[word doc]长萼小连翘中金丝桃素的含量测定

[ word word文档格式规范word作业纸小票打印word模板word简历模板免费word简历 doc]长萼小连翘中金丝桃素的含量测定 长萼小连翘中金丝桃素的含量测定 时珍国医国药2010年第21卷第8期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VO L?21NO?8 JTBSD组BNPH组 囤2frBSD对STZ所致DM大鼠的肾脏细胞因子TGF—B,的影响 (免疫组化染色,100×) 3讨论 BUN和SCr都是机体蛋白质代谢产物,它们的浓度取决于 氮的分解和肾的排泄功能,在摄入食物及体内分解代谢比较稳定 的情况下,其浓度的多少取决于肾的排泄能力.因此,血清肌酐 和尿素氮浓度在一定程度上可反映肾小球的滤过功能.DN 时,原有的肾脏功能遭到破坏,BUN,SCr和CCr上升,双肾滤过 率逐渐下降.TGF—B是一种多向性,多效性和多功能的细胞因 子.在哺乳动物中存在三种形式的TGF—p,分别为TGF—B., TGF—B2,TGF一,其中TGF—p1所占比例最高(>90%),活性 也最强,是起主要作用的TGF—p因子J.TGF—p与其受体 (T13R)结合后,通过细胞膜上的Smad蛋白可将TGF—B信号从 细胞 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面传至细胞核内,从而调节靶基因的转录.TGF—B, 在DN进展中发挥着重要的作用,其介导肾脏病变的机制有如下 几点:@TGF—p刺激ECM积聚;?抑制细胞增殖,促进细胞肥 大;?促进细胞凋亡;?改变细胞表型;?与其他细胞因子的相互 作用.本实验表明JTBSD能明显降低DM大鼠的BUN,SCr,CCr, 能够使DM大鼠肾组织系膜基质增生减轻,肾小球硬化明显减 轻,血管水肿减轻,使DM大鼠肾组织中TGF—p.表达明显减 少.JTBSD对DM大鼠肾脏具有明显的保护作用,其作用机制可 能与防止肾脏功能改变,减轻大鼠肾脏组织病理改变,抑制肾脏 细胞因子TGF—,的表达有关. 参考文献: [1]J~ickle—MeyerI,SzukicsB,NeubauerK,eta1.Extracelhlarmatrix proteinsasearlymarkersindiabeticnephropathy[J].EurJClinChem ClinBiocbem,1995,33(4):211. [2]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学,第3版[M].北京:人民 卫生出版社,2003:1220. [3]冯文焕,高鑫,叶真,等.尿TGF—B,,层粘连蛋白,?型胶原 与2型糖尿病肾病的关系[J].中华内分泌代谢杂志,2003,19(5): 393, [4]SchnaperHW,HayashidaT,HubchakSC,eta1.TGF—betas8l transductionandmesangialcellfibrogenesis[J].AmJphysidRenal physiol,2003,284(2):243. [5]LawrenceDA.Latent—TGF—beta:anoverview[J].MolCellBio? chem,2001,219(1):163. 长萼小连翘中金丝桃素的含量测定 王发松,李云和 (1.生物资源保护与利用湖北省重点实验室(湖北民族学院),湖北恩施445000; 2.中山大学肿瘤防治中心,广东广州510060) 摘要:目的建立利用HPLC法测定长萼小连翘Hypericumerectumssp.1ongisepalum中金丝桃素含量的方法.方法Supe1. cosilODS色谱柱(4.6mm×250mm,5m),流动相为甲醇:乙腈:水:0.3%磷酸=45:50:4.5:0.5(三乙胺调pH 值至6.0),检测波长590llm,流速1ml/min,线性范围4.38—44.7g/m1.结果相同生境下的长萼小连翘中金丝桃素含 量约为贯叶连翘中的3.6倍;长萼小连翘中金丝桃素的含量随着海拔高度的升高呈逐渐下降趋势;金丝桃素在长萼小连 翘各部位中以花和幼果中含量最高,可高达0.774%,1.136%,在叶中的含量也可高达0.4%左右,但在根和茎中含量极 低.结论长萼小连翘中金丝桃素含量明显高于贯叶连翘,其可能成为一种金丝桃素新优植物资源. 关键词:长萼小连翘;金丝桃素;高效液相色谱法 DOI标识:doi:10.3969/j.issn.1008-0805.2010.08.025 中图分类号:R284.2文献标识码:B文章编号:1008-0805(2010)08—1906-02 长萼小连翘Hypericumerectumssp.1ongisepalum系藤黄科金 丝桃属植物….金丝桃素(hypericin)是金丝桃属植物中具有抗 艾滋病病毒等多种逆转录病毒,抗抑郁和抗肿瘤等生理活性的成 分,也是该属植物的特征成分之一.其不同纯度产品广泛应 用于抗抑郁食品补充剂,神经保健剂,动物抗病毒饲料添加剂等, 同时又是抗艾滋病病毒(HIV病毒)新药的热点化合物J.过 去对金丝桃素的源植物及应用开发研究主要集中在贯叶连翘H peororatumL..关于长萼小连翘的相关研究报道是在近期才见, 收稿日期:2009—10-13;修订日期:2010-03-10 基金项目:湖北省教育厅科技研究计划优秀中青年人才项目资助 (Q2oo829O1) 作者简介:王发松(1969-),男(土家族),湖北巴东人,现任湖北民族学院 副教授,硕士研究生导师,博士学位,主要从事天然药物化学与制备工程 研究工作. 如白洁等利用HPLC/DAD/ESI2MS分析鉴定了湖北巴东产 长萼小连翘的化学成分,明确该植物中含有金丝桃素和伪金丝桃 素等成分.而我们在进一步对该植物金丝桃素的含量测定中发 现,其全株中金丝桃素的含量显着高于贯叶连翘这一传统金丝桃 素植物资源.因此,我们对该植物资源进行了深入的金丝桃素含 量分析,为长萼小连翘这一新的含量更高的金丝桃素植物资源的 开发利用奠定基础. 1仪器与材料 1.1HPLC检测仪器DIONEXP680HPLCPUMP泵;DIONEX UVD170U紫外检测仪. 1.2药品金丝桃素对照品(HPLC法自制,纯度96.34%). 1.3材料花果期(8,10月)野生长萼小连翘全株实验材料采 自湖北巴东大支坪至耀英坪一带,海拔900,1450m,按不同海 拔和部位对实验材料分类后阴干.花期(8月)野生贯叶连翘材 料采自湖北巴东大支坪,海拔980113,生境与同海拔下的长萼小 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010V OL.21NO.8时珍国医国药2010年第21卷第8期 连翘相同,采集部位为花枝20,40cm部分,阴干. 2方法与结果 2.1色谱条件SupelcosilODS色谱柱(4.6am×250mm,5 txm);流动相:等度洗脱,甲醇:乙腈:水:0.3%磷酸=45: 50:4.5:0.5(三乙胺调pH值至6.0);检测波长:590nm;流 速:1mL/min. 2.2对照品与供试品溶液制备 2.2.1样品溶液的制备样品粉碎,过40目筛,分别称取5.00g 于三角烧瓶中加入50毫升95%的乙醇避光超声提取3次,每次 20min,过滤,合并滤液,45%以下减压浓缩除去部分溶剂,定容 为250ml.0.45m微孔滤膜过滤后,进样分析. 2.2.2金丝桃素 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线的测定精密取金丝桃素对照品溶液 (40m1)1.0,2.0,4.0,5.0,10.0ml于10ml容量瓶,甲醇定容 至刻度,为1,2,3,4,5号对照品溶液,混均,0.45p,m滤膜过滤. 各浓度对照品溶液分别以20l进样3次,以平均峰面积A对浓 度C进行线性回归,得回归方程:A=439763C+305002,相关 系数r=0.9991,线性范围4.38,44.7ml. 2.3方法学考察 2.3.1精密度取金丝桃素对照品溶液重复进样5次,计算峰面 积RSD.RSD=3.11%. 2.3.2稳定性取金丝桃素对照品溶液,于0,4,8,12,24h分别 进样分析,计算峰面积的RSD.RSD=4.18%. 2.3.3重复性取同一批样品5份,每份约5mg,按上述操作平 行测定5次,计算金丝桃素含量的RSD.RSD=1.29%. 2.3.4加样回收率取已知金丝桃素含量的样品5份,每份约5 mg,精密加入金丝桃素对照品溶液(40m1)1ml,按上述操作 测定峰面积,计算加样回收率.平均加样回收率为100.7%, RSD=3.46%. 以上结果表明该方法符合含量测定的要求. 2.4含量测定按”2.2”项下制备每种待测样品的溶液,进样量 101.测定结果见表1,2. 3讨论 从测定结果可以看出,长萼小连翘全株中的金丝桃素含量与 产地的海拔有关,随着海拔高度的升高金丝桃素的含量呈逐渐下 降趋势.根据我们对模式标本产地附近的湖北恩施,建始,宣恩, 利川等海拔250in至1450m的山地资源采集与调查,在海拔 980m以下和1500In以上的山地未见有长萼小连翘分布.但相 同产地(海拔980rn)的长萼小连翘中的金丝桃素含量约为贯叶 连翘中的3.6倍.由于长萼小连翘金丝桃素的含量显着高于贯 叶连翘这一传统金丝桃素植物资源,提示长萼小连翘可能成为一 种金丝桃素新优植物资源. 表1贯叶连翘和不同海拔长萼小连翘中金丝桃素的含量% 表2海拔1240rn野生长萼小连翘不同部位金丝桃素的含量% 金丝桃素在长萼小连翘各部位中以花和幼果中含量最高,可 高达0.774%,1.136%,在叶中的含量也可高达0.4%左右,但 在根和茎中含量极低. 通过对长萼小连翘不同海拔(980,1680II1)所产和不同部 位的含量测定,可以为长萼小连翘这一可能的金丝桃素新优植物 资源在进一步的人工种植和科学采收研究中给予提示和指导. 就以上测定结果可以初步设定其第1阶段的人工栽培实验适宜 地为鄂西山区海拔1000in左右,以尚带少量花的幼果期为最佳 采集期,以带叶,花和果的枝条为最佳采集部位,并可留根翌年发 芽而可持续采收. 另一方面,进一步开展对长萼小连翘这一高含量的金丝桃素 新植物资源在化学,药理和资源保护方面的研究工作,可为其应 用开发奠定基础. 参考文献: [1]吴立宏,杨得坡,王发松,等.国产金丝桃属(藤黄科)新植物[J]. 植物分类,2004,42(1):73. [2]祝艳华,张忠,毛景东.金丝桃素抗病毒作用的研究进展[J].内 蒙古民族大学,2008,14(4):100. [3]YvesP,AllisonAJ,ChristopheM.IntegraseInhibitorstoTreatHIV/ AIDS[J].NatureReviews(DrugDiscovery),2005,3(4):236. [4]许以明,陆传宗.人类免疫缺损病毒(HIV)的空间结构及金丝桃蒽 酮素诱导的HIV光敏损伤的Raman光谱研究[J].中国科学C辑, 2004,34(5):44_4. [5]胡冬华,高颖,邵琛,等.贯叶连翘有效成分金丝桃素与HIV逆 转录酶相互作用的研究[J].分子科学,2008,24(4):280. [6]白洁,王冬梅,杨得坡.长萼小连翘醇提物中黄酮类与金丝桃 素类成分的HPLC/DAD—MS联用分析[J].分析测试, 2008.27(2):185. ? 1907?