铁皮石斛研究

铁皮石斛化学成分研究 一、前言 1、药材现状： 铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Migo)又名铁皮兰、黑节草，系兰科植物铁皮石斛的新鲜或干燥茎，分布于安徽、浙江、福建、广西和云南等 地，生于树干或岩石上。现已通过人工组培方法，大田栽培获得成功，近年在浙江、云南等地已形成较大种植规模。铁皮石斛收载于历版《中国药典》，在《中国药典》2010 年版以前均列于石斛项下，为石斛的来源之一。因石斛药材品种多，来源复杂，性状和质量差异较大，铁皮石斛的性状、化学成分等与金钗石斛、马鞭石斛等均不同，如金钗石斛含石斛碱类成分而铁皮石斛无; 金钗石斛和马鞭石斛均有苦味，铁皮石斛味淡，嚼之有黏性; 金钗石斛与马鞭石斛直径较粗，铁皮石斛直径细小; 金钗石斛和马鞭石斛一般只作黄草使用，价格便宜，而铁皮石斛加工成价格昂贵的枫斗，故于2010 年版《中国药典》将铁皮石斛从石斛中分列出来，单列为一个品种。近代研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，铁皮石斛具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用，在治疗胃肠道疾病和增强免疫等方面也具有较好疗效［ 1-3 ］。通过查阅文献，我们发现铁皮石斛化学成分的研究基础非常薄弱，未有系统研究铁皮石斛与非铁皮石斛在化学成分方面的差异，故有必要对其区别性成分进行系统研究。 2、化学成分研究： 从铁皮石斛中分离得到了20个化合物,分别鉴定为3, 4′2 -二羟基-5-甲氧基联苄(1) ,二氢白藜芦醇(2) , dendromoniliside E (3) , denbinobin (4) , 2, 4, 7-三羟基29, 10-二氢菲(5) ,钩状石斛素(6) , ( - ) -loliolide (7) ,腺苷(8) ,尿苷(9) ,鸟苷(10) ,蔗糖(11) , 52羟甲基糠醛(12) ,反式阿魏酸二十八烷基酯(13) ,对羟基反式肉桂酸三十烷基酯(14) ,对羟基顺式肉桂酸三十烷基酯(15) ,胡萝卜苷(16) ,β2谷甾醇(17) ,十六烷酸(18) ,三十一烷醇(19)及十七烷酸(20)。[ 4 ]化合物1～20均为首次在铁皮石斛中分离得到。其中化合物1-10的化学结构式见图（1） 图(1)　化合物1～10的结构式 二、实验仪器与 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 （1）药材 药材于2006年采自于浙江省义乌市,由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员鉴定为铁皮石斛D. candidum。 （2）实验仪器与试剂 Perkin Elmer 341 旋光仪; Inova 501 及VarianUnity 600型核磁共振仪( TMS内标) ; 质谱仪(AGZAB 2F型质谱仪) ;Waters Pre LC, 2487双波长检测 器;制备色谱柱为Waters SymmetryPrep C18 column(718 mm ×300 mm, 5μm) ;柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂) ; GF254和HF254薄层板(烟台汇友硅胶开发有限公司) ; Sephadex LH220 和Sephadex G225( Pharmacia) ; HP2MGL 型大孔树脂(三菱) ;色谱纯试剂为Burdick&Jackson;实验所用试剂分析纯试剂均为北京化工厂生产。药材于2006年采自于浙江省义乌市,由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员鉴定为铁皮石斛D. candidum。 挥干溶剂 三、实验步骤与结果 干燥的铁皮石斛药D.candidum 2.6 kg粉末 8倍量乙酸乙酯回流提取3次,提取时间分别为1.5, 1, 1 h 提取液 药渣 用95%乙醇回流提取1遍, 70%乙醇回流提取2遍,合并提取液减压浓缩 减压浓缩 乙酸乙酯提取物57g （下见 流程 快递问题件怎么处理流程河南自建厂房流程下载关于规范招聘需求审批流程制作流程表下载邮件下载流程设计 图2） 乙醇提取物350g 混悬于水中,依次用石油醚、氯仿及正丁醇萃取（下见流程图3、4、5） 石油醚萃取物20 g,氯仿萃取物20 g,正丁醇萃取物70 g。 流程图1 乙酸乙酯提取物57g 硅胶柱( 100 ～200目)进行分离,用石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱 13个流分( Fr. 1～13) Fr.4 Fr.3 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 化合物13(60mg) 化合物19(50mg) 和20 (30mg) Fr.5 重结晶 化合物17 (4g) Fr.6 硅胶柱色谱(300～400目) ,流动相用石油醚-丙酮梯度洗脱 6 个亚流分( Fr.6a-Fr.6f) 流程图2 Fr.6f Fr.6d Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 化合物14(20 mg) Fr16b′ Fr16a′ 重结晶 化合物4(1mg) 制备HPLC (53%甲醇,流速3 mL·min- 1 ) 化合物1(28mg) Fr.7 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 Fr.7e 5个亚流分( Fr.7a～Fr7e) Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 化合物15(10mg) 流程图2 Fr.9 硅胶柱色谱(300～400目) , 流动相用石油醚-丙酮梯度洗脱 Fr.9b 6 个亚流分( Fr.9a-Fr.9f) 制备HPLC(37%甲醇; 流速3 mL ·min- 1 ) 化合物2(4mg)和化合物5(5mg) Fr.9a Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化, 制备HPLC ( 37% 甲醇,流速3 mL ·min- 1 ) Fr.12 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 柱色谱 化合物7(8mg) Fr.13 通过制备HPLC ( 30 min 内由 20%甲醇梯度洗脱至80%甲醇;流速3 mL·min- 1 ) 2个亚流分( Fr.12a-Fr.12b) Fr.12b 通过制备HPLC (30 min内由10%甲醇梯度洗脱至80%甲醇;流速3 mL ·min- 1 ) 化合物3(4.6mg) 化合物9(3.5mg) 流程图2 石油醚萃取物20 g, 硅胶柱(100～200目)进行分离,用石油醚2乙酸乙酯系统梯度洗脱 5个流分( Fr. 1～Fr.5) Fr.5 Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 Fr. 2 Fr.3 化合物16(50 mg) 重结晶 流分 化合物17( 2.5 g) 化合物18 ( 2 g) 流程图3 Fr.1 氯仿提取物20 g Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 硅胶柱(300～400目)进行分离,用氯仿2甲醇系统梯度洗脱 化合物17(150 mg) 10 个流分( Fr. 1～Fr.10) 流程图4 Fr.6 Fr.2 通过制备HPLC(28%甲醇; 流速4 mL ·min- 1 ) 通过制备HPLC(10%甲醇,流速3 mL ·min- 1 ) 化合物6(20mg) 化合物12(5.5 mg) Fr.9 Fr.7 通过制备HPLC (15%甲醇;流速3 mL·min- 1 ) Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化 化合物8( 3.5 mg) 化合物16 (200 mg) Fr.10 重结晶 化合物11(300 mg) 流程图4 正丁醇萃取物70 g 用水超声溶解,过滤,取滤液上HP2MGL 型大孔树脂柱,依次用水、10%乙醇、30%乙醇和60%乙醇进行洗脱,每个梯度洗脱至洗脱液颜色变浅,减压回收溶剂, 60%乙醇洗脱物10 g 10%乙醇洗脱物3 g 30%乙醇洗脱物10 g 水洗脱物45g 通过制备HPLC (15min由10%甲醇梯度洗脱至20%甲醇,后15 min由20%甲醇梯度洗脱至50%甲醇;流速3 mL·min- 1 ) 化合物10 (6.5 mg)和化合物8 (20 mg) 流程图5 四、化合物结构鉴定 化合物1 　无色针晶; 1H-NMR (MeOD, 500MHz) δ: 6.96 ( 2H, d, J = 8.5 Hz, H-2′, 6′) , 6.67(2H, d, J = 8.5 Hz, H-3′, 5′) , 6.21 (1H, br s, H-2) ,6.20 (1H, br s, H-6 ) , 6.17 ( 1H, d, J = 2.0 Hz, H-4) , 3.69 ( 3H, s, OCH3-5) , 2.74 ( 4H, m, H-α,α′) 。以上波谱数据与文献[ 5 ]报道基本一致,故确定其为3, 4′-二羟基-5-甲氧基联苄。