禽流感H7血凝与血凝抑制试验检测的目的（与H7N9的关系）H7抗体检测为阴性（－）→无H7抗体（也就无H7N9抗体)H7抗体检测为阳性（＋）→分子生物学方法进行病原检测H7-Ab-HI试验方法同H5检测方法，附后。（GB/T18936-2003）H7-Ab-HI阴阳性判定标准HI效价≥4，判定为阳性（＋）HI效价＜4，判定为阴性（－）质量控制（抗原及标准阴阳性对照）4U抗原试剂相关信息抗原-20℃冷冻保存血球4℃冷藏保存生理盐水需要调整PH值到7.2-7.4配制好的4U抗原若当天不能用完，需冷冻保存，若量大可分装冷冻保存，再次使用融化即可（冻融可能会影响效价，每次使用需测4U抗原HA价）效价判定非特异凝集ND-HIH7-HI血凝板竖起后观察非特异凝集H7-HI阿氏（Alsevers）液的配制：试剂用量（g）葡萄糖2.05柠檬酸钠0.8柠檬酸0.055氯化钠0.42加蒸馏水至100mL，散热溶解后，调PH=6.169kPa15min高压灭菌，4℃保存备用。附录：血凝与血凝抑制试验1、试验准备1%鸡红细胞悬液的配制：采集至少3只SPF公鸡（非免疫的公鸡）或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合（4℃可保存7天左右）。配制前用PH7.2的生理盐水洗涤3次每次均以离心机上1500-2000r/min(不得超过2000r/min，否则会导致红细胞破裂，引起溶血)，离心10分钟左右。洗涤后，吸取沉积于管底的红细胞泥1mL，混合于99mL生理盐水中混匀。即得1%RBC。4℃可保存3天左右，若出现溶血应重新采血，重新配制。4单位抗原的配制根据血凝试验测新城疫病毒抗原的血凝效价。如测得病毒原液HA=27，即27=128，则配制4单位抗原需将病毒原液稀释128÷4=32倍那么如果需要32mL4单位抗原，需要（32÷32=1）mL病毒原液和（32-1=31）mL生理盐水。血清中非特异性凝集素的去除：鸡和火鸡血清极少出现非特异性抑制或凝集反应，可不进行处理直接进行试验，其他禽类及哺乳动物血清需进行预处理。处理方法：56℃水浴30分钟灭活、RDE（受体破坏酶）处理、红细胞吸附、胰酶处理等。90°血凝板1、各孔加入PBS各25µL2、加病毒原液25µL，倍比稀释3、各孔加入PBS各25µL血凝试验试验过程4、加1%RBC各25µL，作用40minPBS也可用PH7.0-7.2的生理盐水代替（下同）附录：血凝与血凝抑制试验2、血凝试验100%凝集50%凝集血凝试验结果判定1、各孔加入PBS各25µL2、加待检血清25µL，倍比稀释3、加4单位抗原各25µL，作用30min4、加1%RBC各25µL，作用40min血凝抑制试验试验过程90°血凝板附录：血凝与血凝抑制试验3、血凝抑制试验HI注意事项每次试验需做1份标准阴阳性血清的对照，对照成立方可判定试验结果。阴性血清滴度不应超过2log2阳性血清滴度应与标定的滴度相差不超过1个稀释度。每次进行HI试验必须做4U抗原的反滴定，即测一下4U抗原的HA价是否准确。如果HA价高1滴度（实际为8U），则HI价＋1如果HA价低1滴度（实际为2U），则HI价―1血凝抑制试验结果判定100%抑制50%抑制Hemagglutinin,HAH1~H15Neuraminidase,NAN1~N9附录：血凝与血凝抑制试验4、试验原理HA试验原理病毒
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
面血凝素与鸡红细胞表面糖蛋白受体发生结合而发生凝集检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量（1个血凝单位＝106病毒颗粒）凝集红细胞抗原凝集反应HA试验原理红细胞不凝集不凝集HA试验原理HI试验原理红细胞抗原凝集抑制反应抗体血凝抑制HI试验原理红细胞抗原不抑制不抑制
浙公网安备 33021202002483