实验九法鉴定人类性别第一页,共11页实验原理PCR(聚合酶链式反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。1985年,美国PE公司KaryMullis(1993年诺贝尔化学奖)PCR的过程及参数设置:①变性②退火③延伸PCR的主要成分:①模板:双链或单链DNA分子②引物③四种dNTP④TaqDNA聚合酶⑤反应缓冲液:Tris.Cl、KCl、Mg2+DYZ基因位于Y染色体长臂,参与精子的生成。第二页,共11页实验目的1、了解PCR的基本原理,掌握PCR的基本操作技术2、应用PCR方法进行人类性别的鉴定第三页,共11页实验材料人体毛囊细胞。第四页,共11页实验设备与药品1、设备:PCR仪、高速离心机、电泳仪及电泳槽、移液器各型枪头及离心管、凝聚成像系统等。2、药品:PCR各成分、1.5%琼脂糖、1×TAE、溴酚蓝、DNA染料、DNAmark等。第五页,共11页实验步骤一、DNA模板准备取一支1.5ml的EP管,加入50ulddH2O;取两根带毛囊的头发,将毛囊端浸在ddH2O中,盖上EP管盖;100℃煮沸10min后,立即转入0℃冷藏10min;12000离心5min,得上清液放置。第六页,共11页二、PCR扩增体系(50ul体系)5ul模板DNA32.6ulddH2O5ul10×PCRBuffer2ul25mmol/LMgCl22ul引物Y32ul引物Y41uldNTPs0.4ulTaqDNA聚合酶(5U/ul)45×9293.4ul45ul18ul18ul18ul9ul50ul第七页,共11页三、扩增放入PCR仪,设定扩增参数:(1)94℃预变性3min;(2)94℃变性45s,55℃退火45s,72℃延伸1min;35个循环(3)72℃延伸8min;(4)4℃保存。第八页,共11页四、电泳检测取10ul扩增产物,加入溴酚蓝3ul,在1×TAE电泳缓冲液中,用1.5%琼脂糖电泳分析(100V,45min),电泳后在成像系统下观察照相,检查反应产物及长度。第九页,共11页第十页,共11页作业电泳图谱指示本人泳带(道)。第十一页,共11页
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