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玉郎伞多糖对硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶所致小鼠肝损伤的保护作用(可编辑)

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玉郎伞多糖对硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶所致小鼠肝损伤的保护作用(可编辑)玉郎伞多糖对硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶所致小鼠肝损伤的保护作用(可编辑) 学校代码:10600 学 号:081047 学位类型:科学学位 广 西 中 医 学 院 硕 士 学 位 论 文 玉 郎 伞 多 糖对 硫 唑 嘌呤 、 甲 氨 蝶呤 、 氟 尿 嘧 啶 所 致小 鼠 肝 损伤 的 保 护 作用研 究 生: 刘 冠达 导师: 王乃平 教授 院系(部 所) : 药学院 专业: 药理学 研 究 方 向: 中药药理 完 成 日 期: 2011 年 5 月 30 日 广西 中医 学院 200...

玉郎伞多糖对硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶所致小鼠肝损伤的保护作用(可编辑)
玉郎伞多糖对硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶所致小鼠肝损伤的保护作用(可编辑) 学校代码:10600 学 号:081047 学位类型:科学学位 广 西 中 医 学 院 硕 士 学 位 论 文 玉 郎 伞 多 糖对 硫 唑 嘌呤 、 甲 氨 蝶呤 、 氟 尿 嘧 啶 所 致小 鼠 肝 损伤 的 保 护 作用研 究 生: 刘 冠达 导师: 王乃平 教授 院系(部 所) : 药学院 专业: 药理学 研 究 方 向: 中药药理 完 成 日 期: 2011 年 5 月 30 日 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 目 录 主要缩略 词. 5 中 文 摘 要7 ABSTRACT 10 引 言 13 正 文 16 第一部分 玉郎伞 多糖对 甲氨蝶 呤所致 小 鼠肝损伤 的保护 作用. 16 1 实验 材料 16 2 实验 方法 17 3 实验 结果 21 4 讨论28 第二部分 玉郎伞 多糖对 氟尿嘧 啶所致 小 鼠肝损伤 的保护 作用32 1 实验 材料 33 2 实验 方法 34 3. 实验结果 36 4 讨论42 第三部分 玉郎伞 多糖对 硫唑嘌 呤所致 小 鼠肝损伤 的保护 作用45 1 实验材 料 45 2 实验 方法 47 3 实验 结果 49 4 讨论57 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 参 考 文 献62 综 述 65 致 谢 71 攻读学位 期间发 表的学 术 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 目录. 72 广西中医 学院研 究生学 位论文 作者声 明 74 个 人 简 历75 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 主要缩略 词 英文缩写 英文全称 中文全称 FU Fluorouracil 氟尿嘧啶 ALT alanine aminotransferase 丙氨酸氨 基转移 酶 AST aspartate aminotransferase 门冬氨酸 氨基转 移酶 BPDC biphenyldicarboxylate 联苯双酯 DBIL direct bilirubin 直接胆红 素 GSH glutathione 还原性谷 胱甘肽 GSH-Px glutathione peroxidase 谷胱甘肽 过氧化 物酶 HE hematoxylineosin 苏木素- 伊红染 色 i.p. intraperitoneal injection 腹腔注射 LDH lipopolysaccharide of bacterium coli 大肠杆菌 脂多糖 LSZ lysozyme 溶菌酶 MDA malondialdehyde 丙二醛 MTX Methotrexate 甲氨蝶呤 MS microsome 微粒体 NC normal control 正常组 NO nitric oxide 一氧化氮 NS normal sodium 生理盐水 SOD superoxide dismutase 超氧化物 歧化酶 TBIL total bilirubin 总胆红素 TNF-α tumor necrosis factor-α 肿瘤坏死 因子-α YLSPS Yulangsan polysaccharide 玉郎伞多 糖 YLSPS lowdosage of Yulangsan 玉郎伞多 糖低剂 量 L 5 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 YLSPS medium dosage of Yulangsan 玉郎伞多 糖中剂 量 M polysaccharide polysaccharide YLSPS high dosage of Yulangsan 玉郎伞多 糖高剂 量 H polysaccharidepolysaccharide6 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 中 文 摘 要 目 的: 观察玉郎伞多糖 对硫唑 嘌呤、 氟 尿嘧啶 、 甲氨 蝶呤致 肝损伤 小鼠 的保护作用,并通过病理形态学和生化 功能的改变探讨其作用机制,为 在治疗癌 症过程 中保肝 药 的 研 发提供 初 步的实验 基础。 方 法: (1 )YLSPS 对甲 氨 蝶呤 致 小 鼠 肝损 伤 的影 响 :建 立 甲氨 蝶 呤 致 肝损伤 小鼠模 型,计 算小 鼠肝、 脾、 胸 腺指数 ,测定 小鼠血 清中 ALT 、 AST 的活 性及肝 组织匀 浆中 SOD 、MDA 、GSH 、GSH-Px 和 NO 的 含量, 并进行肝 组织病 理学观 察,比较 YLSPS 各个剂量 与模型 组的差 异。 (2 ) YLSPS 对氟尿 嘧啶致 小鼠肝 损伤的影 响 :建立氟 尿嘧啶 致肝损 伤小鼠 模 型, 计算 小鼠脾 指数和 胸腺指 数, 观察 YLSPS 对小 鼠血清 ALT 、AST 和 LDH 活性 的 影响 , 肿瘤 坏死因 子-α (TNF-α ) 和溶菌酶 (LSZ ) 含量 的影 响, 进行 肝组织 病理学 观察, 比较 YLSPS 各个剂量 与模型 组的差 异 。 (3) YLSPS 对 硫唑 嘌呤 致 小鼠肝 损伤的影 响 :建立硫 唑嘌呤 致肝损 伤小鼠 模 型,计算 小鼠肝 、脾 和 胸腺指 数,测 定 小鼠血清 中 ALT 、TBIL 和 DBIL 的活性及 肝组织 匀浆中 SOD 、MDA 、GSH 、NO 的含 量,并 进行肝 组织 病理学观 察,比较 YLSPS 各个 剂量与 模 型组的差 异。 结 果: (1 ) YLSPS 对 甲氨蝶呤 致小鼠 肝损伤的 影响 : 各 个 剂量的 YLSPS 对于 甲 氨蝶 呤 所 致肝 损伤 小鼠 的 肝指 数 均有明 显的 降低 作用 (p0.01 或 p0.05) 。 与 模型组 比较 , 各个 剂量的 YLSPS 对 肝损伤 小鼠胸腺 指数均有 提高 作用 (p0.01 或 p0.05 ) ,但 YLSPS 各剂量 组对 甲 氨蝶呤 所致肝 损 伤 小 鼠 脾 指 数 均 无 影 响 , 无 显 著 性 差 异 (p0.05 ) 。 各 个 剂 量 的 YLSPS 均 能 提 高 甲 氨 蝶 呤 所 致 肝 损 伤 小 鼠 血 清 ALT 、AST 活 性 (p0.01 或 p0.05 ) , 且 YLSPS 和 YLSPS 作用 尤 为显著 (P0.01 ) 。YLSPS 各个 剂 H M 量均能显 著提高 甲氨蝶 呤 所致 肝损伤 小 鼠肝组织中 SOD 的活性 (p0.05 或 p0.01),其中以 YLSPS 作 用最明 显 (p 0.01 ) , 且各个 剂量组 均能 H 降低 甲氨 蝶呤 所 致肝损 伤小鼠 MDA 水 平(p0.05)。YLSPS 各 个剂量 均 能显著 提高 MTX 所 致 肝 损 伤 小 鼠 GSH 和 GSH-Px 水平 (p0.05 或 7 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 p0.01), 其中以 YLSPS 和 YLSPS 作 用最明显 (p 0.01 ) 。 各 个剂量 组 H M 均能降低 小鼠肝 组织中 NO 水平 (p 0.05)。 (2 )YLSPS 对氟尿 嘧啶致 小 鼠肝损伤 的影响:YLSPS 和 YLSPS 对 肝损伤小 鼠的胸 腺指数 均有明 显 M H 的提高作用 (p<0.01 或 p <0.05) , 但 YLSPS 各剂量组 对 氟尿 嘧啶所致 肝损伤小 鼠脾指 数均无 影响 (p0.05 ) 。 各个 YLSPS 剂 量组均可 明显降 低 5-FU 所 致肝损 伤小鼠 血清 AST ,ALT 活性(p0.01 或 p0.05 ) ,其 中 YLSPS 和 YLSPS 两组尤为 显著(p0.01)。YLSPS 和 YLSPS 对氟 H M H M 尿嘧啶 所 致肝损 伤小鼠 血清中 LDH 活性 均有明 显的降低 作用 (p 0.01)。 各个剂量 的 YLSPS 对 氟 尿嘧啶 所致肝 损伤小鼠 血清中 LSZ 和 TNF-α 活 性均有明 显的提高 作用 (p0.01 或 p 0.05) , 其中 YLSPS 组有 显著差 异 H (p 0.01 ) 。 (3 )YLSPS 对硫 唑嘌 呤致 小鼠 肝损 伤的 影响 :YLSPS 和 H YLSPS 均可 提高肝 损伤小 鼠的胸 腺(p 0.01 或 p 0.05 ) ,但 YLSPS 各 M 剂量组对 肝损伤 小鼠脾 指数无 影响 (p0.05) 。YLSPS 各组 均可降 低硫唑 嘌呤致肝 损伤小鼠 ALT 活性 (p 0.01 或 p0.05) ,其中 YLSPS 较为 明 H 显 (p 0.01 ) 。YLSPS 各 组均可 降低硫 唑嘌呤致 肝损伤 小鼠血清 DBIL 含 量(p 0.01 或 p0.05) ,其中 YLSPS 较为显著 (p 0.01 ) 。YLSPS 和 H H YLSPS 均 可 降 低 硫 唑 嘌 呤 致 肝 损 伤 小 鼠 血 清 TBIL 含量 (p 0.01 或 M p0.05) 。 YLSPS 各组均 可提高 硫唑嘌 呤 致肝损伤 小鼠 GSH 活性 (p 0.01 或 p 0.05 ) ,其中 YLSPS 和 YLSPS 尤为显著 (p 0.01 ) 。YLSPS 和 H M H YLSPS 均可 降低硫 唑嘌呤 致肝损 伤小 鼠 NO 活性 (p 0.01 或 p0.05) 。 M YLSPS 和 YLSPS 可提高硫 唑嘌呤 致 肝损伤小鼠 SOD 活性(p0.05 ) 。 H M 与模型组 比较 YLSPS 各组 均有降低 硫唑 嘌呤致肝 损伤小 鼠 MDA 含量的 趋势,但 无统计 意义 (p0.05 ) 。 结 论: YLSPS 对 甲氨 蝶呤 所致 肝损 伤小 鼠具 有保 护作 用 , 其机 制可 能与其抗 氧自由 基、抑 制脂质 过氧化 作 用有关。YLSPS 对氟 尿嘧啶 所致 小鼠肝损伤具有保护作用,其机制可能 与增强非 特异性免疫功能的作用 有关。YLSPS 对硫唑 嘌呤 所 致小鼠肝 损 伤具有保 护作用 ,其机 制可能 与 8 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 其抗氧自 由基、 利胆作 用 有关 。 关键 词 : 玉郎伞多糖; 抗氧自 由基; 肝损伤; 氟尿嘧 啶; 甲 氨蝶呤 ; 硫 唑嘌呤 Protective effect of Yulangsan polysaccharide on liver injury induced by methotrexate, fluorouracil and9 广西 中医 学 院 2008 级硕 士学 位论 文 azathioprine in miceAbstract Objective : To observe the protective effection of Yulangsan polysaccharide YLSPS on liver injuries induced by azathioprine, fluorouracil and methotrexate in mice, and study its mechanism through the change of pathological morphology and biochemical function, to provide the preliminary experimental basis for the research development of the medicine about protecting liverMethods :1 The effects of YLSPS on the mice liver injury by methotrexate: the model of mice liver injury induced by methotrexate were estabilshed, the indexes of liver, spleen and thymus were observed, the activities of ALT and AST in the serum and the contents of SOD, MDA, GSH, GSH-Px and NO in the homogenate of liver were tested, and the pathological changes in liver tissue were observed. 2The effects of YLSPS on the mouse liver injury by fluorouracil: the model of mice liver injury induced by fluorouracil were estabilished, the indexes of spleen and the thymus were observed, the activities of ALT, AST and LDH in the serum and the content of TNF-α and LSZ were tested, and the pathologyical changes in liver tissue were observed. 3The effets of YLSPS on the mouse liver injury by azathioprine: the model of mice liver injury induced by azathioprine were estabilshed, the indexes of liver, spleen and the thymus were observed, the activities of ALT, SOD, MDA, GSH, in the serum and the content of TBIL, DBIL, NO in the homogenate of liver were tested, and the pathological changes in liver tissue were observedResults: The effects of YLSPS on the mouse liver injury by 10 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 methotrexate:1 YLSPS groups could decrease obviously the mice liver index of mouse indured liver by MTX p0.01 or p0.05, when compared with the model groups, each YLSPS group could increase obviously the thymus index p0.01or p0.05, but has no effect on the spleen index p 0.05.2 Each YLSPS dose could increase the activities of ALT and AST in the serum p0.01 or p0.05 of injury liver by MTX, especially in the YLSPS and YLSPS doses p0.01. 3Each YLSPS dose could H M increase the activities of SOD in the homogenate of liver p0.01or p0.05 of injury by MTX, especially in the YLSPS dose p0.01, but decrease H the MDA p0.05.4Each YLSPS dose could increase the activities of GSH and GSH-Px in the homogenate of liver p0.01or p0.05 of injuried by MTX, especially in the YLSPS and YLSPS doses p0.01.5Each H M YLSPS dose could decrease the activities of NO in the homogenate of liver p0.05 of injuried by MTX. The effects of YLSPS on the mice liver injury by fluorouracil: 1 YLSPS groups and YLSPS groups could increase M H obviously the mouse thymus index of mouse injury liver by FU p0.01or p0.05, when compared with the model groups, but has no effect on the spleen index p 0.05. 2 Each YLSPS dose could decrease the activities of AST and ALT in the serum p0.01 or p0.05 of injury liver by FU, especially in the YLSPS and YLSPS doses p0.01. 3 YLSPS and H M H YLSPS could decrease obviously the activities of LDH in the serum M p0.01 of injuried by FU. 4 Each YLSPS dose could increase obviously the activities of LSZ and TNF-α in the serum p0.01or p0.05 of injury liver by FU, especially in the YLSPS dose p0.01. The effects of YLSPS H on the mice liver injury by azathioprine: 1 YLSPS groups and YLSPS M H groups could increase obviously the mouse thymus index of mouse injury live by AZA p0.01or p0.05, but has no effect on the spleen index 11 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 p 0.05. 2 Each YLSPS dose could decrease the activities ALT in the serum p0.01or p0.05 of injury liver by azathioprine, especially in the YLSPS doses p0.01. 3 Each YLSPS dose could decrease the contents H of DBIL in the serum p0.01or p0.05 of injury liver by azathioprine, especially in the YLSPS dose p0.01. YLSPS and YLSPS can both H H M decrease the contents of TBIL in the serum p0.01or p0.05 of injuried liver by azathioprine p0.01or p0.05. 4 Each YLSPS dose could increase the activities of GSH in the homogenate of liver p0.01or p0.05 of injuried liver by azathioprine, especially in the YLSPS and YLSPS H M doses p0.01. 5 Both the YLSPS and YLSPS doses could decrease the H M activities of NO in the homogenate of liver p0.01or p0.05 of injury liver by azathioprine. 6 Both the YLSPS and YLSPS doses could increase the H M activities of SOD in the homogenate of liver p0.05 of injury liver by azathioprine. Compared with the model groups, each YLSPS dose could decrease the activities of MDA in the homogenate of liver of mice liver p 0.05 of injured liver by azathioprine, but without statistical significance Conclusions :YLSPS can protect the mice liver injury induced by methotrexate, and the mechanism may be related to inhibiting free radical and attenuating the lipid per oxidation; YLSPS can protect the mice liver injury indured by fluorouracil, and the mechanism may be related to enhancing function on nonspecific immunity; YLSPS can protect the mice liver injury indured by azathioprine, and the mechanism may be related to oxygen free radicals and cholagogue functionKey words: Yulangsan polysaccharide; antioxidation; liver injury; fluorouracil; methotrexate; azathioprine 12 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文引 言 近年来恶性肿瘤的发病率逐 年增加,死 亡率更高举总体死亡原 因 的 第一位。 在 恶性肿瘤 的治疗 占有重 要地 位, 随着抗 肿瘤 药物 的不断 研发, 13 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 恶性肿瘤的预后有了明显提高,但抗肿 瘤药物引起的不良反应 为肿瘤治 疗带来新的问题。药物性肝损伤是肿瘤 治疗过程中常见的不良 反应,特 别是在肝炎发病率较高的中国,肝脏毒 副作用及具有肝脏基础 病 的肿瘤 患者的治 疗策略 值得关 注。 [1] 对于 抗肿 瘤 药物 引起 肝 损害 的治 疗 , 首先 是停 药 ,其 次 是 使用 保肝 药物。使用抗炎保肝类能清除自由基, 移植自由基与 肝 细胞膜的共价结 合,抗氧化,保护肝细胞膜;抗线粒体 损伤,维持线粒体膜的稳定性; 抗肝细胞核 DNA 降 解, 阻 抑启动 细胞凋 亡信号细 胞色素 C 的释放, 降低 TNF-α 的水 平等, 防止正 常肝细 胞凋亡 ;抑制 TGF-β 的表达 ,抗肝 纤维 化; 具有一 定的免疫 调节作 用; 可能 通 过诱导使 感染病 毒的肝 细胞凋 亡。 如联 苯 双 酯、 维 生 素及 辅 酶 类各 种 水 溶 性维 生 素 ,如 维 生素 C 、 复合 维 [2] 生素 B 及辅酶 A 等 。 有人估计 目前世 界上用 于治疗 肝炎的 药 物有500种 之多 , 新药 不断涌 现, 疗效却 始终不 佳, 事实 上至今 尚无 一种药物 能真正 根治肝 炎。 因此, 开发和筛选对肝脏有确切保护作用的新 药,仍是一项艰巨的工作。在中 国蕴藏着 一个极 具发展 潜力的 肝药市 场 , 美国肝病 权威Popper 教授生 前曾 [3] 预言 : “ 肝炎 根治 的 希望 在中 医药 ” , 中医 药具 有多 层 面多 靶点 的整 体 治疗优势 ,在对 肝脏疾 病的预 防和治 疗 方面有着 极为重 要的意 义。 玉 郎 伞 (YLS ) 原 植 物 经 考 证 为 蝶 形 花 科 植 物 疏 叶 崖 豆Millettia pulchra Kurtz variation (Dunn )Z. Wei 的 块根。民 间常用 于高血 压、跌 打 损伤和风湿,也用于智力减退、消化不 良和病后虚弱等 。本课题组前期 研 究 结 果 表 明 ,YLS 水 提 物 具 有 增 强 免 疫 功 能 、 保 护 化 学 性 肝 损 伤 和 肝 纤 维 化 等 方 面 作 用 , 而YLS 主 要 的 有 效 成 分 玉 郎 伞 多 糖 对 化 疗 药 物 所 致 肝损伤的 作用尚 无研究 。 本课题通过建立 硫唑嘌呤 、 氟 尿 嘧 啶 和 甲 氨 蝶 呤 代 表 肝 纤 维 化 、 混 合型、胆淤型 三种 抗 癌 药 所 致 肝 损 伤 的 实 验 模 型 , 研 究YLSPS 对小鼠脏 器指数,血清及肝脏生化指标 和 肝 组 织 病 理 形 态 学 的影响探讨其对肝脏 14 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 的作用及 可能的 作用机 理。 通过以上的研究将 有助于明确YLSPS 对 肝 脏 的 保 护 作 用 , 也 有 助 于 了解其作用机制,为将YLSPS 开 发 成 为 治 疗 癌症过程中治疗 肝 损 伤 疾 病 的药物 提 供实验 依据。 15 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 正 文 第一部分 玉 郎伞多 糖 对 甲 氨蝶呤 所致小鼠 肝损伤 的保护 作用 1 实验 材料1.1 药品及试剂 (1 ) 玉郎伞 多糖由 本室提 取 (多糖 经定 性检验证 实, 简称为 YLSPS)加 入蒸馏水 配制成 YLSPS 高剂量 (400 mg/kg , 相 当于 30.76 g 生药/kg,简 称为 YLSPS )、YLSPS 中剂量 (200 mg/kg ,相 当于 15.38g 生药/kg ,简 H 称为 YLSPS )、YLSPS 低剂量 (100 mg/kg ,相 当于 7.69g 生药/kg,简 M 称为 YLSPS ),4? 保 存备用 。 L (2 )联苯 双酯滴 丸:浙 江 万邦 药业 有 限 公司 : 批 号:100112; (3 )天门 冬氨酸 氨基转 移酶 (AST ) 试 剂盒,南 京建成生 物工程 研究所 批号:20101114 ; (4 )丙 氨酸 氨基转 移酶(ALT )试 剂盒 ,南京 建成生 物工程 研究 所,批 号:20101114 ; (5 ) 丙二醛 (MDA ) 测试 盒, 南京建 成 生物工程 研究所 , 批 号: 20101102 ; (6 ) 超氧 化物歧 化酶 (SOD ) 测试 盒, 南京建成 生物工 程研究 所, 批号: 20101031 ; (7 ) 谷胱 甘肽转 移酶 (GSH ) 测试 盒, 南京建成 生物工 程研究 所, 批号: 20101112 ; (8 ) 谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 (GSH-Px ) 测 试 盒 , 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所,批号 :20101112 ; (9 ) 一氧化 氮 (NO ) 测 试盒, 南 京建成 生物工程 研究所, 批号: 20101112 ; (10 )甲 氨蝶呤 注射液 (Methotrexate for Injection),山东 普德药 业有限 16 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 公司 ,批 号:国 药准字 H14022462 。 1. 2 实验动物 昆明种小 鼠:SPF 级, 雌雄各 半,体 重 20?2 g ,由 广西医 科大学 实 验动物中 心提供 。试验 动物生 产许可 证 :SCXKG 桂 2003 -0003 , 试验 动物使用 许可证 :SYKG 桂 2003-0005 。 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 饲料 喂养 , 自由 摄食 , 自由 饮水。 1. 3 主要仪器 (1 )可见 光分光 光度计 :上海 精密科 学 仪器有限 公司, 型号 722S ; (2 )电子 天平:Startorius 公司 ,BP190S ; (3 )台式 低速大 容量离 心机: 上海安 亭 科学仪器 厂,型号 TDL-5 ; (4 )旋转 蒸发仪 :上海 亚荣生 化仪器 厂 ,型号 RE-52AA ; (5 )高速 冷冻离 心机: 上海安 亭科学 仪 器厂,型号 TGL-16G-A ; (6 ) 三用 电热恒 温水箱:北京长 源实验 设备厂, 型号 SHH.W21. Cr600 ; (7 ) 生物组 织自动 脱水机 : 孝 感市宏 业 医用仪器 有限公 司, 型号 TS-12U (8 )生物 组织石 蜡包埋 机 :武 汉俊杰 电 子有限公 司,型号 JB-L5 (9 )切片 机 :上 海百基 科技有 限公司 , 型号 Shandon Finesse325 (10 )光 学显微 镜 :OLYMPUS ,型号 BX40 (11 )彩色 病理图 像 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 系统 :MOTIC ,型号 MED6.0 。2 实验 方法 2.1 造模和给药方 法 取健康合 格, 体重 20?2g 的 昆明种 小鼠 60 只, 雌雄各 半, 随机 分成 17 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 6 组, 每组 10 只, 即 : 正常 组 (NC ) 、 甲氨蝶呤 模型组 (MTX)、 联苯 双 酯阳 性对 照 组 (BPDC ) 、 玉郎 伞 高剂 量 组(YLAPS ) 、 玉 郎伞 中 剂量 组 H YLSPS ) 、 玉郎伞 低剂量 组(YLSPS )按给药 容量 20 ml/kg 体重灌胃 M L 给以相应 药物,每 天一次 ,连续 10 天。 除 NC 组外,其他各 组小鼠 于给 药的第 2、4、6、8、10 天按 20ml/kg 腹 腔注射 MTX (5 mg/kg ) , 共 5 次。 2.2 标本采集 全部小鼠 末次给药 16h 后, 摘眼球取 血 ,脱颈椎 处死后 ,迅速 摘取 肝脏、脾 脏、胸 腺称重 ,并取 剩余肝 脏 约 0.5g ,-20 度保 存 。 2.3 肝组织匀浆制 备 选肝脏右 叶用冷 生理盐 水漂洗 去除积 血 ,拭净后 称重, 称取 0.5g 放 入 10mlEP 管? 于冰水 中并加 入为肝 组 织块重 量 9 倍 的生理盐 水 ,再将 EP 管 插入装 有冰水 混合物的 烧杯中 ,用 匀浆机粉 碎组织 。4 ?离心 3500 rpm ,15 min , 取上清 。蛋白 含量测定 按 考马斯亮 蓝法。 2.4 脏器指数的计 算 取血后脱颈椎处死小鼠,在 生理盐水水 浴的冰盘上,快速剖腹取 出 肝脏、脾脏和胸腺,用冰生理盐水漂洗 去除积血,拭净后称重并记录, 计算肝脏 、 脾 脏和胸 腺指数 。 按 如下公 式计算每 g 体重 的脏器 mg 数 作为 脏器指数 。 肝脏指数 =肝脏 重量(mg)/ 体重(g ) ×100% 胸腺指数 =胸腺 重量(mg )/ 体重(g) ×100% 脾 指 数=脾脏重量(mg )/ 体重(g) ×100% 2.5 肝组织 MDA 、NO 、SOD 、GSH 、GSH-Px 和 NO 的 测定 按 试 剂 盒 说 明 书 的 要 求 测 定 肝 组 织 匀 浆SOD ( 黄 嘌 呤 氧 化 酶 法 ) 、 MDA ( 硫代巴 比妥酸 比色法 ) 、组织 中 蛋白含量 用考马 斯亮兰 法测定 。 SOD 活性 测定: - 通过 黄 嘌呤 及 黄嘌 呤氧 化 酶反 应 系统 产 生 超氧 阴离 子 自由 基(O ), 18 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 后 者 氧 化 羟 胺 形 成 亚 硝 酸 盐 , 在 显 色 剂 的 作 用 下 呈 现 紫 红 色 , 在550nm 处有最大 吸收的 特点进 行测定 。 MDA 含 量测定 : 利用MDA与硫代巴比妥酸缩合能形成一种红色化合物,在532nm 处 有最大 吸收 的特点 进行 测定, 按试 剂盒 说明 关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书 操 作。 按如下 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 计算MDA 含量: -1 MDA含量(nmol.ml (A -A / (A -A ×10 样 测 定空白 标准 测 定 空白 GSH 含量 及GSH-Px 活性测 定: 利用琉基化合物与二硫代苯 甲酸反应能 生成一种黄色化合物的特 性 进行测定, 按试剂 盒说明 操作。按 如下 公式计算GSH 含 量及GSH-Px 含量 -1 肝脏GSH含量 (mg 〃mg prot ) (A -A )/ (A -A ) ×0.5 样 空白 标准 空白 ×307/pro 含量 -1 肝脏GSH-Px 活力 (IU. mg prot ) (A -A ) / (A -A ) 非 酶管 酶管 标准 空白 ×20 ×5/3/prot 含量 将10% 的肝匀 浆稀释40倍后 , 按照 试剂盒 提供的方 法测GSH-Px 活力, 即将0.2mL 样 本 与1mmol/L 谷 胱 甘 肽0.2mL 预 温 后 , 快 速 加 入 过 氧 化 氢 溶 液,37 ?准确 反应3min , 终止反 应, 并 通过DTNB 显色法 测定溶 液中GSH 的含量, 并 设?非酶 对照管。 再用考 马 斯量蓝法 测定匀 浆中蛋 白含量 后, 通过计算GSH 的 减少量 以测定 肝匀浆GSH-Px 的 活力。 GSH-Px活力单位定义为:每毫克蛋白质,每分钟扣除非酶反应的作 -1 用, 使反应 体系中GSH 浓 度降低1umol/L 为一个酶 活力单 位, 用U//mg prot 表示。按 以下公 式计算 : GSH-Px 活 力 单 位 (OD 非酶管 -OD 酶管 ) ×165.16* ×稀释倍数 -1 ?反应时 间 (min ) ? 待测浓 度样本 蛋 白质含量 (mg prot/mL ) NO (硝酸 还原酶 法)的测 定按试 剂盒操 作说明。 制备微粒 体 处死 动物 后, 取部 分肝 组织 , 加入2 倍 体积 的预 冷PBS 液 (磷 酸盐 缓 19 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 冲液) , 用 组织匀 浆机制 备成肝 匀浆液 ,取肝匀浆 液以8000 r/min ~10000 r/min 转 速离 心15 min , 再将 上清液 以40000 r/min 转 速离 心30min , 所 得沉 淀即为微粒体。加入冰浴匀浆介质制备 成混悬液 , 用超声波粉碎微粒体 后可进行 各种生 化指标 的检测 。以上 步 骤均须在2 ~4? 环境中 完成。 2.6 血清生化指标 的测定 : 摘除小鼠 眼球取 血, 将 凝固的 血液于3000 rpm 离心10 min , 分离血 清, 按各试剂 盒说明 书的要 求测定 血清中 的AST (赖氏法 ) 、ALT ( 赖氏法) 。 2.7 肝组织病理学 检查 小鼠取血后,腹部做环形切 口,暴露门 静脉及下腔静脉 , 用 针 头 自 门静脉远 端刺入约 1 cm 左右 ,用 30 ml 37 ? 肝素 化的生 理盐水 经肝门 静 脉冲洗肝脏,待肝脏充盈后剪断下腔静 脉。观察肝脏颜色并检查有无凝 血, 颜色均 匀变淡, 无凝血 者继续 试验 , 持续冲洗 大约 3 min 肝脏 颜色渐 白。在整个灌流的过程中,间歇压迫下 腔静脉使肝脏膨胀与回缩交替 , 以利于肝脏与灌流液充分接触。冲洗完 成后取肝左叶相同部分 , 切成厚 度约 2 mm 的 组织 块 , ?于 4 ?10 % 甲 醛固定液 中过夜 、 脱 水、 透 明、 石 蜡包埋 , 常规切 片 , 片厚 5 μm 。用二 甲 苯脱蜡 , 经各级 乙醇至 水洗: 二 甲苯 5 min ×2 次; 逐 层乙醇 复水:100% 乙醇 2min?95% 的乙醇 2 min ? 80% 乙醇 2 min?75% 乙醇 1 min?50% 乙醇 1 min?30% 乙醇 1 min , 蒸 馏 水洗 1 min ; 苏木素 染色 5 min ; 自 来水 洗 1 min ; 盐 酸乙醇 分化 30 s,自 来水浸泡 7 min ; 放?伊 红液中 2 min ; 常规脱水, 透明, 中 性树胶 封片; 光学显微 镜下观 察。 2.8 统计学方法 xs计量数据采用 ,组间 进行 t 检验 ,数 据采用 Microsoft Excel 统计软件 分析处 理。 20 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 3 实验 结果 3.1 YLSPS 对 MTX 致 肝损伤 小鼠肝 、脾 、胸腺指 数的影 响 xs 表 1-1 YLSPS 对 MTX 致肝损伤小鼠 肝、脾、 胸腺指 数的影 响( ) -1 -1 -1 -1 组别 n 剂量/mg.kg 肝指数/mg. g 脾指数/mg. g 胸腺指数/mg. g NC 10 - 32.78 ?2.89 3.54 ?0.29 3.62 ?0.37 ?? ?? ?? MTX 10 - 53.23 ?2.18 1.25 ?0.16 1.18 ?0.77 21 广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 ** ** BPDC 10 400 37.76 ?2.64 3.43 ?0.34 3.10 ?0.19 ** ** 38.28 ?4.11 YLSPS 10 400 1.61 ?0.69 2.88 ?0.84 H * ** YLSPS 10 200 41.16 ?4.23 1.76 ?0.95 2.59 ?0.65 M * * YLSPS 10 100 44.43 ?3.21 1.85 ?0.72 2.06 ?0.78 L ? ?? 注:与空白 组比较 p0.05 , p 0.01 ;与模型 组比 较 *p0.05 ,**p0.01 。70 ?? * 60 * ** ** 50 ** 肝指数 40 脾指数 30 胸腺指数 20 ** ** * ** ** ** * ** ** 10 0 NC MTX BPDC YLSPSH YLSPSM YLSPSLxs 图 1-1 YLSPS 对 MTX 致肝损伤小鼠 肝、脾、 胸腺指 数的影响( ) 表1-1和图1-1 结果显 示, 与正 常组比 较, 模型组的 小鼠肝 指数均 明显 增大, (p <0.01 ) 。 对于MTX 所 致肝损伤 小鼠, 各个剂量 的YLSPS 对 肝指 数均有明 显的降 低作用 , 统 计学有 意义 (p <0.01 或 p <0.05) ; 注射MTX 后, 模 型组小 鼠的胸 腺指数 和脾脏 指数 显著低于NC 组, 说明MTX 使小 鼠 免疫受到 明显抑 制, 胸腺、 脾 脏重量 显 著减轻 (p <0.01 ) 与模型 组比较 , 各个剂量 的YLSPS 对 胸 腺指数 均有明 显 的 提高作用 , 统计学 有意义 (p < 0.01 或 p <0.05 ) ,但YLSPS 各 剂量 组 对MTX 所致 肝 损伤 小 鼠 的 脾 指数 均 无影响, 无显著 性差异 (p0.05)。 22 -1 mg.kg广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文3.2 YLSPS 对 MTX 致 肝损伤 小鼠血清 ALT 和 AST 的 影响 xs 表 1-2 YLSPS 对 MTX 致肝损伤 小鼠血清 ALT 和 AST 的影响( ) 注:与 空白组 -1 -1 组别 n 剂量 AST/U.ml ALT/U.ml ? 比较 p0.05 -1 ?? /mg.kg , p 0.01 ; 与模型 1 组比较 *p0.0 NC 0 - 28.37 ?5.96 42.86 ?5.88 5, 1 **p0. ?? ?? 01。 MTX 0 - 67.51 ?6.47 90.11 ?5.41 1 ** ** 120 BPDC 0 400 36.48 ?6.82 64.06 ?0.98 ?? YLSPS 1 100 ?? ** ** * 0 400 37.52 ?9.62 57.43 ?9.45 H ** ** * ** 80 ** YLSPS 1 ** ** ** ** AST 0 200 48.26 ?10.17 66.74 ?11.36 M ** 60 ** ALT YLSPS 1 * * 51.43 ?14.13 76.12 ?15.20 40 0 100 L 20 0 0 NC MTX BPDC YLSPSH YLSPSM YLSPSL图 1-2 YLSPS 对 MTX 致肝损伤小鼠血清 ALT 和 AST 的影响 表1-2和图1-2 结果显 示,与正 常组比 较 ,模型组小鼠AST 、ALT 活性 均 明 显 升 高 , 统 计 学 有 显 著 差 异 (p0.01 ) 。 与 模 型 组 比 较 各 个 剂 量 的 YLSPS 小 鼠 血 清ALT 、AST 活 性 均 明 显 降低 , 有 统 计 学 意 义 (p0.01 或 p0.05 ) , 其中YLSPS 和YLSPS 作用最 明显(p0.01 ) 。 H M 3.3 YLSPS 对MTX 致肝损 伤小鼠 肝组织MDA 、SOD 、GSH 、GSH-Px 和NO 的影响 xs 表 1-3 YLSPS 对 MTX 致肝损伤小鼠血 清 SOD 和 MDA 水平的 影响( ) -1 -1 -1 组别 n 剂量/mg.kg SOD///.t MDA///.t 23 -1 U.ml广西 中医 学院 2008 级硕 士学 位论 文 NC 10 - 34.15 ?0.46 15.63 ?4.72 ?? ?? MTX 10 - 20.06 ?5.87 38.69 ?11.38
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分类:初中语文
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