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淀粉、总糖、还原糖的测定方法

淀粉、总糖、还原糖的测定方法淀粉、总糖、还原糖的测定方法淀粉的测定方法——蔥酮法一（原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离岀去卜而后烟叶中淀粉用适量Hch因淀.粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进右％根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二（仪器设备三角瓶50nd容量瓶100ml移液管10ml、lml漏斗圆底烧瓶1000ml离心管和离心机水浴锅温度讣烘箱滤纸夭平分光光度许■•■■■■■•t•••••••.三（试剂盐酸乙醇氢氧化钠蔥酮试剂的配制和标准曲线的绘制1-葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖fAR级）0Jg溶于蒸锚水中”定容至100毫升...

淀粉、总糖、还原糖的测定方法淀粉的测定方法——蔥酮法一（原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离岀去卜而后烟叶中淀粉用适量Hch因淀.粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进右％根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二（仪器设备三角瓶50nd容量瓶100ml移液管10ml、lml漏斗圆底烧瓶1000ml离心管和离心机水浴锅温度讣烘箱滤纸夭平分光光度许■•■■■■■•t•••••••.三（试剂盐酸乙醇氢氧化钠蔥酮试剂的配制和标准曲线的绘制1-葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖fAR级）0Jg溶于蒸锚水中”定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，：依次移入葡萄糖标准液（lOOUg/mDO,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00mL后鼻再从1至6试管依次补加10,0.8；0-6,0.4,0-2„0ml蒸懈水后尸再分别加入蔥酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录0D值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标…绘出标准曲线3..80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水走容至500ml生1当量的盐酸配制43毫升浓盐酸加水定容至500mlTOC\o"1-5"\h\z•♦0.••夕•••・■X。夕•5i6.10%氢氧化钠配制血(化钠溶于100ml水中•••••••••*•“J••••••••♦•,••蔥酮试剂：1克蔥酮溶于72%的HSOlOOOml(98%的HSO+240的蒸懈水h棕色•.•••>•••f•••?••・.♦••••••••••••••••*%•••••尸••••T瓶冰箱2424••••■•保存2,3周。五实验步骤分离出水溶性糖O.lgW置乎离心管中加入8毫升80%乙醇80?水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入TOC\o"1-5"\h\z••・•••I•夕••••7••%Z•8ml80%Z,醇*重复三次・•■■••••••rv•••水解残渣用1当量的盐酸15鈕洗入50ml三角瓶,摇匀后烘箱105度加热3：5小.■•••、••••3.•/•:•••.•.•:•时，冷却后加10%氢氧化钠6皿1中和，过滤，蒸镭水建容100ml*测定取滤液1ml(空自用Iml蒸憾水代替),加入蔥酮试剂5ml,摇匀，于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*O.9/Wft:C—样品淀粉含量(ug/g)w—样品重量(g)=1f®A—标准曲线查得的糖量(Ug)N—样品提取液占样品反应液的倍数蔥酮比色法测总糖:实验步骤：4可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克#置于离応管中，加入8毫升80%乙醇"于80?水浴浸提30份钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8基升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于•••・丁・•••％・••••丁•••5••・-•I100毫升容量瓶中井定容至100毫升d2、总糖的测定:取提取液L毫升于试管中(空自中用1毫升蒸懈水代替n加入•••••••••••:••.•y%蔥酮试剂5毫升「摇匀，于沸水浴中加热10分钟「冷却后在620nm波长处比色•：蔥酮试剂江克蔥酮溶于72%的HSOlOOOml(98%的HSO+2402424的蒸憾水》,棕色瓶冰箱保存旷3周。标准曲线的绘制:取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液(100ug/ml)pv0.2>0.4*0?6*0.8>LOml和蒸憾水0.8、0.6>0.4、0.2、0ml,.再分别加入蔥酮试剂5毫升尤于沸水浴中加热10分钟.冷却后在620nm波长处比色*记录■■■■■•■■■・・■■■丁■▼■■b■..■P■•.■■■■■・■■0■P▼・・■■■■0D值,绘出标准曲线。、讦算:C二AN/旷•••:厂••・•："•C—样品总糖含量(pg/g)w-样品重量@)A—标准曲线查得的糖1Ug)N—样品提取液占样品反应液的倍数总糖J还原糖、淀粉测定所需试剂无水葡萄糖(AR级)蔥酮•乙醇浓盐酸氢氧化钠3,5—二硝基水杨酸(DNS)•酒石酸钠结晶酚亚硫酸钠滤纸,PH试纸，小标签纸3,5—二硝基水杨酸(DNS)比色法测还原糖仪器与用具：25ml刻度试管漓心管決00ml玻璃烧杯汀00mL三角瓶：;刻度吸管lml：v.2ml.10ml;沸水浴;离心机；电手天平:分光光度fK•••••••、•••••试剂:•.••••.•••••■°°••••■•.••重"在小烧杯中用蒸惚水溶解后定容至lOOmL「摇勾冰箱中保存备用j2.*••/••••••••••••••••••••••••,*••••••3忌二硝基水杨酸(DNS)：6；3g3,5,二硝基水杨酸和262mlr1.••:••>••••・•••・•:・•・％•••2mol/lNa0H<加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶•••■%••«••••酚和5g亚硫酸钠…搅拌溶解「冷却后加蒸憾水定容至1000ml,•贮于棕色瓶实验步骤:1(可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品o.aoog,・・•加入8皿180%乙眛于80?水浴浸提30niin,.冷却后于4000转离心5min收集上清液「残渣再加入8ml80%乙醇,再次浸提，重复两次护将兰次提取的上清液合并于100m1容量瓶中并定容至lOOmlo2(述原糖的测定:取提取液讪1于试管中(空自中用1ml蒸懈水代替)＞；加入DXS试剂上5mh摇匀，于沸水浴中加热5mim取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至••f••.t•••.•••••y:••2施1「摇匀，然后在540nm波长处比色＞"••.・•・•••%3(标准曲线的绘制:取干洁25ml试管6支,'依次加入葡萄糖标准液］(lmg/ml)0H0.2s0.4、0.6%：0.8、1.0ml和蒸馅水汇0、：0.8、0.6$0.4.0厶2・0ml,•再分别加入DNS试剂15皿"于沸水浴中加热取出后立即浸入冷水冷却至室温竜再用蒸惚水定容至25皿1刻度处/摇匀，撚后在540nm波长处比色4(计算f还原糖(J二((CXV/a)/(WX1000))X100C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数》V,提取液的体积(ml)：W—样品重量(g)；

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