用液膜法从黄连中提取黄连素的研究

用液膜法从黄连中提取黄连素的研究 第25卷第4期成都大学(自然科学版) 2006年12月JournalofChengduUniversity(NaturalScienceEdition) Vo1.25No.4 Dec.2oo6 文章编号:1004-5422(2006)04-0260-03 用液膜法从黄连中提取黄连素的研究 王大杰.郑毅,江红梅,詹君,向泉桔 (成都大学生物产业学院,四川成都610106) 摘要:研究了用液膜法从黄连水浸液中提取黄连素时,母液的pH值,膜内的盐酸浓 度及膜中Span-80用量 对盐酸小巢碱得率的影响.并建立了比较满意的实验条件. 关键词:黄连;黄连素;液膜法;提取 中圈分类号:R284.2:t:tlt标识码:A 1引言 黄连是着名的中药,《神农本草经》中将其 列之为上品.黄莲根茎味极苦.苦味在于其所含 的多种生物碱.主要为小檗碱,其次为甲基黄连 碱,雅托碱等. 盐酸小檗碱…是从黄连中提取的有效成分. 据国内外文献报道.黄连具有泻火,燥湿,解 毒,杀虫等作用.多用于治疗细菌性痢疾,肺结 核等疾病.药理研究表明.盐酸小檗碱能明显增 强抗菌能力.与黄连的抗茵能力基本一致.盐酸 小檗碱是黄连中的有效成分.提取盐酸小檗碱的 得率多少直接影响到黄连药效.本文研究用盐酸 液态膜从黄连水浸液中直接提取黄连素的方法, 并分析了影响黄连素提取的因索. 2实验部分 2.1实验材料 实验所用的黄连(产地.峨眉)购于成都市五 块石药材市场. 实验所用主要试剂包括:盐酸小檗碱对照品 (中国药品生物制品检定所.含量测定用).煤油采 用市售品(产地.成都).Span?80,无水乙醇,盐 酸,氢氧化钠均为AR级(成都科龙化工试剂厂). 2.2实验仪器 实验所用的仪器包括:UV-260紫外一可见 分光光度计(日本岛津),TB一85恒温水浴(日本 岛津).SHZ.in循环水真空泵(浙江临海市精工真 空设备厂).JB-2恒温磁力搅拌器(上海雷磁仪器 厂新泾分厂). 3方法与结果 3.1黄连水浸液的制备 称取用粉碎机粉碎的黄连干粉.用蒸馏水浸 泡48小时,用循环水真空泵抽滤.滤液用蒸馏 水定容至一定体积(母液).供实验用. 3.2液膜的制备方法 按实验所需液膜要求,先将乳化剂Span80 溶于煤油中.然后加入盐酸溶液.采用恒温磁力 搅拌器中速搅拌lO分钟.即可得到亚稳定的白 色乳状液膜. 3.3标准曲线的制作 3.3.1黄连素对照溶液的配制 精密称取盐酸小檗碱对照品20.00mg于 10OraL容量瓶中,加适量无水乙醇在水浴上加热 溶解.放冷至室温,用无水乙醇定容至刻度.再 精密吸取1.OOmL上述溶液加入10mL容量瓶中 用无水乙醇定容至刻度.摇匀,备用.其溶液浓 度为0.020mg/mL. 3.3.2测定波长的确定 不同浓度的盐酸小檗碱无水乙醇溶液,用紫 外一可见分光光度计在500—200nm波长范围进 收稿日期:2006—09一侣暑简介 :王J人杰(1949一).男.高级工程师,从事分析化学,药物分析的救学与科研 第4期王大杰,等:用液膜法从黄连中提取黄连素的研究?261? 行扫描.扫描结果如图1所示.从图l中可以看 出有3个吸收峰,分别位于350,266和230nm 处.为排除干扰,选用在350nm波长处测定吸收 度,制作工作曲线. 围1盐酸小鬃碱乙砰溶液吸收光谮田 3.3.3工作曲线的制作. 分别精密量取浓度为0.020rag/mL的盐酸小 檗碱标准溶液1.0mL,2.0mL,3.0mL,4.0mL, 5.0mL,置于5个10mL容量瓶中,用无水乙醇 定容至刻度,混匀.标准溶液的浓度分别为2.0, 4.0,6.0,8.0,l0.0X10,mg/mL,以乙醇为 空白,在350nm波长处测定收光度.以吸光度对 浓度进行回归计算,得回归方程(y=0.0529x+ 0.0034,r=0.9987).测定结果见表l,小檗碱标 准曲线图如图2所示. 衰l黄连素对照品浓度吸光度对照表 02468lOl0 ll-}隹;召疆的i键I1x0.?1mg^山) 图2小檗碱标准曲线 从图2可以看出,在浓度从0.002rag/mL到 0.010mg/mlJ时,吸光度与浓度线性关系良好. 3.4黄连素的提取方法 将10ml液膜(按3.2方法制备)倒入已调好 pH值的30ml母液中,慢速搅拌lO分钟,用分 液漏斗分出已吸收黄连素的黄色液膜层,倒入烧 杯中.然后再向调好pH值的已分离一次后的母 ,慢速搅拌l0分钟.用分液 液中加入10mL液膜 漏斗分出已吸收黄连素的黄色液膜层,倒入装有 黄色液膜层的烧杯中,在恒温水裕锅(80cC)进行 破膜,静置,过滤,再定容至50m1.最后再取 样,并测定吸光度(按3.3方法操作),通过回归 方程计算浓度,再计算得率. 4讨论【2J' 4.1母液pH值与黄连素提取量的关系 将膜内盐酸浓度固定为0.3mol/L,膜中 Span一80的用量固定为2.25%.取母液8份,每 两份为一组,每份30mL,共4组.用Na0H液调 pH值分别为8.0,9.0,10.0和II.0.此时.母 液中的黄连素应在不同程度上转为游离态.向每 份母液中加入10mL液膜(按3.4方法操作).结 果见表2. 衰2母液l,H值对黄连素提取量的影响 根据表2数据可绘制母液pH值时黄连素提 取量的影响曲线,如图3所示. r奇徊4i直 豳3母液pH值对黄连素提取量的影响曲线 (注:圈中I…234分别表示f'H为8.0,9.0,10.0,lI.0) 4.2Span?80用量与黄连素提取量的关系 首先制备4种同液膜,液膜的油水比均为 ?262?成都大学(自然科学版)第25卷 2:5.加人的盐酸浓度均为0.3tool/L,不同点是 膜体中Span.80的用量分别为1.O%,2.O%, 3.O%和4.O%取母液8份,每两份为一组.每 份30mL,共4组.用NaOH溶液调pH值为 l1.0.分别加入不同含量的上述液膜10mL(按 3.4方法操作),结果如表3所示.数据表明,加 大Span.80的用量,提取量反而下降. 裹3Span-80用量对黄连蠢提取?的影响 根据表3数据可绘制Span-80用量对黄连素 提取量的影响曲线,如图4所示. 田4Spandt0用量对黄连素提取?的影响曲线 4.3膜内盐酸浓度与黄连素提取量的关系 制备4种液膜,液膜的油水比均为2:5, Span一80的用量均为2.25%,膜内盐酸浓度分别 为0.1moL/L,0.2moL/L,0.3mol/L和0.4moL/ L.取母液8份,每两份为一组,每份30mL,共 4组.用NaOH溶液调pH值为l1.0,然后分别 加入液膜10mL(按3.4方法操作),结果如表4 所示. 裹4膜内盐酸浓度对黄连素提取?的影响 根据表4数据可绘制膜内盐酸浓度对黄连素 提取量的影响曲线,如图5所示. \, 田5膜内盐酸浓度对黄连素提取?的影响曲线 5结论 ?在一定范围内,黄连素的提取量随母液 pH值的增大而增加.但碱性太强时,破坏膜的 稳定性,碱性太弱,提取率低.所以,在黄连素 的提取过程中优选pH值为l1.0. ?黄连素的提取量随Span-80用量的增大而 减小,l%Span一80用量时黄连素的提取量最高, 但Span-80用量过低,会造成膜不够稳定,在操 作过程中易自动破膜,影响黄连素的提取量.所 以,在黄连素的提取过程中优选Span-80用量 为2.25%. ?增加膜内的盐酸浓度,可提高黄连素的提 取量,但在膜内盐酸浓度超过0.3moL/L时,液 膜已不稳定,影响黄连素的提取量.所以,在黄 连素的提取过程中优选盐酸浓度为0.3mol/L. 参考文献 [1]国家药典委员会,中华人民共和国药典[M].北 京:化学工业出版,2006:213—214,469—467. 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StudyonAntibacterialPeptidesApplicationinMeat ProductsofLowTemperature GUOXiaoqiang,YANJun,Xiaoyong,LINZhiyong,HUZhizhong,GOUXiaojun (LaboratoryofChineseTraditionalMedicine,ChengduUniversity,Chengdu610106,China) Abstract:Thistextstudiesantisepticeffectofrefinedantibacterialpeptidesofbullfrogskinapplication inmeatproductsoflowtemperature,andcomparestheantibacterialpeptideswithPotassiumsorbateNi- sinandrelatedcompoundantisepticonantisepticeffect.Itshowsthatantibacterialactivityoftheanti- bacterialpeptidesincreaseswiththequantityoftheantibacterialpeptides,andtheantibacterialpep- tideshaveobviousantibacterialactivitytomeatproductsoflowtemperature,butantibacterialactivityof theantibacterialpeptidesislowerthanPotassiumsorbate. Keywords:antibacterialpeptides,meatproductsoflowtemperature.antiseptic (上接第262页)?-+-?--'4-, ResearchonMethodsofLiquidMembraneforExtracting BerberinefromCoptis WANGDajie,ZHENGYi,JIANCHongmei,ZHANJun,XIANGQuanju (CollegeofBioteehnologyIndustry,ChengduUniversity,Chengdu610106,China) Abstract:Inthispaper.thepHoftheimmersesliquid,theconcentrationofhydrochloricacidandthe dosageofSpan-80inthethecaforextractingrateofberberinehydrochloridewasstudied,Andtherela- tivelysatisfactoryexperimentconditionwascreated+ Keywords:coptischinensis;berberine;liquidmembrane;extraction;