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细胞污染及处理方法

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细胞污染及处理方法TheStandardizationOfficewasrevisedontheafternoonofDecember13,2020细胞污染及处理方法细胞污染及处理方法总结洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是:无限...

细胞污染及处理方法
TheStandardizationOfficewasrevisedontheafternoonofDecember13,2020细胞污染及处理方法细胞污染及处理方法总结洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,国家 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!细菌污染培养基:颜色发红,液体清亮或浑浊;显微镜下:有黑点或杆状物在到处游走,细胞部分脱落,出现细胞碎片;成像:图一:杆菌污染图二:白色链球菌以下是摘自丁香园的处理方法:.将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。.继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。.继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。.重复步骤3再洗。.重复步骤3再洗。.加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。.加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。.再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。.加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。.24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗..24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。(常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌)若细胞状态极差,尽早处理掉细胞,并找出污染源,对培养箱,生物安全柜,细胞房进行消毒处理。真菌污染培养基:有的培养液清亮,不变色;显微镜下:有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。成像:图三:看上去像白色念珠菌污染处理方法:若为霉菌或者真菌污染,加入两性霉素B清洗和培养,终浓度一般为2.5μg/ml(在30μg/ml时会有细胞毒性)。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。其它操作同细菌。霉菌污染培养基:培养液是清亮的;显微镜下:絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差;成像:处理方法:预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;(原来我们这里也有霉菌感染的,不过后面在培养基里加上了0.5%的大福康(原来的双抗各改为0.25%的青霉素和链霉素)摘自丁香园),效果还可以!你可以试试!!!但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,就要注意操作。霉菌污染多来自空气,所以做实验时说话聊天,或瓶口敞开时间太长,还有培养箱开关频繁是主要原因,还是多找自身原因.支原体污染支原体污染后,不会立即使细胞死亡,可以与细胞长期共存,培养基一般不发生浑浊,细胞无明显变化,外观上给人以正常感觉,实则细胞收到多方面潜在影响,如引起细胞变形,影响DNA合成,抑制细胞生长等。培养基:可能无明显表现;显微镜下:慢慢会使细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生浑浊。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。细胞生长缓慢,或者出现无明显诱因脱落,凋亡,细胞碎片增多,有的甚至只表现为细胞状态日渐不佳。成像:处理方法:采用支原体清除剂,有同学说用泰乐处理支原体污染效果比较好。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/mlTylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话,建议用8ug/ml的浓度。一般处理起来比较复杂,因此多放弃细胞重新培养。黑胶虫污染培养基:可能无明显表现,或液体颜色异样显微镜下:大量黑点原地震动,与细菌污染相鉴别,细胞状态不佳。有的因细胞密度较高,或细胞增殖较快,细胞代谢产物增多,要注意鉴别。成像:处理方法:黑胶虫在科研领域还是很未知的啊。所以没有什么好的应对方法。预防为主!!还是要强调无菌操作啊!!尤其注意血清的质量!这个是主要来源。一般建议用北美血清,这个黑胶虫污染会概率小。原虫污染培养基:培养液可轻微浑浊显微镜下:细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞占优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。成像:处理方法:在操作的过程中,一定要小心操作动作,轻柔缓慢,切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。这个拯救细胞还是主要针对无路可退的时候。污染还是重在预防!!!!!细胞房培养箱每两周更换一次水(高压过的双蒸水),条件允许的每两周可以用酒精擦洗一遍培养箱;地面每两到三天用新洁尔灭拖洗一遍,桌面等同样用新洁尔灭擦洗一遍;每次操作前超净台需用紫外线照射半小时,操作前后需用酒精完全擦拭超净台;超净台的风机不能过大,风机到6-8格,否则也可能能致霉菌污染;用显微镜观察细胞前需用新洁尔灭提前擦拭显微镜及操作台面;枪头,EP管等需定期按时高压;
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