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JY-SCZF(SSR电泳说明)JY-SCZF(SSR电泳说明)1.玻璃板的清洗用清洁剂把玻璃反复擦洗干净,干燥。2.胶的配制4.5-6%%PA胶   40ml10%过硫酸铵    120ulTEMED      100ul迅速轻轻摇匀3.灌胶把胶沿灌胶口边轻轻敲打,边轻轻灌进,防止出现气泡,待胶流动到底部,在灌胶口轻轻插入梳子,让其聚合至少1小时。(若让胶过夜,在胶的两头铺上湿滤纸,保湿膜以防胶干)。4.取出样品梳子,将凝胶安装电泳槽,上、下电泳槽中分别加入1×TBE或者1×TAE缓冲液。用移液器吸取电泳槽中缓冲液轻轻冲洗点样孔,然后上样。SS...

JY-SCZF(SSR电泳说明)
JY-SCZF(SSR电泳说明)1.玻璃板的清洗用清洁剂把玻璃反复擦洗干净,干燥。2.胶的配制4.5-6%%PA胶   40ml10%过硫酸铵    120ulTEMED      100ul迅速轻轻摇匀3.灌胶把胶沿灌胶口边轻轻敲打,边轻轻灌进,防止出现气泡,待胶流动到底部,在灌胶口轻轻插入梳子,让其聚合至少1小时。(若让胶过夜,在胶的两头铺上湿滤纸,保湿膜以防胶干)。4.取出样品梳子,将凝胶安装电泳槽,上、下电泳槽中分别加入1×TBE或者1×TAE缓冲液。用移液器吸取电泳槽中缓冲液轻轻冲洗点样孔,然后上样。SSRPCR样品一般点样1-2ul,样品应混入1/5体积的上样缓冲液。10×上样缓冲液甘油               49ml(100%)10mM EDTA(pH8.0)       1ml(0.5M,PH8.0)0.25% BrphBlue         0.125g0.25% X.Cynol          0.125g室温保存5.加入样品后,恒压150V-250V电泳至第一条loadingBuffer带至胶板的另一前沿(约1.5小时)。6.电泳结束后,用撬板分开玻璃板,将凝胶进行染色。Silverstaining(银染)1、固定:将凝胶放入10%冰醋酸,摇床振荡,至溴酚蓝颜色脱去。2、水洗:将凝胶转移入ddH2O洗2次(每次10min)不能用手接触胶。3、银染:将凝胶转移入200ml0.1%AgNO3、200ul(37%甲醛)中,避光,振荡20min。(AgNO3在使用前几分钟新鲜配制,甲醛在使用前加入)。3、水洗:将凝胶转移入ddH2O水洗3-5sec。4、显影:将凝胶转移入显影液,1%NaOH,200ul(37%甲醛)溶液,浸泡显色,注意观察,随时终止。5、停显:将凝胶转移入10%冰醋酸,摇床振荡,停显。
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