蛋白质含量的测定方法[试题]

蛋白质含量的测定方法[试题] 蛋白质的测定方法-凯氏微量法 有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。 1.原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 )SO+6CO+12SO+16HO 2NH(CH)COOH+13HSO?(NH44242222222 (NH)SO+2NaOH?2NH+2HO+NaSO 4243224 2.方法 本法参照GB 5009.5 -85,适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定。 3.试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。试剂均为分析纯。 1)硫酸铜 2)硫酸钾 3)浓硫酸 4)2%硼酸溶液(或1%的硼酸) 5)混合指示剂:1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲 基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 6)饱和氢氧化钠:500g氢氧化钠加入500mL水中，搅拌溶解，冷却后放置数日，澄清后使用。 )0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液:需标定后使用(配制及标定方法见附录) 7 4.仪器 1)消化炉; 2)凯氏定氮蒸馏装置; 3)万分之一电子天平 4)凯氏定氮蒸馏装置:如图所示 1.热源 2. 烧瓶 3. 玻璃管 4. 橡皮管5(玻璃杯 6. 棒状玻塞 7. 反应室 8. 反应室外壳 9. 夹子 10. 反应室中插管 11. 冷凝管 12. 锥形瓶 13. 石棉网 图3.4 微量凯氏蒸馏装置示意图 5. 操作步骤 1样品处理:精密称取0.1~2.0g固体样品或2~5g半固体样品或吸取液体样品5~20mL，放入100mL或500mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3~20mL浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2,10mL蒸馏水冲洗瓶壁，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10~20mL水混匀 ，放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白实验。 2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃 珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 3向接收瓶内加入10mL ,1~2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10mL样品消化稀释液由小玻璃杯流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使之流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3~10mL饱和氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏2min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷凝管下端外部，再蒸馏1min取下接收瓶，以0.01或0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 同时吸取10mL试剂空白消化液按5.3操作。 6. 计算 X =(V-V)×C× 0.014× B/m ×100× F 0 式中:X—样品中蛋白质含量，g,100g; V—样品消耗盐酸标准液的体积，mL; V—空白消化液消耗盐酸标准液体积，mL; 0 C—盐酸标准液摩尔浓度,mol/L; 0.014—1mol/L 盐酸标准液1 mL相当氮克数; B—定容体积/取液量; m—样品的质量，g; F—氮换算为蛋白质计算因子。蛋白质的氮素含量不同，故换算因子不同。详见下 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 。 蛋白质计算因子 食物计算因子:蛋，鱼，肉及制品，禽类，玉米，高粱，豆类，水果和蔬菜类 6.25;乳及乳制品 6.38;大米 5.95;小麦面 普通粉 5.70;全麦，大麦，燕麦，裸麦,小米，小麦面全麦 5.83;小麦 5.80;黄豆 5.71;花生 5.46;芝麻、向日葵、核桃和榛子 5.30;麸皮 6.31 7. 举例 设取样品0.1000g，消化后稀释至100 mL。取10 mL样品稀释液，标准盐酸为0.01 mol/L，空白滴 定为0.12 mL，样品滴定用去的标准盐酸为3.21 mL，测得样品中蛋白质百分率为: (3.21-0.12) ×0.01×0.014×10,0.01× 100× 6.25 ,(3.21-0.12)×8.75,27.0% 8. 附录: (1)标准HCl溶液(0.1 mol/L HCl)配制及标定: 配制:量取9毫升HCl，加适量水稀释至1000毫升。 300?干燥至恒重的基准无水碳酸钠，加50毫升水使之溶解，标定:精确称取约0.15克左右在270, 加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示液，(量取30mL 0.2%溴甲酚绿乙醇溶液，加入20mL 0.1% 甲基红乙醇溶液，混匀)用配制的盐酸滴定至溶液由绿色变紫红色，煮沸2min，冷却至室温， 继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。同时做试剂空白实验。 (2)计算: C = m(V-V)×0.0530 0 C—HCl标准滴定溶液的实际浓度，mol/L; m—基准无水碳酸钠的质量，g; V—HCl标准滴定溶液用量，mL; V—试剂空白HCl标准滴定溶液用量，mL; 0 0.0530—1.00 mL HCl标准滴定溶液〔C(HCl)=1mol/L〕相当基准无水碳酸钠g。 0. 01mol/L HCl:精确吸取标定过的0.1mol/L HCl 10 mL，准确稀释至100毫升。必要时重新标定浓度。 9.注意事项: 1)干样用称量纸称重连纸一同消化，空白管同样放称量纸消化。 2)含糖量高和油脂高的样品消化时容易溢出，加热要缓慢。 3)稀释样品时消化液过热，加水反应猛烈使样品损失;消化液 过冷，加水后盐析不溶解。 食品中脂肪的测定方法 GB 5009.6-85酸水解法 1原理:样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。 2试剂: 1.盐酸 2.95%乙醇。 3.乙醚。 4.石油醚。 3仪器100mL具塞刻度量筒。 4操作方法 1.样品处理 1)固体样品:精密称取约2g，置于50mL大试管内，加8mL水，混匀后再加10mL盐酸。 2)液体样品:称取10.0g，置于50mL大试管内，加10mL盐酸。 2.将试管放入70,80?水浴中，每隔5,10min以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约40,50min。 3.取出试管，加入10mL乙醇，混合。冷却后将混合物移于100mL具塞量筒中，以25mL乙醚分次洗试 管，一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再塞好，静置 12min，小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10,20min，待上部液 体清晰，吸出上清液于已恒量的锥形瓶内，再加5mL乙醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙 醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置95,l05?烘箱中干燥2h，取出放干燥器内冷却 0.5h后称量。