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生物制品_质量标准内容及结构确证内容生物制品_质量标准内容及结构确证内容 生物技术药物的质控体系—质量标准研究内容 检定方法、质控标准 , 理化性质:外观(形状、颜色、气味)、pH , 均一性:纯度、浓度 , 鉴别 , 结构确证 , 效价:生物学活性、免疫学活性 , 残余杂质:产品、工艺、环境相关的杂质 , 起草、制定《制造与检定规程》 , 研究建立国家标准品或参考品 重组蛋白质药物质量标准研究 , 效价:生物学活性与比活性 , 蛋白质纯度 , 蛋白质含量 , 理化性质鉴定(部分非常规) , 残余杂质 , 安全性及其它...

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生物制品_质量标准内容及结构确证内容 生物技术药物的质控体系—质量标准研究内容 检定方法、质控标准 , 理化性质:外观(形状、颜色、气味)、pH , 均一性:纯度、浓度 , 鉴别 , 结构确证 , 效价:生物学活性、免疫学活性 , 残余杂质:产品、工艺、环境相关的杂质 , 起草、制定《制造与检定 规程 煤矿测量规程下载煤矿测量规程下载配电网检修规程下载地籍调查规程pdf稳定性研究规程下载 》 , 研究建立国家标准品或参考品 重组蛋白质药物质量标准研究 , 效价:生物学活性与比活性 , 蛋白质纯度 , 蛋白质含量 , 理化性质鉴定(部分非常规) , 残余杂质 , 安全性及其它项目 一 生物学活性及比活性测定 (一) 检测意义 获取准确的效价信息,保证产品有效 效价:有效性指标,反映药品效力 生物学活性才能真实反映生物技术药效价 原因:生物制品分子大、结构复杂、不稳定,使得重量与效价不一致 生物制品技术药:~单位(U、AU、IU) (二) 生物学活性测定方法分类 1、动物基础的活性测定 离体动物器官法:脑利钠肽的兔主动脉 体内测定法: EPO的小鼠网织红细胞 2、细胞基础的活性测定 , 促细胞生长法:大多数细胞因子类 , 抑制细胞生长法:细胞毒素、血管抑制剂 , 间接保护细胞法:IFN保护WISH 3、酶学基础的活性测定:重组酶类 4、受体-配体、抗原-抗体结合基础的活性测定: 抗原决定簇与活性中心常不一致 (三)生物学活性测定方法选择 1、细胞培养法,离体器官法,体内法 2、细胞染色标记方法: MTT ,3H-Thymidine ,流式细胞仪 (测细胞周期、凋亡) 3、定量法,半定量法,定性法 4、生物学活性不一定与临床药效类型一致 工艺稳定、测生物活性特别复杂时,可替代。 如rh-GH用HPLC (四)生物学活性测定(见药典附录?C) 1、样品:原液、成品 2、方法:如上述(好好研究,,,,) 3、标准: 不同生物活性测定方法的规定标准 测定方法 规定标准 动物基础的活性测定 70%-130%标示量 细胞基础的活性测定 80%-120%标示量 酶学基础的活性测定 85%-115%标示量 结合反应的活性测定 85%-115%标示量 (五)蛋白质药物的比活性(见分生实验册77页),,, 1、样品:原液 2、定义与计算: 比活性:单位重量蛋白的活性单位数(IU/mg) 3、标准:不小于。。。IU/mg 4、意义: 1)真实反映有活性的蛋白质所占的比例 厂家间、表达系统间、批间比较 2)便于配制成品 二 蛋白质纯度检查 , 样品:原液 , 方法:必须采用二种方法测定 非还原SDS-PAGE法 HPLC法 , 标准:纯度均须达到95%或98%以上 非还原SDS-PAGE法测定纯度(见药典附录?C) , SDS-PAGE:据分子大小分离 , 样品处理:样品不加β-ME或DTT 二硫键未打开,反映单体、二聚体或多聚体情况 , 染色方法与上样量 银染: 5ug(检测限为1-10ng) 考马斯亮蓝R-250:10ug(检测限为0.1ug) , 定量方法:凝胶扫描 , 标准:无明显杂带,纯度?95%或98% HPLC法测纯度,,,(见药典附录?B) , 分析柱:反相柱、离子柱、分子筛 应尽量采用反相柱或离子柱 应注明采用的分析柱性质 , 上样量:5ug , 标准:出峰时间正确 纯度:?95%或98% 三、蛋白质含量测定(见药典附录?D) , 样品:原液、成品 , 方法: *Folin-酚试剂法(Lowry法):(见分生实验册67-73页) 简便、灵敏、优先采用,灵敏度:5-100ug/ml *染色法(Bradford法): 考马斯亮蓝G-250,简便灵敏, 25-200ug/ml BCA(二喹啉甲酸)法: 操作简单,比Lowry法快4倍且更加方便,准确灵敏:20~200 ug/ml,微量BCA的测定范 围在0.5~10 ug/ml。经济适用 ,抗试剂干扰能力比较强。 紫外分光广度法: 用于原液比活性计算和成品规格控制 四、蛋白质药物理化性质鉴定 (一)特异性鉴别试验 1、样品:原液和成品 2、方法:免疫印迹法 Western Blot、 Dot Blot 3、标准:应该阳性 (二)相对分子量测定 1、样品:原液 2、方法:还原型SDS-PAGE(见分生实验册51页、见药典附录?C)、质谱法 3、标准: 1)理论值?10%范围 2)批与批间一致 (三)等电点测定(见药典附录?D) 1、样品:原液 2、方法: IEF:常规等电聚胶电泳(见分生实验册55-57页) CE:毛细管电泳 3、标准: 1)有明显主带 2)理论值?0.5pH范围 3)批与批间一致 (四)紫外吸收光谱分析(见药典附录?A) 1、样品:原液 2、方法:紫外扫描 3、标准: 1)最大吸收波长与特征波长一致 2)批与批间一致 (五)肽图分析(非常规)(见药典附录?E) 1、样品:原液 2、方法: 溴化氰/胰蛋白酶裂解+HPLC/ SDS-PAGE/CE/质谱法 3、标准: 1)有特征性图谱 2)批与批间一致 (六)氨基酸组成分析(非常规) 1、样品:原液 2、方法: HCl/NaOH水解(仅用于Trp测定) +氨基酸自动分析仪 3、标准: 1)与理论值一致 2)批与批间一致 (七)氨基酸序列分析(非常规) 1、样品:原液 2、方法: N末端: 15个残基, Edman化学降解法,蛋白质全自动测序仪 C末端: 1-3个残基 硫氰酸酯/羧肽酶降解法,RP-HPLC 3、标准: 1)与理论值一致 2)批与批间一致 (八)其它:二硫键、糖基化(非常规) 五、残余杂质检测 (一)宿主相关杂质 宿主细胞蛋白含量:(见药典附录?C) 1、样品:原液、成品 2、方法: 双抗体夹心ELISA:用HAS作保护 宿主蛋白标准品:中检所提供 3、标准: 1)大肠杆菌?0.1% 2)CHO ?0.05% 宿主细胞DNA含量(见药典附录?B) 1、样品:原液、成品 2、方法: DNA点印迹杂交法,地高辛标记 DNA标准品:厂家提供 3、标准: DNA含量?10ng/剂量 细菌内毒素含量(见药典附录?E凝胶限量实验) 1、样品:原液、成品 2、方法: 鲎试剂分析法 鲎试剂标准品:中检所提供 3、标准: 内毒素含量?1,,,/剂量 (二)工艺相关杂质(见药典附录?A) 如残余抗生素、IgG、蛋白A、小牛血清 (三)产品相关杂质 如多聚体、不同的PEG修饰产物 六、安全性及其它检测项目 (一)无菌试验 平皿法,需氧菌、厌氧菌、真菌、支原体 (二)热原试验 鲎试剂法或家兔法 (三)异常毒性试验 小鼠(1ml)或豚鼠(5ml),腹腔注射 (四)水分、装量、pH值 原液质量标准 , 生物学活性、比活性(见药典附录?C) , 蛋白质含量(见药典附录?D) , 纯度:?95%,非还原SDS-PAGE法(见药典附录?C)、HPLC法(见药典附录? B) , 分子量:还原型SDS-PAGE法(见药典附录?C)、质谱法 , 外源性DNA残留量: ?10ng/剂量(见药典附录?B) , 宿主蛋白残留量: ?0.1%,0.05%(见药典附录?C) , 残余抗生素:不得检出(见药典附录?A) , 细菌内毒素:?10EU/剂量(见药典附录?E凝胶限量实验) , 结构确证:等电点(见药典附录?D)、紫外吸收光谱扫描(见药典附录?A)、N末 端15个氨基酸顺序、肽图(见药典附录?E)、(氨基酸组成、) 成品质量标准 , 鉴别试验:免疫印迹法/斑点法,阳性 , 物理检查:外观、可见异物、装量 , 化学检定:水分、pH值 , 生物学活性:标示量的%范围 , 无菌检查:不得检出 , 内毒素检查: ?10EU/剂量 , 异常毒性检查:符合规定
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分类:生产制造
上传时间:2017-11-17
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