RNA分子生物学参考题及答案

名词解释: 1.imprinted RNA 某些基因呈不遵从孟德尔定律的亲源依赖性单等位基因表达, 其另一等位基因不表达或表达极弱,具有这种现象的基因被称为印迹基因。基因组印记(genomic imprinting),又称遗传印记(genetic imprinting)或亲本印记(parental imprinting),指控制某一表型的一对等位基因由于亲源不同而差异性表达,即机体只表达来自亲本一方的等位基因。由印记基因转录的非编码RNA即imprinted RNA。 2.染色质免疫共沉淀 在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。流程:甲醛处理细胞---收集细胞,超声破碎---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联,纯化富集的DNA-片断---PCR 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 。 3.lncRNA Transcripts longer than 200 nucleotides that have little or no protein-coding capacity. Long ncRNAs can regulate gene expression through a diversity of mechanisms. 4.snRNA 细胞内有小核RNA(small nuclearRNA,snRNA)。它是真核生物转录后加工过程中RNA 剪接体的主要成分,参与mRNA前体的加工过程。现在发现有五种snRNA,其长度在哺乳动物中约为100-215个核苷酸。snRNA一直存在于细胞核中,与40种左右的核内蛋白质共同组成RNA剪接体,在RNA转录后加工中起重要作用。另外,还有端粒酶RNA它与染色体末端的复制有关;以及反义RNA,它参与基因表达的调控。 5.piRNA piRNA(piwi-interactin RNA), 是近年来新发现的一类内源性非编码的小RNA 分子, 大小集中在26-31nt, 能够特异性地同Argonuat 蛋白家族中的Piwi 亚家族蛋白结合,主要在生殖细胞中表达,与精子发生,生殖细胞成熟相关。 6.gRNA gRNA即引导RNA,是引导RNA编辑的RNA分子,长度大约是60~80个核苷酸,是由单独的基因转录的,具有3’寡聚U的尾巴,中间有一段与被编辑mRNA精确互补的序列,5’端是一个锚定序列,它同非编辑的mRNA序列互补。在编辑时,形成一个编辑体,以gRNA内部的序列作为模板进行转录物的校正,同时产生编辑的mRNA。gRNA 3’端的oligo(U) 尾可作为被添加的U的供体。 7.RNA编辑 是指在RNA水平上改变遗传信息,导致成熟RNA编码序列和它的转录模板之间不匹配,信息改变的方式包括碱基取代、插入或缺失等。 8.细菌非编码RNA 细菌非编码RNA(small non-coding RNA, sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸, 不编码蛋白质的RNA。迄今, 在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识 别靶标mRNA, 在转录后水平调节基因的表达, 是细菌代谢、毒力和适应环境压力的重要调节因子。 9.基因沉默 基因沉默是指生物体中特定的基因由于种种原因不表达. 基因沉默发生在两种水平上,一种是由于DNA甲基化、异染色质化以及位置效应等引起的转录水平上的基因沉默(tran-scriptional gene silencing,TGS),另一种是转录后基因沉默(post-transcriptional gene silen-cing,PTGS),即在基因转录后的水平上通过对靶标RNA进行特异性降解而使基因失活。在这两种水平上引起的基因沉默都与基因的同源性有关,称为同源依赖性的基因沉默(homology-dependent gene silencing,HDGS)。 10.mRNA剪接 mRNA前体去除掉内含子而保留外显子的修饰过程。 11.microRNA MicroRNA (miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子,它们在动植物中参与转录后基因表达调控。到目前为止, 在动植物以及病毒中已经发现有4361 个miRNA 分子。大多数miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster) 的形式存在于基因组中。 12.mRNA messenger RNA,携带从DNA编码链得到的遗传信息,并以三联体读码方式指导蛋白质生物合成的RNA,由编码区、上游的5′非编码区和下游的3′非编码区组成。约占细胞RNA总量的3%~5%。真核生物mRNA的5′端带有7-甲基鸟苷-5′-三磷酸的帽子结构和3′端含多腺苷酸的尾巴。由核内不均一RNA剪接而成,可作为模板指导 翻译 阿房宫赋翻译下载德汉翻译pdf阿房宫赋翻译下载阿房宫赋翻译下载翻译理论.doc 产生具有特定氨基酸序列蛋白质的RNA。携带从DNA编码链得到的遗传信息,在核糖体上翻译产生多肽的RNA。 13.XIST X-inactive specific transcript的缩写,属于Imprinted RNA,具有一些特性1.仅仅在多于一条X染色体的细胞中转录。2.仅仅转录两条X染色体中的一条,随机转录父方或母方来源的X染色体。3.不编码蛋白质,整个RNA作为功能分子。4.XIST从其转录的位点包裹产生它的X染色体,从而使染色体失活。 14.RISC RNA-induced silencing complex (RISC):一种RNA-蛋白质复合物,通过与目标mRNA完全或者部分的互补配对来实施切割或者翻译抑制功能。SiRNA组装siRISC,miRNA组装miRISC。RISCs(无论siRISC还是miRISC)包括两种类型:切割型和不切割型。现在的研究表明,RISC当中的AGO蛋白质决定了RISC是切割型的还是不切割型的。 15.Drosha Drosha is a Class 2 RNase III enzyme responsible for initiating the processing of microRNA (miRNA), or short RNA molecules naturally expressed by the cell that regulate a wide variety of other genes by interacting with the RNA-induced silencing complex (RISC) to induce cleavage of complementary messenger RNA (mRNA). A microRNA molecule is synthesized as a long RNA primary transcript known as a pri-miRNA, which is cleaved by Drosha to produce a characteristic stem-loop structure of about 70 base pairs long, known as a pre-miRNA. Drosha exists as part of a protein complex called the Microprocessor complex, which also contains the double-stranded RNA binding protein Pasha (also called DGCR8), which is essential for Drosha activity and is capable of binding single-stranded fragments of the pri-miRNA that are required for proper processing. 16.Dicer 是RNase III家族中特异识别双链RNA的一员,它能以一种ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因,病毒感染等各种方式引入的双链RNA,切割将RNA 降解为19-21bp的双链RNAs(siRNAs),每个片段的3’端都有2个碱基突出。Dicer 在催化过程中以二聚体的形式出现,其催化结构域在dsRNA上反平行排列,形成4个活性位点,但只有两侧的2个位点有内切核酸酶活性。 17.Northern Blot Northern杂交是利用DNA可以与RNA进行分子杂交来检测特异性RNA的技术,首先将RNA混合物按它们的大小和分子量通过琼脂糖凝胶电泳进行分离,分离出来的RNA转至尼龙膜或硝酸纤维素膜上,再与放射性标记的探针杂交,通过杂交结果可以对表达量进行定性或定量。Northern杂交与Southern杂交相比,条件要严格些,特别是RNA容易降解。 问答题: 1.Piwi 亚家族蛋白有哪3 种蛋白成员,如果它们突变或缺失对生殖细胞有什么影响? 答:MIWI、MILI 和MIWI2 (主要局限于生殖细胞中表达), MILI、MIWI 在精子发生过程的不同阶段先后表达,三者的突变会引起精子发生出现显著缺陷,致使雄性不育。 2.RNA编辑的部位和作用 在RNA的5’区域、编码区、3’非翻译区及Poly(A)尾都可发生RNA编辑,使mRNA 获得功能,翻译成功能性的蛋白质。其作用有: ①产生起始位点。CyB、COIII、MURF3基因没有AUG起始密码子,通过RNA编辑后, 在阅读框内创造了AUG。 ②创造连续的或延续的开放阅读框。布氏锥虫中的COIIImRNA有55%发生了剪辑,在 731个核苷酸区域内的145个位点增加了407个Us,在9个位点删除了19个Us。 ③产生终止密码子。COIIImRNA通过剪辑在3’端产生终止密码子。 ④在Poly(A)尾中添加Us,由此影响mRNA的稳定性,从而影响mRNA和蛋白质的 丰度。 3.按照细菌非编码RNA(sRNA)发挥功能的机制不同,可将其分为哪几类? 答:不同的sRNA发挥功能的机制不同。按照发挥生物学功能的形式,目前可以把细菌非编码RNA分为3类。 (1)行使管家功能的sRNA。它们是高度表达并且是必需的。目前至少发现3种该类型 的sRNA,包括具有酶催化活性并形成RNaseP的催化亚单位M1 RNA、转移信使tmRNA及组成核糖核蛋白(RNP)复合物的4.5S RNA。 (2)蛋白质结合sRNA。如6S RNA在原核生物中高度保守并且在稳定期逐渐积聚,它 能够与?70-RNA聚合酶相互作用并改变它对启动子识别的特异性。 (3)与mRNA相互作用的调控sRNA。这是细菌sRNA发挥调节功能最为普遍的一种形 式,目前发现的细菌sRNA绝大多数都属于这个类型。 总分100 考勤20 平时作业5 Talk 35 开卷考试40