加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调的调节作用

加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调的调节作用 加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群 失调的调节作用 昆明医学院学报2009,(5):10—14 Journ~ofKunmingMedicalUniversity CN53—1O49/R 论罩 加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调的调节作用 康良,李仲锐,陈文慧,袁嘉丽 (云南中医学院基础医学院,云南昆明650000) [摘要]日的研究加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调的调节作用.方法通过腹腔注射青霉 素建立小鼠菌群失调模型,观察加减葳蕤汤对小鼠Kt咽部优势菌甲型链球菌的构成比和菌群总密集度的调节作 用.实验分4组:(1)阴性对照组;(2)青霉素模型组;(3)阳性药物对照组;(4)不同剂量(高中低剂 量)加减蒇蕤汤组.结果(1)小鼠口咽部甲型链球菌构成比和菌群总密集度在腹腔注射青霉素后显着降低, 青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调模型复制成功.(2)不同剂量的加减葳蕤汤对菌群失调小鼠上呼吸道菌群有不 同程度的调节作用.高剂量的加减葳蕤汤能显着升高甲型链球菌的构成比;中剂量的加减葳蕤汤能够显着增进 菌群总密集度;低剂量的加减蒇蕤汤对甲型链球菌的构成比及菌群总密集度都有一定的促进作用.结论青霉 素致小鼠上呼吸道菌群失调模型可用于中医药调节小鼠上呼吸道菌群失调的研究;加减葳蕤汤对青霉素致小鼠 上呼吸道菌群失调具有调节作用,其作用机制可能与促进有益菌甲型链球菌的生长,升高菌群总密集度,促进 菌群多样性有关. [关键词]加减葳蕤汤;青霉素;小鼠;上呼吸道;菌群失调 [中图分类号]Q934I3[文献标识码]A[文章编号]1003,4706(2009)05—0010—05 RegulatingEffectsofJiaJianWeiRuiDecoctionon DysbacteriosisinUpperRespiratoryTractofMiceinducedby Penicillin KANGLiang,LIZhong—rui,CHENWen—hui,YUANJia—li (FacuLtyofBasicMedicine,YunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,KunmingYunnan 650000,China) [Abstract]ObjectiveToexploretheregulatingeffectsofJiaJianWeiRuiDecoctionondysbaeteriosisin upperrespiratorytractofmiceinducedbyPenicillin.MethodsWeestablisheddysbacteriosismodeIinmiceby intraperitonealinjectionofPenicillin.andthenweobservedtheregulatingeffectofJiaJianWeiRuiDecoctionon theratioof一 hemolyticstreptococcusandthetotaldopulationdensityofbacteriaintheoralpharynxofmice.We devidedthemiceintofourgroups:?negativecontrolgroup;?Penicillinmodelgroup;? positivedrug controlgroup;JiaJian\,eiRuiDecoctiongroupswithdifferentdose.Results(1)Theratioof0【一hemolytic streptococcusandthetotalflIl1)Idationdensityofbacteriaintheora1pharynxofmicedecreasedafterintraperitoneal injeetionofPenicillin,thedysbaeteriosismodelinmicewasestablishedsuccessfully.(2)DifferentdoseofJia JianWeiRuiDecoctionhaddifferentregulatingeffectsonmicro-ecologyinupperrespiratorytractofmicewith [基金项目]国家自然科学基金资助项目(30760296);云南省科技 计划 项目进度计划表范例计划下载计划下载计划下载课程教学计划下载 资助项目 (2007C077M) [作者简介]康良(1982,),男,河北唐山市人,在读硕士研究生,主要从事中西医结合 研究工作 [通讯作者]袁嘉丽.E—maiI:yjI6688767@sina.COnl 第5期康良,等.加减葳蕤汤对青霉素致小鼠呼吸道菌群失调的调节作用I1 dysbacteriosis.HighdoseofJiaJianWeiRUiDecoctionincreasedsignificantlytheratioofOt—hemolytic streptococcus,middledoseofJiaJianWeiRuiDecoctionimprovedthetota1dopulationdensityofbacteria.and lOWdoseofJiaJianWeiRuiDecoctionincreasedboththeratioof一 hemolyticstreptococcusandthetotal dopulationdensityofbacteria.ConclusionsPenicillininduceddysbacteriosismodelinmicecanbeusedin studyingtheregulatingeffectsoftraditionalChinesemedicinesondysbacteriosisinupperrespiratorytractofmice. JiaJianWeiRuiDecoctionhastheregulatingeffectondysbacteriosisinupperrespiratorytractofmiceinducedby Penicillin.andthemechanismsmayberelatedwithpromotingthegTowthofbeneficial一 hemolytic streptococcus,improvingthetotaldopulationdensityofbacteria,andpromotingthediversityofbacteria. 1KeywordsjJiaJianWeiRuiDecoction;Penicillin;Mice;Upperrespiratorytract;Dysbacteriosis 目前临床对上呼吸道感染患者的治疗首选抗 生素,然而由于反复,长期使用抗生素,会现 上呼吸道的微生态平衡失调…,导致各种机会性感 染和增加治疗的难度.因此,近年来,国内外研 究者们已开始从上呼吸道微生态角度开展了对上 呼吸道感染防治的研究l21. 中医药在调节上呼吸道微生态平衡方面较西 药更具优势,但研究报道甚少.加减葳蕤汤是中 医治疗上呼吸道感染的方剂之一,现代药理学研 究表明,其组方中部分药物具有提高人体免疫能 力和抑制致病菌的作用l3-. 本研究旨在通过对上呼吸道优势菌甲型链球 菌构成比和菌群总密集度的观察,探讨了加减葳 蕤汤对菌群失调小鼠上呼吸道微生态的调节作用, 从而为加减葳蕤汤作为防治上呼吸道感染的中药 制剂的开发和利用提供了实验和理论依据. 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法 1.1材料 1.1.1实验动物昆明小鼠(SPF级),雌雄各 半,体重:18,22g,由昆明医学院实验动物中 心提供,饲养于昆明医学院SPF实验动物中心层 流架,不禁水禁食. 1.1.2加减葳蕤汤各味药材均购自云南中医学 院白塔路门诊部,且为《中国药典》所载品种, 由中药鉴定教研室鉴定其品种和质量,依照((方 剂学大词血))中的配伍比例,采用水提法进行煎 煮并灭菌,冷却后将所得药液密封放入4?冰箱 保存;使用前复至室温并依据不同剂量的浓度要 求进行稀释与分装. 1.1.3试剂注射用青霉素钠,生理盐水(NS), 白葡奈氏菌片(山东齐鲁制药厂),液体硫乙醇酸 盐培养基,羊血培养基,中国兰培养基,营养琼 脂,滴瓶式革兰式染液(四JI『迈克科技有限公 司),生化鉴定管(杭州天和微生物试剂有限公 司)等. 1.1.4仪器SPX一250B—Z型生化培养箱(上海 博迅实业有限公司医疗设备厂),YXQ—LS一75SII 型立式压力蒸汽灭菌器(上海博迅实业有限公司 医疗设备厂),医用超净工作台(梅州市纪元应用 研究所),生物安全柜(ThermoELECTRON CORPORATION),XS一18型生物显微镜(南京 江南光电股份有限公司),比浊仪(上海博迅实业 有限公司医疗设备厂),冰箱等. 1.2方法 1.2.1实验动物分组将昆明种小鼠随机分为4 组.(1)阴性对照组:不给予任何处理;(2)青霉素 模型组:小鼠腹腔注射青霉素钠0.0078g/10(g.d), 连续3d.第4天灌胃给予0.4mL的生理盐水 (NS),连续7d;(3)阳性药物对照组:青霉 素+白葡奈氏菌片水溶液.青霉素给药剂量和方 法同;?青霉素模型组,第4天灌胃给予临床给 药浓度[0.00156mg/10(g.d)]等体积白葡奈氏菌片水 溶液,连续7d.(4)不同剂量加减葳蕤汤组:青 霉素+不同剂量加减葳蕤汤.青霉素给药剂量和 方法同青霉素模型组,第4天灌胃给予等体积不同 剂量加减葳蕤汤,低剂量[临床等效剂量0.06045 g/lO(g.d)],中剂量[5倍临床等效剂量0.30225g/10 (g.d)],高剂量[10倍临床等效剂量0.6045g/lO(g. d)],连续7d.每组n=10只. 分别于注射青霉素前,注射青霉素3d和1ld 后取小鼠口咽部菌群 样本 保单样本pdf木马病毒样本下载上虞风机样本下载直线导轨样本下载电脑病毒样本下载 ,观测各项指标. 1.2.2青霉素致上呼吸道菌群失调动物模型 评价 LEC评价法下载LEC评价法下载评价量规免费下载学院评价表文档下载学院评价表文档下载 方法检测小鼠口咽部优势菌甲型链球菌构成比 12昆明医学院学报第30卷 和菌群总密集度,以青霉素模型组甲型链球菌基 本消失,菌群数量和种类明显减少为评价模型成 功的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 . 1.2.3上呼吸道菌群种类和数量评价方法应用 生化鉴定法确定上呼吸道菌群种类.菌群总密集 度:计算出原先每毫升标本中的活菌数或菌落形 成单位(colony~rmingunit,CFU).每毫升CFU 可用公式: (/mL)= x:平均菌落数n:稀释次数A:定量接种环 型号(L) 本实验在样本用液体硫乙醇酸盐培养基稀释 到10浓度情况下,用10L定量接种环接种, 所得平均菌落数×10即为小鼠口咽部每mL内所 含的菌落数.甲型链球菌(优势菌)构成比:单 个样本中甲型链球菌密集度/菌群总密集度的百 分比×100% 1.3统计学处理 实验结果以(4-S)表示,组问差异经SPSS 软件包处理,经方差齐性检验后采用秩和检验进 行统计学处理. 2结果 2.1青霉素对小鼠口咽部菌群总密集度和甲型链 球菌构成比的影响 2.1.1青霉素对小鼠口咽部菌群密集度的抑制作 用实验结果显示:注射青霉素3d后,小鼠口 咽部的菌群总密集度明显下降,与注射青霉素前 比较差异有统计学意义(P<0.01);注射青霉素 1ld后,小鼠口咽部的菌群总密集度明显下降, 与注射青霉素前比较差异有统计学意义(P< 0.05);注射青霉素前,青霉素模型组与阴性对照 组小鼠口咽部的菌群总密集度无统计学差异;注 射青霉素3d后,阴性对照组小鼠口咽部的菌群总 密集度明显高于青霉素模型组,差异有统计学意 ,阴性对照组 义(P<0.01);注射青霉素11d后 小鼠口咽部的菌群总密集度明显高于青霉素模型 组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1. 2.1.2青霉素对小鼠口咽部甲型链球菌构成比的 影响实验结果显示:注射青霉素3d后,小鼠 口咽部的甲型链球菌的构成比同给青霉素前比有 明显降低(P<0.01),甲型链球菌未能检出;注 射青霉素11d后,青霉素模型组的上述指标低于 同期的阴性对照组(P<0.01),差异具有统计学 意义;而阴性对照组同注射青霉素前的差异无统 计学意义(P>0.05),见表2. 2.2加减葳蕤汤对小鼠口咽部菌群总密集度和甲 型链球菌构成比的影响 2.2.1不同剂量加减葳蕤汤对小鼠口咽部茵群密 集度的调节作用实验结果表明:(1)注射青霉 素11d后,青霉素模型组小鼠口咽部的菌群总密 集度较阴性对照组明显下降,差异有统计学意义 表1青霉素对小鼠口咽部菌群密集度的抑制作用?s) Tab.1TheinhibitingeffectofPenicillinOHtotaLdopulationdensKyofbacteriaintheoralpha rynxofmice 与注射青霉素前比较,P<0.05,P<0.01;与阴性对照组比较,P<0.05,P<0.01 表2青霉素对小鼠口咽部甲型链球菌构成比影响?s) Tab.2TheeffectsofPenicillinontheratioof0一 hemolyticstreptoc0ccusintheoralpharynxofmice(?s) 与注射青霉素前比较,P<0.01;与阴性对照组比较,P<0.(】1 第5期康良,等.加减葳蕤汤对青霉素致小鼠上呼吸道菌群失调的调节作用l3 (P<0.05);(2)加减葳蕤汤组低,中剂量能够 改善青霉素降低的小鼠口咽部菌群总密集度 (P<0.01;P<0.01),具有提高小鼠口咽部菌群 总密集度的作用,而高剂量则不能改善青霉素降 低的小鼠口咽部菌群总密集度.(3)阳性药物 对照组小鼠口咽部菌群总密集度明显高于青霉素 模型组(P<0.01),也明显高于阴性对照组(P< 0.05),提示阳性药物(白葡奈氏菌片)能显着提 高小鼠口咽部菌群总密集度.(4)给予低剂量 加减葳蕤汤的小鼠口咽部菌群总密集度同阳性药 物对照组相比,差异无统计学意义,且数据较为 接近;给予中剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部菌群 总密集明显高于阳性药物对照组(P<0.05);给 予高剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部菌群总密集度 明显低于阳性药物对照组(P<0.01).结果提示: 加减葳蕤汤在提高小鼠口咽部菌群总密集度方 面,低剂量的加减葳蕤汤与阳性药物作用效果相 同;中剂量的加减葳蕤汤作用效果优越于阳性药 物;高剂量的加减葳蕤汤效果不明显.(5)给予 低,中剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部菌群总密集 度明显高于阴性对照组(P<0.05;P<0.01),而 高剂量的加减葳蕤汤效果不明显,见表3. 表3不同剂量加减葳蕤汤对小鼠口咽部菌群密集度的调 节作用(x?s) Tab.3RegulatingeffectsofJiaJianWeiRuiDecoc— tiononthetotaldopulationdensityofbac- teriaintheoralpharynxofmice(x?) 组别菌群密集度(X10VmL) (给青霉素1ld后) 阴性对照组 青霉素模型组 阳性药物对照组 加减葳蕤汤组 高剂量0.6045g/lO(g.d) 中剂量0.30225g/lO(g.d) 低剂量0.06045,g/1O(~d) 23.61?11.44 l3.07?8.97 37.08?14.1O 13.45?8.05 54.92?19.27 37.61?14_36' , 一,一 与阴性对照组比较P0.05,"P<0.01,与青霉 素模型组比较,P<0.01;与阳性药物对照组比较, P<O.05,P<O.O1;每组n=10只. 2.2.2不同剂量加减葳蕤汤对小鼠口咽部甲型 链球菌构成比的影响实验结果表明:(1)给 青霉素1ld后,青霉素模型组的小鼠口咽部甲型 链球菌构成比明显低于阴性对照组(P<0.01). 差异具有统计学意义;(2)与青霉素模型组相 比,阳性药物对照组的甲型链球菌构成比有所升 高,但差异无统计学意义(P>0.05);阳性药物 对照组与阴性对照组相比小鼠口咽部甲型链球菌 构成比有所下降,但差异无统计学意义(P> 0.05);(3)给予高剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽 部甲型链球菌构成比高于青霉素模型组,差异具 有统计学意义(P<0.05);而给予低,中剂量加 减葳蕤汤的小鼠口咽部甲型链球菌构成比与青霉 素模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05), 但低剂量有升高甲型链球菌的趋势,结果提示, 不同剂量的加减葳蕤汤能够对小鼠口咽部甲型链 球菌构成比的调节发挥不同程度的作用;(4)给 予高剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部甲型链球菌构 成比高于阳性药物对照组(P<0.05);给予低, 中剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部甲型链球菌构成 比与阳性药物对照组相比,数据较为接近,差异 无统计学意义(P>0.05),结果提示:加减葳蕤 汤在提高甲型链球菌构成比方面,高剂量的加减 葳蕤汤作用效果优越于阳性药物;低,中剂量的 加减葳蕤汤同阳性药物效果接近;(5)给予低,中 剂量加减葳蕤汤的小鼠口咽部甲型链球菌构成比 较阴性对照组水平低(P<0.05;P<0.O1);而高剂 量组接近于阴性对照组,差异无统计学意义(P> 0.05).见表4. 表4不同剂量加减葳蕤汤对小鼠口咽部甲型链球菌构成 比的影响?) Tab.4TheeffectsofJiaJianWeiRuiDecoctionon theratioofd-hemolyticstreptococcusin theoralpharynxofmice(x?s) 组别构成比(%) (给青霉素11d后) 阴性对照组 青霉素模型组 阳性药物对照组 加减葳蕤汤组 高剂量0.6045~10(g.d) 中剂量0.30225~10(g.d) 低剂量O.06045g/1O(g.d) 与阴性对照组比较,P<0.05,"P<0.01,与青霉 素模型组比较,P<0.05,与阳性药物对照组比较, /9<0.05,每组n=10只. ? ? Ol964 33l +一+一+一 248 14l 566 967 ?..._ 8O84 1l ?+一+一 209 865 214978 14昆明医学院学报第30卷 3讨论 临床观察发现,反复,长期使用抗生素治疗上 呼吸道感染,可以导致患者上呼吸道菌群失调[11. 本研究显示,腹腔注射青霉素后,小鼠口咽部甲 型链球菌构成比和菌群总密集度均显着降低.甲 型链球菌作为上呼吸道优势菌,能够起到抑制致 病菌生长的占位性保护作用,甲型链球菌构成比 可反映甲型链球菌在上呼吸道菌群中的地位凹,而 菌群总密集度的正常与否能够反映上呼吸道菌群 平衡的状态.青霉素能够导致上呼吸道甲型链球 菌构成比和菌群总密集度的降低,从而造成上呼 吸道菌群失调,因而青霉素致小鼠上呼吸道菌群 失调模型可用于中医药调节小鼠上呼吸道菌群失 调的研究. 加减葳蕤汤是中医治疗上呼吸道感染的方剂 之一,临床效果较好01.现代药理学研究表明, 其组方中部分药物具有提高人体免疫能力和抑制 致病菌的作用.然而加减葳蕤汤对于治疗上呼 吸道感染的药理学作用目前尚未见文献报道.本 研究发现:不同剂量的加减葳蕤汤对菌群失调小 鼠上呼吸道菌群有不同程度的调节作用.高剂量 的加减葳蕤汤能显着升高甲型链球菌的构成比; 中剂量的加减葳蕤汤能够显着增进菌群总密集度; 低剂量的加减葳蕤汤对甲型链球菌的构成比及菌 群总密集度都有一定的促进作用.研究结果提示, 加减葳蕤汤能够促进有益菌甲型链球菌生长,升 高菌群总密集度,对青霉素致小鼠上呼吸道菌群 失调具有调节作用.加减葳蕤汤对青霉素致小鼠 上呼吸道菌群失调具有调节作用,可能是通过促 进有益菌甲型链球菌的生长来抑制其它细菌生长, 抑或通过升高菌群总密集度,促进菌群多样性来 抑制致病菌的生长;抑或通过促进有益菌甲型链 球菌的生长和升高菌群总密集度,促进菌群多样 性,从而调节上呼吸道微生态平衡. 阳性药物白葡奈氏菌片(Staphylococcusand neisseriatablets)是临床上用于治疗上呼吸道感染 的一种新药,由白色葡萄球菌,奈瑟卡他球菌, 枯草芽孢杆菌的灭活菌体按20:20:1的比例制成. 该药作为生物制剂,能够以微生物抗原的形式提 高机体的非特异性和呼吸道黏膜的特异性免疫功 能.本实验研究发现:白葡奈氏菌片能显着升高 青霉素模型小鼠口咽部菌群总密集度,但对甲型 链球菌的恢复无显着作用,这可能同该药物的成 分有关.与阳性药物白葡奈氏菌片相比,加减葳 蕤汤不仅能够显着升高青霉素模型小鼠口咽部菌 群总密集度,还能够显着升高小鼠口咽部优势菌 甲型链球菌的构成比,促进甲型链球菌的恢复, 其作用优越于白葡奈氏菌片.深人研究开发与利 用加减葳蕤汤,有望使加减葳蕤汤成为临床上治 疗上呼吸道感染的有效药物. [参考文献] [1]杨景云.医用微生态学[M].中国医药科技出版社, 1997,1:86. [2]张莉.上呼吸道微生态平衡研究与益生菌制剂[J]. 内蒙古大学学报(自然科学版),2006,37(6):714— 718. [3]CHOONGJAELEE,JAEHEUNLEE,JEONGHOSEO— K.eta1.Effectsofbetaine.coumarinandflavonoidson mucinreleasefromculturedhamstertracheaLsurface epithelialcellslJJ.PhytotherRes,2004,18(4):301. [4]吕雪荣,潘兴瑜,陈莹,等.玉竹提取物B对CEM的抑 制作用[J].锦州医学院学报,2004,25(5):35—38. [5]沈映君.中药药理学[M].上海:科学技术出版社, 2003:139. [6]LI—KUNHAN,YI—NANZHENG,BAO—JUNXU,eta1. Saponinsfromplatycodieadixamelioratehighfatdiet inducedobesityinmicelJj.JoumalofNutrition,2002, 132:2241—2245. [7]HIROMIKOBAYASHI,KUNIAKITAKAHASHI.Anah— ernativeapproach1oatopicdermatitis:part?—ummaryof easesanddiscussionlJJ.eCAMM,2004,1(2):145— 155. [8]肖纯凌,李舒音,韩秀珍,等.呼吸道感染与甲型链球 菌的相关性研究[J].中国微生态学杂志,2000,12 (4):206—207. [9]徐重明,汪自源.论体虚感冒与扶正解表诸方剂 [J].中医药学刊,2006,9(24):1624—1625. [1O]郝艳新,王海彤.加减葳蕤汤临床应用举隅[Jj.北 京中医药大学学报,2000,23,(4):74. (2009—02—20收稿)