【doc】某些革兰氏阴性细菌激活补体的新途径
某些革兰氏阴性细菌激活补体的新途径
某些革兰氏阴性细菌激活补体的新途径 黄秀琴魏青王鸿
(华束师范大学生物系,上海)
擒要巳被公认的补休系统激活途径有两条:一条是以抗原抗体复台物为"激活剂"
激活c.蚵
经典途径,另一条是不依赖抗体直接激话C,的替代选径.吊朴体对7种革兰氏阴性
细菌做藩菌试验,
发骣E,~.ollB,.roeKgai~可不依赖特异性抗体而巅活补体系统的经典磕径,这是又
一条补括
系统的激话选径.
关键词扑体系统;经典途径;替代途径 补体(complement)是人和动物血清中的一 组看1r吾白质成努:一矗芒:..
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C,,其中C由三个亚单位cl,Cn和C.组 成.一般情况下,补体在体液中呈无活性状态, 当受到某种"激活剂的作用后,补体按一定秩 序活化,发挥出一系列的生物学活性. 已被公认的补体系统的激活途径有两条, 一
条是以抗原抗体的复合物为"激活剂"微活 C【,然后依提激活c.1Cz,CI,chc',C,,C日,C9的 经典途径(classicpathway),另一条是以细菌 脂多糖,酵母多糖,菊糖等物质为"激活剂越过 C,C.;直接激活岛而启动的替代途径(.ahe一 ~nativepathway)o前者依赖于特异性抗体的
存在,后者不婊赖抗体而发挥作用. 近年来,LoosCooper等啦又发现了一条 新的补体系统激活途径,即某些微生物可不依 赖特异性抗佑晦存在而激活扑体系统的经典途 径.这—发现,对评述机体天然防御机能韵某 些物质的病理生理作用,将赋予新的内容和新 的意义.
我们用补体对7种革兰氏阴性菌做溶菌试 验,发现E.~oliB,E.~ollKngal可不嵌
赖特异性抗体而激活补体系统的经典途径.
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
和方法
(一)材料
1.革兰氏阴性细菌:E.~oliB,E.~oli 0lll,E.coliKl2gal+E.coilK【2gal一,假单 胞菌201(Pseudomonas201),假单胞菌301 (Pseudomonas301),变形杆菌(P,oteuOo以 上细菌都取之于华东师范大学生物系微生物组 实验室.
2.补体:自制冷冻千燥豚鼠补体,使用时 用生理盐水以1:10稀释.
il0mmo1]LE(A补体:
1)l00mmol/LEGTA螯台溶液:使
EGTA溶解在普通盐水中(每毫升水中加人 lmgNaG'1),然后把混合液加热到60~C,再加 5NNaOH一直到EGTA谘解为止,最后用 lNHCl调回eH到7.4,,用普通盐水定好体 积后放置于4"C.
z)lommot./LEGTA补体:9.1ml1OO mmol/LEGTA燕合液加到lml补体中,即
为10mmoLEGTA补体日
(;方法
1.把以上细菌分别接种在肉汤培养液中, 培养4--6小时o
2.在无菌试管中,加人0.5mi稀释补体, O.5ml生理盐水,0.5ml细菌菌液(每一种菌 重复2支试管)做溶菌试验.并分别做好不加补 体的对照,即在无菌试管中,加人lml生理盐 水,0.5ml细菌菌液(每一种菌重复2支试 管)o
3.对溶菌混合液进行平板计数,计算其溶 菌率(重复5次,取其平均值).
4.对能产生溶菌现象的细菌,用lOmmo!/L EGTA补体处理,进一步做溶菌试验(做法同 2).
结果
(一)补体直接作用下细菌的溶菌性 在没有抗体存在的情况下,细菌中加入补 体后,重复5次,结果均在7种细菌中,有2种 藉产生了溶藏现象(见表l,图1). (=)EcoliB,巨eoliK】谭al+的溶菌
盎
在补体的直接作用下,E.coliB,E.coil-
Kgal的溶菌率分别为99.83届和94.2l珏 (见表2).
襄l补体童接作用下鲴一的溶一性 -."e-c~liKugal+ !.".ttEcoliK2ga卜但菌z.粗菌.变形杆譬
如补体细菌十l+I一一l一}一未加朴体鲴荫 +产生溶菌现象'一束产生藩萄现最
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.~oliK1gal+的形志 加^扑体和未抽^补体的E.coli8,置
coliB未加补体的3)点.col~K_:gal~未加补体的 ~oli$加补体的(溶菌)')矗.coliKlgl1加朴体的(溶菌) 亵2EcotiB,EcotiKL:g^l+的浩一事
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EcoliB99.9599.7299.9399.9299.6599.83
E.coiiKli菩a97.259I.I794.7396.239l6994.2I
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(三)10~mc|/LEGTA季卜体直接作用
于细菌的情况
在E.~oliB,E.coliK12gal中加人l0
mmol/LEGTA补体,都不能产生溶菌现象(见 图2加^10mmol~LEGTA扑体的昌.coilB 和coilK12gal
1-五.coliB2.日coilKItgal 图2).
讨论
1.从以上结果可以看出,在没有抗体存在
的情况下E.coliB,E.coliKl2gal'可激活补
体,产生溶菌反应,且溶菌率很高o
2.EGTA为一种螯台剂,能螯台血清中的
ca",由于Ct的激活需要ca"的存在,因此
在补体中加入EGTA能阻断C-的激活,从而
关闭经典途径,而替代途径则不能.本实验
在补体中加入EGTA后不能产生溶菌现象,说
明.coliB和.~oliKl2ga1激活的朴体系
统为不依赖抗体的经典途径
3.不依赖特异性抗体激活补体系统的经典
途径的发现,对我们研究机体的天然防御机能
有着新的意义.据撮近文献报道,除某些细
菌外,病毒,支原体,原生动物等多种微生物表
面成分都能与C—a结合而启动朴体系统,这说 明在病原馓生物感染早期,就可抑制,中和,消
除致病因子,无疑朴体具有天然的防御机能.
参考文献
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4.a4sFet.y40:,47,1980 侵袭性大肠杆菌艾希氏菌新血清型o-n:H一的检出 郑目槐谢一俊
(福建省卫生防疫站,播州)
柳潮长林伙悌
(秒县卫生防疫站,抄县)
摘要1988年3月和4月,在沙县和福州市由腹泻患儿和健康儿童粪便标本分离到
肠侵袭性大肠
艾希氏菌新血清型O川:H一两株.该菌型尚未见报道.其O抗原与痢疾志贺氏菌7
型相关,$ercny试
验阳性,井台有I40Md侵袭性质粒.
关键调肠侵袭性大肠艾希氏菌;新血清型;O.:H-- 肠侵袭性大肠艾希氏菌(EIEC)的传染途
径,对人系经口感染后侵入大肠粘膜上皮细胞, 并在此生长繁殖,造成肠壁溃疡,出现血,粘液 本文承蒙我站于基庶主任医师审攘指导和中国兽药监 察所协功0抗原鉴定,还有陈光华,曾凝棒和陈雏瑾等 同志参加部分试验,特表意谢.
浙公网安备 33021202002483