml)* 管号 稀释液体积(µL) BSA来源及体积(µL) BSA终浓度(µL/mL) 2000 A 0 300的原液 1500 B 125 375的原液 1000 C 325 325的原液 750 D 175 175的B管稀释液 500 E 325 325的C管稀释液 250 F 325 325的E管稀释液 125 G 325 325的F管稀释液 25 H 400 100的G管稀释液 I 400 0 0=空白 *如用比色皿检测,每管需加100μl标准品,按3个重复计算,每个浓度至少需配制300μl。 加强试管协议的稀释 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 (活性范围=5-250µg/mL)可参考表二 表二 管号 稀释液体积(µL) BSA来源及体积(µL) BSA终浓度(µL/mL) 250 A 700 100的原液 125 B 400 400的A管稀释液 50 C 450 300的B管稀释液 25 D 400 400的C管稀释液 5 E 400 100的D管稀释液 F 400 0 0=空白 2. 配制BCA工作液 1) 计算所需要的总BCA工作液体积。 总BCA工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA工作液 注:比色皿检测时每个样品加2.0ml BCA工作液,微孔板检测每个样品加200μl BCA工作液。 2) 配制BCA工作液:50体积的BCA试剂A中加入1体积的BCA试剂B(A:B=50:1) ,充分混匀。 注:BCA试剂B加入BCA试剂A中后,迅速浑浊,通过混匀后立即变澄清。BCA工作液装入密封容器内,室温条件24h稳定。 二、检测方法 1. 比色皿检测方法(样品:BCA工作液=1:20) 1) 各取100μl标准品和待测样品加入到反应管中。 2) 每管加入2.0ml BCA工作液,混匀。37?孵育30min。 注意:也可室温孵育2h,或者60?孵育30min。BCA检测蛋白浓度,延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限,以及降低工作线性范围。若蛋白浓度很低,可在较高温度孵育或者适当延长孵育时间。 3) 冷却到室温。在分光光度计上进行检测,设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在10分钟内对所有样品读数。 注意:由于BCA反应达不到真正的反应终点,即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是,由于室温下生色比率相当低,因此若是10min内能对所有的样本进行562nm吸光度的测试,不会导致明显错误。 4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。 2. 微孔板检测方法(样品:BCA工作液=1:8) 1) 各取25μl标准品和待测样品加入到微孔板中。 注:样品与工作液比例为1:8,若样品有限,可使用10μl标准品和待检测样品进行检测(即1:20),这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。 2) 每孔加入200μl BCA工作液,振荡30s充分混匀。盖上微孔板,37?孵育30min。 3) 冷却到室温,在酶标仪上的540,595nm波长范围处检测吸光度,其中562nm波长为最佳。 注意:a)由于酶标板的光径比比色皿短,使得酶标板检测需要更好的样品:BCA工作比率来获得相同的检测灵敏度。若使用高于562nm的检测波长,建议延长孵育时间到2h。b)延长孵育时间或者提高样品:BCA工作比会增高每个孔的OD562nm净值,并且降低检测下限和工作线性范围。 4) 根据BSA标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD值即最终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度ug/ml;Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。 附录表:BCA蛋白浓度测定的兼容性耐受浓度 Sodium bicarbonate 100 mM Sodium phosphate 25 mM 2-Mercaptoethanol 0.01% Glycercol (pure) 10% Glycine-HCl, pH 2.8 100 mM HEPES 100 mM Hydrochloric acid 100 mM Leupeptin 10 mg/L Nickel chloride (in TBS, pH8.0) 10 mM Nonidet P-40 (NP-40) 5% (w/v) Octyl β –glucoside 5% (w/v) Potassium thiocyanate 3.0 M SDS 5% Sodium acetate, pH 4.8 200 mM Sodium azide 0.20% Sodium hydroxide 100 mM Sucrose 40% Triton X-100 5% Triton X-114, X-305,X-405 1% Tween-20, Tween-60, Tween-80 5% Zwittergent 1% ACES, pH 7.8 25 mM Acetone 10% Acetonitrile 10% Ammonium sulfate 1.5 mM Aprotinin 10 mg/L Bicine, pH 8.4 20 Mm Bis-Tris, pH 6.5 33 mM Borate, pH 8.5 50 mM Brij-35 5% Brij-52 1% Brij-56, Brij-58 1% BugBuster protein Extraction Reagent (Cat. No. 70584) no interference (undiluted) Calcium chloride (in TBS, pH 8.0) 10 mM CelLytic B Reagent no interference (undiluted) Cesium bicarbonate 100 mM CHAPS 5% Cobalt chloride (in TBS, pH 8.0) 0.8 mM CytoBuster Protein Extraction Reagent (Cat. No. 71009) no interference (undiluted) Deoxycholic acid 5% Dithioerythritol (DTE) 1 mM Dithiothreitol (DTT) 1 mM DMF 10% DMSO 10% EDTA 10 mM EPPS, pH 8.0 100 mM Ethanol 10% Ferric chloride (in TBS, pH 8.0) 10 mM Glucose 10 mM Glycerol 10% Guanidine-HCl 4 M Imidazole, pH 7.0 50 mM MES, PH6.1 100mM Methanol 10% MOPS, pH7.2 100mM N-Acetyglucosamine(10mM)in PBS, pH7.2 10mM Octyl β-thioglucpyranoside 5% PIPES, pH6.8 100mM PMSF 1 mM PopCulture Reagent (Cat. No. 71092) no interference (undiluted) Reportasol Extraction Buffer (Cat. No. 70909) no interference (undiluted) Sodium chloride 1 M Sodium citrate, pH 4.8 or pH 6.4 200 mM Sodium ortho-vanadate in PBS, pH7.2 1mM Span 20 1% TBS (150 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl, pH 8.0) no interference (undiluted) Thimerosal 0.01% TLCK 0.1mg/L TPCK 0.1mg/L Tricine, pH 8.0 25 mM Triethanolamine, pH 7.8 25 mM Tris 250 mM Tris(hydroxypropyl)phosphine (THP) 1 mM Urea 3M Zinc chloride (in TBS, pH 8.0) 10 mM
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