【推荐】肿瘤坏死因子α对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用

【推荐】肿瘤坏死因子α对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用 肿瘤坏死因子α对体外培养视神经星形胶 质细胞的促增殖作用 中国临床康复第,D卷第船朋2006--04—10出版 ChineseJournalofClinicalRehabilitation,April102006Vo1.10No.13 肿瘤坏死因子对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用 余德立,余资江 21 ? 基础研究? I贵阳中医学院第二附属医院眼科,贵州省贵阳市550001;贵阳医学 院解剖学教研室,贵州省贵阳市55OOO4 余德立,女,1970年生,贵州省贵阳市人,汉族,1994年贵阳医学院毕 业,学士.主治医师,主要从事眼外伤的基础与临床方面的研究. 中圈分类号:R774.6文献标识码:A文章编号:t67l-5926(2006)13-002l_o4 收稿日期:2005—120修回日期:20064l—OlIO5—5O—Il-9128/ZS?SJ Promotingeffectsoftumornecrosisfactoralphaonthepro- liferation.ofastrocytesfromopticnervecultured/nv/tro YuDe-li.YuZi—iiang 'DepartmentofOphthalmology,SecondHospitalAffilatedtoGuiyangTra- difionalChineseMedicalCollege,Guiyang550001,GutzhouProvince, China;:'DepartmentofAnatomy,. GuiyangMedicalCollege,Guiyang 550004,GutzhouProvince,China. YuDo-It,Attendingphysician,DepartmentofOphthalmology,GuiyangTra— ditionalChineseMedicalCollege,Guiyang550001,GuizhouProvince,China Received:2005—12—20Accepted:2006—0l—01 Abstract AII~"Toobservethepromotingeflctoftumornecrosisfactor-ct(TNF-a, ontheproliferationofastrocytesfromopticnerveculturedfnvitro.80asto provideexperimentalbasisforfurtheranalysisoffunctionofastro~ytes. M哐TH0DS:ThisexperimentwasconductedattheDepartmentofOph— thalmology,SecondHospitalAffilatedtoGuiyangTraditionalChinese MedicalCollegeandDepartmentofAnatomy,GuiyangMedicalCollege fromJunetoOctober2005.Opticnerveinopticcanalofnewlybornwithin 24hoursmicewasobtainedv/acraniotomy,andastrocyteofopticnerve wasculturedandpurifiedbymeansofmachining.rI1|legrowthandmorpho- logicalchangeoftheculturedcellswereobservedunderaninvertedphase— contrastmicroscope.Cellsafterthe3.5and6generationcellswerein. oculatedat24一wellcultureplate,cellsafteradhesionweretakenoutfor immunofluorescentstainingandimmunocytochemicalstaining80astode— tecte~ialfibrillaryacidicprotein(GFAP)andS一10o.TNF.otwasaddedto the6generationcells.rI1lleeffectofTNF—otontheproliferationofastro- cyteswasobservedwithmethylthiazolyltetrazoliumfM,Irnassaymethod. RESULTS:(1jCellularmorphologyresultsafterprimaryandgenerative cultureunderaninvertedphase—contrastmicroscope:Primarycellsisolat. edandculturedmechanicallybegantoattach24hourslater.Theadhered cellsmainlypresentedshuttleshapeorirregularshape.Suspendeddead cellswereremovedafterdigestionandculture.Ti11the4generation.the cellularmorphologywasbasicallyidenticalandcellularvolumewasbig, presentingstellate,shuttleandirregular.Therewerefewmutationsand relativebiggernucleus.Adheredcellsgrewinpieceshape.(Immunohis— tochemicaldetectionresultofGFAPandS一100positiveproduc~sfromcu1. turedopticnerveastrocyteS:immunofluorescentstainingandimmunocyto- chemicalstainingshowedthatGFAPandS.10owaspositive.Immunocyto- logicalstainingpositiverateofmyelinbasicproteinwaslessthan1%.that withoutfirstantibodypresentednegative.Positiverateofthecellsafterthe 6generationwasover97%.(Resultsofcellularproliferativeactivity withMq3"assaymethod:WiththeincreaseoftheconcentrationofTNF.ot. astrocytesshowedmarkedproliferation,especiallytheconcentrationof rNFwas3Og/L.Proliferativeeffectwassignificantlystrongerascorn— paredwiththeculturedcellswithoutTNF—otadded(O.197?O.0o2.0.276 ?O.0o5.P<0.0o1).. CONCLUSION:Astrocytespurityofopticalnerveofnewlybornmiceiso- latedandpurifiedmechanicallyishish.TNF—dcouldsignificantlypromote theproliferationofastrocytes,presentingobviousdose-dependenteffect.A lotofcellscouldbeobtainedinashortperiod."INF-aisakindofreliable match'alforfurtheranalysisofthestrunctureandfunctionofastrocytes. YuDLYu7_1.Promotingeffectsoftumornecrosisfactoralphaontheproliferation ofastrocytesfr0mopticnerveculturedinvitroZJtongguoLinchuangKandu2006;10 I131:21—4IChinoJ 余德立,余资江肿瘤坏死因子n对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用 UL中国临床康复,2006,10(131:21-4[www.zglckf.coml 摘要 目的:观察肿瘤坏死因子ot对体外培养的视神经星形胶质细胞的促增 殖作用,为进一步 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 星形胶质细胞的功能奠定实验基础. 方法:实验于2005—06/10在贵阳中医学院第二附属医院眼科和贵阳医 学院解剖学教研室完成.将出生24h以内的新生小鼠断颈处死后,采用 机械法分离视神经管内段的视神经,进行视神经星形胶质细胞的原代 和传代培养及纯化,倒置相差显微镜观察培养细胞的生长过程和形态 学变化.取第3,5,6代以后的细胞接种于24孔培养板中,贴壁后取出 分别进行免疫荧光化学染色和免疫细胞化学染色,检测细胞胶质纤维 酸性蛋白及S一100阳性产物情况.在第6代培养细胞中添加肿瘤坏死因 子at,四唑盐比色法观察肿瘤坏死因子at对胶质细胞增殖的影响. 结果:?原代及传代培养的细胞形态光学倒置相差显微镜观察结果:经 机械分离培养的原代细胞24h开始贴壁,贴壁细胞形态以梭形,不 规则 编码规则下载淘宝规则下载天猫规则下载麻将竞赛规则pdf麻将竞赛规则pdf 形为主.经消化传代去除悬浮的死亡细胞,培养至第4代以后细胞形态 基本一致,细胞体积大,呈星形,梭形及不规则形,突起少,核相对较大, 贴壁细胞呈片状生长.?培养的视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋 白及S一10o阳性产物免疫组织化学检测结果:免疫荧光染色及免疫细胞 化学染色显示,胶质纤维酸性蛋白及S-100呈阳性,髓磷脂碱性蛋白免 疫细胞化学染色阳性率小于1%,未加一抗的呈阴性.第6代以后细胞 阳性率达97%以上.?细胞增殖活性四唑盐比色法检测结果:随着肿瘤 坏死因子a的浓度加大,胶质细胞 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现出增殖亢进现象,以3O表 现最为显着,亢进效果明显强于未添加肿瘤坏死因子a的培养细胞 (0.197~0.0o2,0.276~0.0o5,P<0.0o1). 结论:机械分离纯化新生小鼠视神经星形胶质细胞纯度高,肿瘤坏死因 子at能够促进星形胶质细胞增殖,且呈现出明显的剂量依赖性效应,可 在短期内获取大量的细胞,是进一步分析神经胶质细胞结构和功能的 可靠材料.. 主题词:视神经;神经胶质原纤维酸性蛋白质;星形细胞/代谢;细胞,培 养的;肿瘤坏死因子/分析;免疫组织化学;显微镜检查,相差;小鼠 O引言 星形胶质细胞是视神经胶质细胞的主要组成成 份,其功能主要起支架,营养神经纤维作用,并参与运 输代谢产物.当视神经纤维受损及存在炎症时,星形胶 质细胞参与炎症,损伤修复过程,以维持视神经的形态 完整及正常代谢. 开展视神经星形胶质细胞的体外培养,可以进一 步分析视神经损伤后的修复提供充足的细胞来源llI习. 视神经是具有中枢神经特征的周围神经,损伤以后再 生困难.发育中的星形胶质细胞可能参与视神经损伤 后再生或胶质瘢痕形成过程.体外快速培养,分离纯化 胶质细胞是重要前提. 胶质细胞在中枢神经系统损伤后的反应在一定程 度上决定着中枢神经的再生及功能的恢复,而这一反 应是一个十分复杂的过程,包括一系列形态和组织化 学方面的变化.有研究表明肿瘤坏死因子at可能参与 了这一变化,但在视神经损伤过程中肿瘤坏死因子at 是否对视神经损伤后星形细胞增殖存在影响,目前报 _5926CN21-1470/R ~com3385083~ina.com余德立J等.麓鬻对体外培养视神经星形胶质细胞的?.础'' 促增殖作用 道较少.有研究表明肿瘤坏死因子d能使脑损伤后胶 质纤维酸性蛋白阳性细胞数明显增加,亦能促进体外 纯化培养的星形胶质细胞增生,但对其胶质细胞的具 体作用及可能机制尚不清楚『3'41. 1材料和方法 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 :单一样本实验. 单位:贵阳中医学院第二附属医院眼科,贵阳医 学院解剖学教研室. 材料:实验于2005—06/l0在贵阳中医学院第二 附属医院眼科和贵阳医学院解剖学教研室完成.选取 2月龄SPF级昆明种小鼠l0只(购自重庆医科大学实 验动物中心,动物质量许可证号:SCXK(渝)2002001), 体质量(20.0~2.7)g,雌雄各半.按l:1比例合笼过夜, 翌日检查有阴栓者为妊娠第0天,以第20天产出,出 生时间不超过24h的新生小鼠用于实验.DMEM/F12 (1:1)培养基,胎牛血清(Hyclone);肿瘤坏死因子d (Peprotech公司),小鼠抗胶质纤维酸性蛋白抗体 (Serotec);鼠抗人S一10o蛋白(北京中杉金桥生物公 司);鼠抗人髓碱脂碱性蛋白(北京中杉金桥生物公 司),浓缩型霉链亲和素生物素复合物一异硫氰酸荧光 素,霉链亲和素生物素复合物一红色荧光素试剂盒(博 士德公司);过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组化 试剂盒,二氨基联苯胺显色试剂盒(北京中杉金桥生 物公司).自动双层纯水蒸馏器,二氧化碳恒温细胞培 养箱,倒置显微镜,荧光显微镜,体视显微镜,超低温 冰箱,超净工作台,低速离心机,NT一2000酶标仪. 设计,实施,评估者:实验设计为第一作者,干预 实施与评估为全部作者,均受过专业培训,未使用盲 法评估. 方法: 视神经胶质细胞的原代培养:将出生24h以内的 新生小鼠断颈处死后,置于体积分数为0.75的乙醇中 浸泡消毒5rain.无菌条件下在体视显微镜下开颅取 出管内段的视神经,置于无菌培养皿中,剔除血管和 脂肪组织,D—Hank'S清洗,用眼科剪剪碎,200目不锈 钢筛网过滤,移人10mL无菌离心管中,l000r/min 离心5min,弃上清,加入含体积分数为0.2的胎牛血清 的DMEM/F12培养基,重悬细胞后,以(1.5-5.O)xl07IJ_ 接种于培养瓶内,于37?,体积分数为0.05的CO培 养箱中培养. 视神经星形胶质细胞的传代培养:原代培养3,5d 后第1次换液,去除原培养液,磷酸盐缓冲液清洗3 次,加入适量的质量浓度为2.5L的胰酶一二乙烯四 乙酸二钠后于37?消化5min,加入含血清培养基终 止消化,1000r/min离心5min,弃上清,加入新鲜培 养基,用吸管反复小心吹打制成单细胞悬液,以1:2比 例传代.此后约5—7d传代培养1次,具体操作同前. 相差显微镜观察培养细胞的生长过程和形态学变化. 视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及S—l00 免疫荧光染色过程:取第3,5,6代以后的细胞接种于 24孔培养板中(预先加入经多聚赖氨酸处理的盖玻 片),贴壁后取出,磷酸盐缓冲液洗去细胞表面培养液, 以质量浓度为40的多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定 30min,蒸馏水洗.滴加1:20/磷酸盐缓冲液稀释正常 山羊血清封闭液,室温10min,甩去多余液体,不洗. 分别滴加适当稀释的一抗(小鼠抗胶质纤维酸性蛋白 单克隆抗体,鼠抗人S一100单抗l:l00),4?过夜, 0.O1mol/L磷酸盐缓冲液洗2minx3次;滴加l:100 磷酸盐缓冲液稀释生物素化山羊抗小鼠IgG,20-37? 30min,0.01mol/L磷酸盐缓冲液洗2minx3次;1:1O0 磷酸盐缓冲液稀释霉链亲和素生物素复合物一红色荧 光素和霉链亲和素生物素复合物一异硫氰酸荧光素,加 至切片,20~37?放置30min.0.01mol/L磷酸盐缓冲 液洗5minx4次.50%甘油(磷酸盐缓冲液配制)封固, 荧光显微镜观察并照相. 视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及S—l00 免疫细胞化学染色过程:取第3,5,6代以后的细胞接 种于24孔培养板中(预先加入经多聚赖氨酸处理的盖 玻片),贴壁后取出,磷酸盐缓冲液洗去细胞表面培养 液,以质量浓度为40g/L的多聚甲醛磷酸盐缓冲液固 定30min,磷酸盐缓冲液洗5min.3%H20去离子水 (无色液体)孵育5~10min,以消除内源性过氧化物酶 活性;滴加封闭用正常山羊血清工作液,室温孵育l0, 15min,倾去,勿洗;滴加适当比例稀释的一抗(小鼠抗 胶质纤维酸性蛋白单克隆抗体,鼠抗人S一100单抗 l:100,鼠抗人髓碱脂碱性蛋白单抗l:100),4?过夜后 再于37?孵育2h,磷酸盐缓冲液冲洗3minx3次;滴 加生物素标记的山羊抗小鼠IgG,37?孵育10min,磷 酸盐缓冲液洗3minx3次;滴加辣根酶标记链霉卵白 素工作液,37?孵育10min,磷酸盐缓冲液冲洗3min ×3次,分别以磷酸盐缓冲液代替一抗进行阴性对照染 色.二氨基联苯胺显色,显微镜下控制显色时间,自来 水充分冲洗,脱水,透明,中性树脂封固并镜检. 细胞增殖活性的检测:第6代培养细胞经胰酶一 二乙烯四乙酸二钠消化后,离心收集细胞沉淀,用新 鲜培养基重悬细胞,用血球计数板计数后,以每孔5 xlO"L的浓度加至96孔测定板中,每孔DMEM培 养液含l%胎牛血清.将肿瘤坏死因子d以0,0.1,l0, 20,30L浓度加至测定板中,培养3d后进行四唑 盐比色测定.测定方法为100L所含细胞的测定孔 中加l0L甲基噻唑基四唑溶液,37?培养箱中培养 4h.然后加0.04mol/L盐酸异丙醇100L,室温下静 ISSN1671-5926CN21—1470/R"t如中国I晦床康复2006年4月10日第lO卷第 l3期 置10min,620nm下比色测定. 主要观察指标:?原代及传代培养的细胞形态光 学倒置相差显微镜观察结果.?培养的细胞胶质纤维 酸性蛋白及S一100阳性产物免疫组织化学检测结果. ?细胞增殖活性四唑盐比色检测结果. 统计学分析:由第一作者采用SPSS10.0统计软 件进行处理分析,数据以x_-lzs表示,使用t检验. 2结果? 2.1原代及传代培养的细胞形态学观察经机械分 离培养的原代细胞24h开始贴壁,培养体系中含有较 多的死亡细胞,贴壁细胞形态多样,以梭形,不规则形 为主,见图1.经消化传代去除悬浮的死亡细胞,培养 至第4代以后细胞形态基本一致,相差显微镜下视野 清晰,可见细胞体积大,呈星形,梭形及不规则形,突 起少,核相对较大,贴壁细胞呈片状生长,见图2. 2.2培养的视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白 及S一100免疫组织化学染色结果胶质纤维酸性蛋白 与S一100免疫荧光染色及免疫细胞化学染色呈阳性, 髓碱脂碱性蛋白免疫细胞化学染色阳性率小于1%, 未加一抗的呈阴性.第6代以后细胞阳性率达97%以 上.胶质纤维酸性蛋白阳性细胞(图3)在胞浆和突起 均呈现棕黄色阳性颗粒,以梭形多见,少量细胞呈星 形,霉链亲和素生物素复合物一红色荧光素染色结果 (图4)与之相似,均可见在形态上出现两种类型的细 胞,但以梭形细胞为主;霉链亲和素生物素复合物一异 硫氰酸荧光素染色示S一100阳性细胞(图5)胞体小, 突起分枝较多,与过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫 组化染色所示的S一1o0阳性细胞(图6)结果一致. 2.3细胞增殖活性甲基噻唑基四唑检测结果视神 经星形胶质细胞培养的比色值结果,随着肿瘤坏死因 子浓度梯度的加大,胶质细胞表现出增殖亢进现 象,以30g/L表现出最强的增殖促进效果.与未添 加肿瘤坏死因子的培养细胞比较,肿瘤坏死因子 浓度分别为O.1,1O,20,3OL时的比色值显着升高 (0.197+0.o02,0.202+0.o08,O.2l1?O.010,0.225?O.014, 0.276+0.005,P<0.o01). 3讨论 随着神经生物学和分子生物学研究的深入,中枢 神经损伤,再生和修复研究取得很大的进展,为视神 经损伤的修复,视功能保护研究带来了希望.星形细 胞和少突胶质细胞在哺乳动物中枢神经损伤后再生 过程中的作用分析已成为当今神经科学研究热点之 一 ,且取得了一定进展【4一.视神经星形胶质细胞作为 视神经的支架,参与视神经的代谢,炎症和修复过程, 成为视神经修复研究的重要部分【l'61. 视神经是由视网膜神经元即视网膜神经节细胞胞 23 体发出的轴索和视神经胶质细胞组成,不含神经元胞 体和室管膜细胞,成分单一.视神经胶质细胞主要包括 两大类型:星形胶质细胞和少突胶质细胞,两种细胞起 源于不同部位,来自不同分化谱系,其分化受多种细 胞,细胞因子的调控【ll3?4t.一般认为,星形细胞主要起着 对视神经组织的支持作用,隔离触突及调节神经细胞 周期环境的离子浓度;视神经损伤后星形细胞大量增 殖,且具修复和吞噬双重功能,同时视神经周期的细胞 因子浓度发生变化,视神经损伤后的修复主要包括瘢 痕修复和再生神经功能修复两种.视神经损伤后可刺 激胶质细胞的增殖和分泌,增殖和分泌均具有双向性. 星形胶质细胞的增殖若远远大于少突胶质细胞,则形 成胶质瘢痕;若增殖的星形细胞和少突胶质细胞比例 合适,分泌的促进神经生长因子和抑制神经生长因子 达到平衡以及损伤神经周期的微环境稳定,则损伤的 神经元可以再生,且再生的神经元具有电活动能力,达 到功能修复. 肿瘤坏死因子是一种具有广泛生物学功能的 多肽类细胞因子,是机体炎症与免疫应答反应的重要 因子,参与炎症损伤,凝血,发热等多种病理生理过程, 启动一系列病理变化,对某些非肿瘤细胞和大多数肿 瘤细胞具有诱导凋亡的作用.在中枢神经系统神经组 织内星形细胞,脑组织血管内皮细胞和小胶质细胞及 神经元均可产生肿瘤坏死因子【3I4】.肿瘤坏死因子 首先作为膜结合多肽前体合成,然后在蛋白水解酶的 裂解作用下生成可溶性形式形成有活性的三聚多肽, 这种前炎性细胞因子是在单核细胞和T,B淋巴细胞, 中性粒细胞和肥大细胞的刺激下产生的.肿瘤坏死因 子Ot是信号肽家族的成员,通过与靶细胞膜上的肿瘤 坏死因子受体相互作用而发挥其生物学功能.神经损 伤修复是多种因素综合作用的复杂过程,转化生长因 子一B,神经生长因子,肿瘤坏死因子等多种细胞因 子参与了神经损伤的修复过程.一些研究表明肿瘤坏 死因子仅对神经胶质细胞的增生,分化及某些肽类因 子的合成有影响,肿瘤坏死因子仅能明显促进体外混 合培养及中枢神经损伤后的神经胶质细胞的增生川. 体外培养视神经胶质细胞都采用组织块法【5J,本实 验采用机械分离法对新生小鼠视神经胶质细胞进行原 成功地获得了纯度较高的星形胶质细 代和传代培养, 胞,机械法常用来培养脑组织内的胶质细胞,但用于进 行视神经胶质细胞培养的尚较少见.通过免疫荧光和 免疫组织化学方法证实所得细胞纯度超过97%,为进 一 步研究星形细胞的生物学特性和其在视神经损伤后 再生中的作用提供了实验基础. 一 般认为,视神经中星形胶质细胞只有一种类型 (纤维型),然而在有关视神经发育的文献中却记载星 24ISSN1671—5926CN21—1470/R帮办tm中国临床康复2006年4月10日第l0 卷第l3期 形细胞包括两种类型,MillerRHt9t等在以不同年龄大 鼠视神经制备的细胞混悬液中,采用抗体鉴定发现在 胚胎第16天时首先出现1型星形细胞(原浆型),出 生后第2周初出现2型星形细胞(纤维型),这说明在 视神经中仍存在两种类型的星形细胞.本实验中由于 取材于新生24h内的小鼠视神经,通过免疫荧光和免 疫细胞化学染色显示,亦有少量细胞呈现为星形,但 绝大多数细胞仍以纤维型表型为主,镜下观察细胞呈 梭形多见. 视神经星形胶质细胞体积比较大,胞体呈多边 形,由胞体向四周发出突起,核较大,着色较浅,胞浆 含有胶质原纤维,为星形细胞所特有.胶质原纤维属 中间丝,星形细胞具有胶质原纤维酸性蛋白,是星形 细胞的特有标记.另外,波形蛋白,S一100蛋白及碳酸 酐酶可呈阳性.胶质细胞在中枢神经损伤及再生中均 有重要作用,肿瘤坏死因子0【对胶质细胞的增生,分 化及某些肽类因子的合成均有影响,本实验结果表明 肿瘤坏死因子at对体外培养纯化的视神经星形胶质 细胞亦有明显的促进作用,而且呈现出明显的剂量依 赖性效应,这与有关文献报道一致翻.采用机械分离法 成功地从新生小鼠视神经中培养纯度较高的星形胶质 细胞,添加肿瘤坏死因子at可明显促进胶质细胞增 殖,可在短期内快速获取大量的胶质细胞,为进一步分 析视神经损伤和再生中星形细胞的功能奠定了基础. (图I-6见插图13—2页) 4参考文献 l王国卿,封丽芳.夏作理.星形腔质细胞的生物学功能与神经元修复册.中 国临床康复.2005,9(1):l46.8 2MadiganMC.SedunAA.RaoNS.eta1.Tumornecrosisfactor-Mpha(rNF-al- pha)-inducedopffeneuropathyinrabbits.NeurolRes1996;l8(2):176—84 3HuS.SbengWS,EhrhchLC,eta1.Cytokineeffectsonglutamateuptakeby humanastrocytes.Neuroimmanomodulation2O0o;7f31:153—9 4PannuR,SiRIshAK.Sinsh1.Anovelroleoflactosylcenunideintheregulation oftumornecrosisfactoralpha-mediatedproliferationofratprimaryastrocytes. ImplicationsforastrogliosisfollowingneurotrHum.JBidc7m2005;280(14): l3742—5l 5PingLXiJP,JianY.Primaryeeltureofopticalneuraloligedendrocytein newbornratanditssignificanceintherestorationofopticalneuralinjury restoration.ChineseJOurna/ofC/inicalRehabU/tation2004;8(4):796-7 6MonYZ.ZhuJD.Studyonthecorrelationbetweentumornecrosisfactorand nerverootpain.ChineseJOurnalofcjinicalRehabilitation2002;6(18):28lO—l 7Meeuw~nS,Pei~oon.DeenC.BsibsiM,eta1.Cytokine,chemokineand growthfactorgeneprofilingofculturedhumanastrocyte~afterexposureto proinflammatorystimuli.Glia20o3;43(3):243—53 8YongYM,ZiYS.YnanC.eta1.明&tsofculturedastrocytesfromratcerebral codexontheneuritedevelopmentofPC12eeH&ChineseJOurnalofClinical Rehabil/tation20o4:8(I3):257O—l 9MillerRH,DavidS,PatelR,eta1.Aquantitativeimmnnohlstocbemieals,udy ofmaeroglialeelldevelopmentintheratopticnerve:invivoevidencefortwo distinctastrocytelineages.DevBid1985;l1I(1):35—4l 中国临床康复与卷第『3朋2006-04—10出版 ChineseJournalofClinicalRehabilitation,April102006Vo1.10No.13 ? 基础研究? 骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心脏自主神经功能影响的机制研究木? 丁囝东,曹克将,单其俊,邹建刚,陈明龙,金艳 南京医科大学第一附属医院心脏科,江苏省南京市2l0029 丁囝东?,男,l969年生,安徽省安庆市人,汉族,南京医科大学在读博 士.主治医师,主要从事心血管疾病研究. 通讯作者:曹克将,博士,教授.南京医科大学第一附属医院心脏科.江 苏省南京市2loo29 国家自然科学基金资助项目(30470706) 中圈分类号:R394.2文献标识码:A文章编号:1671,5926(2006)13-oo24:o4 收稿日期:2006—02—O7修回日期:2006-02—16(06—50一l一316/W?X) Mechanismofmyeloidmesenchymalstemcelltransplantation incardiacautonomicnervousfunctiona~termyocardial infarction DingChan-dong,CooKe-jiang.ShonOi-iun,ZouJian-gang.Chen Ming-long,JinYan DepartmentofCardiology,FirstAffiliatedHospitalofNanjingMedical University,Nanjing210029,JiangsuProvince,China DingChan-dang?,Studyingfordoctorate,Attendingphysician, DepartmentofCardiology,FirstAffiliatedHospitalofNanjingMedical University,Nanjing210029,JiangsuProvince,China Correspondenceto:CaoKe—jiang,Doctor,Professor,Departmentof Cardiology,FirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing 210029,JiangsuProvince,China. Supportedby:theNationalNaturalScienceFoundationofChina,No. 3O47O7O6} Received:2006-02-07Accepted:2006-4)2—16 Abstract AnToobservetheeffectsofmyeloidmesenchymalstemcellfMMSC) transplantationoncardiacaiJtonomicnervousfunctionofswineafter myocardialinfaretionfMI)andanalyzeitspossiblemechanism. M哐TH0DS:TheexperimentwasconductedintheDepartmentof Cardiology,FirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversityfrom October2004toAugust20o5.~Yrotally33swinesWererandomlydivided into3groups:Normalcontrolgroup(controlgroup,n=l0),MImodelgroup (MIgroup,n;l0】andMMSCtransplantationgroup(MMSCgroup,n=13).? LeftanteriordescendingbranchesofanimalsintheMIgroupandMMSC groupwereblockedupbyFoley'stubeoftotalexchangetypesoasto madeintoMImodels.3mLnormalsalineandMMSCsuspensionlabeled with5-bromodeoxyuridine(BrDU1wererespectivelyadministratedthrough tubes.(Heartratevariability(HRV),cardiachemodynamicsand histochemicalexaminationwereconductedineachgroupafter4weeks. RESULTS:Totally33swineswereinvolvedintheanalysisofresults.( MMSC.derivedcellsparticipatedintheremodelingofcardiomuscular tissuesandcapillarynetwork(CN),tllerewerespecialmarksof cardiomuscularcellsandvaseularendothelialcells(VEC1/e.troponinT andfactor?insomekytoplasm.?ItwasfoundinHRVfieldthat comparedwiththecontrolgroup,levelofnormalizedhish-frequency componentintheMIgroupweresignificantlydecreased【(17.12:t:5.17), (28.53~7.11)nU,P<0.o51;Componentsofnormalizedlow.frequencyand componentproportionbetwecnnormalizedlow-frequencyandhish- frequencywereremarkablyinereased【(67.82~12.68)s(44.10~12.20)nU, P<0.05;4.10~,-0.657951.6l?O.13,P<0.Ol1;Therewerenoremarkable differencesinnoEmalizedlow-frequencycomponentsbetweenMMSCgroup andMIgroup,whilethoseinthelattergroupwereobviouslyincreased <0.05),therefore,thecomponentproportionbetweenlow-frequencyand 肿瘤坏死因子对体外培养视神经星形胶质细胞的促增殖作用 是充干细胞成纤维样集落的培养方法及多向分化潜能?rlc?''?,l?I….._?… "I…l_Il?】l……c…II?il,ir:lll~i圳1…l1…lllmtial 目l十0r?十m__MJ.?F】f髓m[×IO(J) 目2"*0.2?}n1者一…M}}T?,#[m) 目3*f)j十JI1?}:?f#lxlol1) 目4It月捶hE%m《?&#些(×】【?】 目典m?E*日聃』刁f**]t#6 ,n,清^##(州? 目6^#十H十^^* 目7十^*:}B(【ll&ll 目Ht*rcv?1',自4? ——___一 ,—————— ——————————— 重复利用IV型胶原以差遽贴壁法分选表皮千细胞… 0J"._lIjHs1…l】_w"ll…(,ultllLnlm-"Ir.]】a? , ?