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高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量

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高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量 高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对- 香豆酸和金丝桃苷的含量 田雨霏,刘姣,李晋,马琳,何俊,刘二伟,常艳旭 5 (天津市现代中药重点实验室, 天津中医药大学, 天津,300193) 摘要:[目的] 建立同时测定菟丝子中绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷的含量的高效液相色谱 法,为菟丝子的质量标准建立提供依据。[方法]色谱柱依利特 ODS C18(4.6×200 mm,5μ m);流动相为甲醇-0.05%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为 1.0 mL.m...

高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量
高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷的含量 高效液相色谱法测定菟丝子中绿原酸、对- 香豆酸和金丝桃苷的含量 田雨霏,刘姣,李晋,马琳,何俊,刘二伟,常艳旭 5 (天津市现代中药重点实验室, 天津中医药大学, 天津,300193) 摘要:[目的] 建立同时测定菟丝子中绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷的含量的高效液相色谱 法,为菟丝子的质量标准建立提供依据。[方法]色谱柱依利特 ODS C18(4.6×200 mm,5μ m);流动相为甲醇-0.05%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速为 1.0 mL.min-1,检测波长为 360 nm。 [结果]在此色谱条件下,三种成分可完全分离。绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷的线性分别为 10 2.00-100 μg /mL(r=0.9993),6.25-100 μg/mL(r=0.9991),0.50-50 μg/mL(r=0.9991)。 平均回收率分别为 100%(RSD=3.2%)、102%(RSD=1.7%)和 102%(RSD=3.1%)。[结 论]该方法简便可行,重复性好,可用于菟丝子的质量评价 关键词:中药学;菟丝子;高效液相色谱法;绿原酸;对-香豆素;金丝桃苷 15 中图分类号:R286.022 Determination of chlorogenic acid, p-coumarin and hyperin of Cuscuta chinensis Lam. by High Performance Liguid Chromatography 20 Tian Yufei, Liu Jiao, Li Jin, Ma Lin, He Jun, Liu Erwei, Chang Yanxu (Tianjin State Key Laboratory of Mordern Chinese Medicine, Tianjin University of TCM, Tianjin 300193) Abstract: [Objective] A sensitive method of the determination of chlorogenic acid, p-coumarin and hyperin in Cuscuta chinensis Lam. [Methods] The sample was separated on an ODS C18 25 column(4.6×200mm,5μ m) with the mobile phase consisting of methanol-0.05% formic acid by gradient elution. The flow rate was 1 mL.min-1. The wavelength was set at 360 nm. [Result] In this chromatographic condition, all of the components were completely separated. The calibration linear curves of chlorogenic acid, p-coumarin and hyperin were within concentrations of 2.00~100 μg/mL(r=0.9993), 6.25~100 μg/mL (r=0.9991) and 0.50~5 0μg/mL(r=0.9991), respectively. The 30 average recoveries of chlorogenic acid, p-coumarin and hyperin were 100% (RSD=3.2%), 102%(RSD=1.7%) and 102% (RSD=3.1%), respectively.[Conclusion] The simple and feasible HPLC method was established to evaluate the quality of Cuscuta chinensis Lam. Key words: Traditional Chinese medicine; Cuscuta chinensis Lam.; HPLC; Chlorogenic acid; P-coumarin; Hyperin 35 0 引言 菟丝子为旋花科植物南方菟丝子Cuscuta australis R.Br.或菟丝子Cuscuta chinensis Lam. 的干燥成熟种子[1]。它除作为临床常用中药外,还是制药和保健品生产的重要原料药材之一。 近年来国内外学者对菟丝子药理活性进行系统的研究发现,它不仅具有补阳益阴、固精缩 40 尿、明目止泻的传统功效,同时,还具有生殖保护、抗衰老、免疫调节、改善心脑血管、保 基金项目:高等学校博士学科点专项科研基金( 20101210120007) ; 国家自然科学基金( No81001632) ; 中 国博士后基金( 20100480657) ; 教育部科学技术重点项目( No 210013) 作者简介:田雨霏(1990-),女,本科生,从事中药质量标准研究 通信联系人:常艳旭(1981-),男,博士,副研究员,主要从事中药资源与中药药代动力学研究. tcmcyx@126.com -1- [2-3] 肝、降血糖、骨损伤修复等作用 。 菟丝子的化学成分种类较多,有黄酮类、多糖、香豆精、胆甾醇、有机酸等,在这些 成分中,绿原酸具有显著的清热解毒、抗菌消炎的作用,对-香豆素具有抗菌抗癌的功 效,而金丝桃苷可抗心脑缺血损伤。目前,菟丝子中黄酮类或其他少数成分的含量测定 45 均有报道[5-11],但是绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷同时测定方法未见报道。本研究建立了 高效液相色谱法同时测定菟丝子中绿原酸、对-香豆素和金丝桃苷3种成分的含量,为有效的 控制菟丝子的质量提供依据。 1 材料、试剂与仪器 样品来源 50 1.1 本实验收集了 9 个不同地区(天津、内蒙古、陕西、新疆、河南、山西、重庆、云南和 上海)的药房的正品菟丝子样品,经天津中医药大学马林教授鉴定为菟丝子(Cuscuta chinensis Lam)。 仪器 1.2 美国 Agilent 1100 Series 液相色谱仪(Agilent 二元泵,Agilent 紫外检测器,G1312A 自 55 动进样器,Agilent1100 色谱工作站);BP121S 万分之一天平(德国赛托利斯公司);XW-80A 微型涡旋混合仪(上海沪西仪器厂有限公司);KQ-250E 型超声波清洗器(昆山市超声仪 器有限公司);TDL-5-B 型台式低速离心机(湖南星科科学仪器有限公司);电热真空干燥 箱(天津市天宇实验仪器有限公司);MODEL2-16 高速离心机(TOMOS);202-O 型台式 干燥箱(北京市永光明医疗仪器厂)。 60 试剂 1.3 甲醇为色谱纯(康科德),水为超纯水(Milli-Q),甲酸(Tedia)。绿原酸购自中国药品 生物制品检定所,金丝桃苷购自天津市药品生物制品检定所,对-香豆酸购自成都曼斯特生 物科技有限公司。 2 实验方法 65 2.1 色谱条件 色谱柱:依利特 ODS C18(4.6 mm×200 mm,5μ m);流动相:A:甲醇;B:0.05%甲酸 水溶液;梯度洗脱程序:0-15 min, 5% -30%A,15-45min,30%-60% A,平衡 5 分钟;流 速:1 mL/min;检测波长:360 nm;进样量:10μ L;柱温:25?。 2.2 供试品溶液的制备 70 精密称取干燥的菟丝子药材粉末(过 80 目筛) 0.10g,精密称定,置磨口三角瓶中,加 10 mL 50%甲醇,密塞,称重,超声处理 30 min,冷却,静置,称重,补足减失的重量,作为供试 品溶液。 2.3 对照品溶液的制备 分别取绿原酸、对-香豆酸和金丝桃苷对照品适量于容量瓶,精密称定,用 50%甲醇配成 75 不同浓度的对照品母液,涡旋,并于 4?保存。 -2- 3 结果及讨论 样品提取条件的优化 3.1 本研究考察了不同的提取方法(超声、加热回流),结果表明,50%甲醇超声提取的三种成 80 分含量较高,因此,选择 50%甲醇超声 30min 为样品提取条件。 色谱条件的优化 3.2 在流动相系统的选择中,分别以甲醇-水、甲醇-0.05%甲酸等不同体积分数、不同比例 的流动相系统进行等度和梯度洗脱实验。结果表明,用甲醇-0.05%甲酸进行梯度洗脱为佳, 加入一定比例的甲酸,能够改善各峰间的分离状况和峰形;使用梯度洗脱,可缩短样品分析 85 时间,保证基线平稳,有利于被检测物的分析。 方法学考察 3.3 线性关系的考察 3.3.1 分别准确称取对照品储备液适量,用甲醇稀释,制得绿原酸,对-香豆酸和金丝桃苷的 混合对照品溶液,并逐级稀释成一系列不同浓度的对照品溶液,按上述色谱条件测定,以对 90 照品浓度(x)为横坐标,峰面积(y)为纵坐标绘制标准曲线并进行回归计算。结果表明,绿原 酸,对-香豆酸和金丝桃苷的标准曲线分别为 y=2000.9x+11850(r=0.9993)、y=1929.9x+1418.3 (r=0.9991)、y=5016.1x+29812(r=0.9991),线性范围分别为 2.00-100、0.50-50 和 6.25-100 μ g/mL。 精密度实验 95 3.3.2 取同一供试品溶液,连续进样 6 次,测定其浓度,计算相对标准偏差。结果表明,绿原 酸、对-香豆酸和金丝桃苷的 R.S.D.分别为 2.4%、3.0%和 1.0%,表明进样和仪器的精密度良 好。 稳定性实验 3.3.3 取同一供试品溶液,室温放置,分别于 0、2、4、6、8、12 h 进样,测定其浓度,计算 100 相对标准偏差。结果表明,绿原酸,对-香豆酸和金丝桃苷峰面积的 R.S.D.分别为 2.4%、2.9% 和 2.3%,均小于 3%,表明供试品溶液室温放置 12 h 比较稳定。 重复性实验 3.3.4 取同一批样品,平行制备 6 份供试品溶液,测定其浓度,计算相对标准偏差。结果表明, 105 绿原酸,金丝桃苷和对-香豆酸的 R.S.D.分别为 2.2%、3.0%和 3.0%,表明方法重复性好。 加样回收率试验 3.3.5 取已知含量的药材粉末 6 份,约 0.05 g,精密称定,分别加入适量绿原酸、金丝桃苷和 对-香豆酸对照品,供试品溶液制备方法制备,并依法测定,计算回收率。结果表明,绿原 酸,对-香豆酸和金丝桃苷的平均回收率分别为 100%、102%、102%,其 R.S.D.分别为 3.2%、 110 1.7%和 3.1%,结果表明绿原酸,对-香豆酸和金丝桃苷的提取方法可行。 -3- 样品测定 3.4 分别吸取对照品溶液和供试品溶液各 10 μ L,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件 测定,对照品和菟丝子样品的色谱图见图 1,可知在该色谱条件下,被测化合物分离度良好, 无杂质峰干扰,可用于不同产地样品分析。不同购买地的菟丝子样品中绿原酸,金丝桃苷和 115 对-香豆酸含量测定结果见表 1,从表中可知不同地区药店菟子丝质量存在较大差异,绿原 酸含量在 0.06%-0.43%之间,对-香豆酸在 0.02%-0.56%之间,金丝桃苷在 0.10%-1.07%之间。 图1 菟丝子样品HPLC色谱图及对照品的HPLC色谱图 120 1 绿原酸,2 对-香豆酸, 3 金丝桃苷 Fig.1. Typical chromatograms: (A) Mixed authentic standards, (B) Sample of Cuscuta chinensis Lam. (1= chlorogenic acid, 2= p-coumarin, 3= hyperin) 表 1. 绿原酸、金丝桃苷和对-香豆酸含量(%) 125 Contents of chlorogenic acid, p-coumarin and hyperin of Cuscuta chinensis Lam from different places Tab. 1 地区 绿原酸(%) 对-香豆酸(%) 金丝桃苷(%) 天津 0.06 0.02 0.10 内蒙古 0.31 0.12 0.36 陕西 0.18 0.29 0.52 新疆 0.43 0.14 1.07 河南 0.11 0.04 0.25 山西 0.16 0.06 0.30 -4- 重庆 0.43 0.56 0.79 云南 0.19 0.07 0.30 上海 0.13 0.05 0.23 4 结论 本文建立了一种简单、稳定、重复性好、可靠的 HPLC 同时测定菟丝子中三种化学成分 130 绿原酸,金丝桃苷和对-香豆酸含量的方法,能够用于菟丝子质量评价,为其质量控制提供了 新的研究方法。 [参考文献] (References) [1] 中华人民共和国卫生部药典委员会编. 中华人民共和国药典第一部[M]. 北京: 化学工业出版社, 2010 [2] 中国植物志编辑委员会. 中国植物志[M]. 北京: 科学出版社, 1979,64(1):143-152. [3] 王焕江,赵金娟,刘金贤,王磊,林建强,林慧彬. 菟丝子的药理作用及其开发前景[J]. 中医药学报, 135 2012,06:123-125. [4] 张兴. 时珍国药研究[J]. 1996, 7(2): 67-68. [5] 孔伶俐, 崔青娟, 伊惠贤. HPLC 测定菟丝子中槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量[J]. 中草药, 2004, 35(7):827-828 [6] 郑一敏, 胥秀英, 杨艳红, 傅善权. HPLC 测定菟丝子中金丝桃苷与槲皮苷的含量[J]. 华西药学杂 140 20(3):261-262. 志, 2005, [7] 林慧彬, 谷延杰, 林建强, 林建群, 孙东和, 李岩 . HPLC 法测定山东 4 种菟丝子槲皮素、 山萘酚的含量[J]. 中成药, 2003, 25(8):649-651. [8] 聂新华. 高效液相色谱法测定菟丝子中金丝桃苷的含量[J]. 中国实验方剂学杂志, 2006, 12(9): 13-14. 志,2010,22(10):886-893 145 [9] 朱丽华, 蒋国强, 杨水新. 高效液相色谱法测定菟丝子中芦丁、槲皮素及山奈酚的含量 [J]. 浙江中 医学院学报, 2001, 25(8): 65-66. [10] Ye M, Yan Y N, Guo D A. Characterization of phenolic compounds in the Chinese herbal drug Tu-Si-Zi by liquid chromatography coupled to electrospray ionizationmass spectrometry[J]. RapidCommun.Mass Spectrom. 2005, 19: 1469-1484. 150 [11] Zheng Y M, Xu X Y, Yang Y H, et al. Determination of hyperoside and quercitrin in the seeds of Cuscuta chinensis. By HPLC[J]. West China JPharm Sci, 2005, 20(3): 261-262. -5-
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