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Establishment and analysis of analytic sensitivity of hepatitis B virus serum markers by Time-resolved Fluoroimmunoassay

 

谭玉华  陈鲜美  卢顺舵  沈  健

 

（广州市丰华生物工程有限公司，广东 广州 510730）

 

摘  要 对乙型肝炎表面抗原和表面抗体定量测定试剂盒（时间分辨荧光免疫分析法）的分析灵敏度进行建立与分析，以便更好的指导临床诊断和进行流行病学研究。通过实验研究，乙型肝炎病毒表面抗原定量 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 试剂盒和表面抗体定量检测试剂盒的检测低限分别为0.0356ng/mL和0.548 mIU/mL，生物检测限分别为0.200 ng/mL和5.00 mIU/mL，功能灵敏度分别为0.200 ng/mL和5.00 mIU/mL，线性范围分别为0.200 ng/mL-300 ng/mL和5.00 mIU/mL-1200 mIU/mL，并达到中国药品生物制品检定所检定要求。时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎病毒定量检测试剂盒具有灵敏度高，线性范围宽，特异性强的特点，已能有效应用于临床体外诊断和流行病学研究。

关键词 时间分辨荧光免疫分析；乙型肝炎；标志物；分析灵敏

 

Establishment and analysis of analytic sensitivity of hepatitis B virus serum markers by Time-resolved Fluoroimmunoassay

TAN Yu-hua,CHEN Xian-mei,LU Shun-duo,et al. Guangzhou Fenghua Bio-engineering Co.,LTD,Guangzhou 510730 China

Abstract To establish and analyse the analytic sensitivity for the quantification kits for hepatitis B virus(HBV) surface antigen(HBsAg) and antibody to HBsAg (anti-HBs),the kits were measured by Time-resolved Fluoroimmunoassay(TRFIA),in order to the better instruction clinical diagnosis and conducts the epidemiology research. Through the study,the lower limit of detection of the quantification kits for HBsAg and anti-HBs for 0.0356ng/mL and 0.548 mIU/mL respectively, the biological limit of detection is 0.200 ng/mL and 5.00 mIU/mL respectively, the function sensitivity is 0.200 ng/mL and 5.00 mIU/mL respectively, the linear scope is 0.200 ng/mL-300 ng/mL and 5.00 mIU/mL-1200 mIU/mL respectively, and passed the examination of the National Institute for Control of Pharmaceutical and Biological Products. The quantification kits for HBV serum markers by TRFIA ,which has the high sensitivity, the wide linear scope,the good specificity,could have the effect to use in the clinical in vitro diagnosis and the epidemiology research.

Key words Time-resolved Fluoroimmunoassay; Hepatitis B virus;Marker;Analytic sensitivity

 

 

乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的检出是乙型肝炎病毒（HBV）感染的金标准。乙型肝炎病毒表面抗体（抗-HBs）是对HBV具有保护性的免疫指标，它的检出有助于乙型肝炎（简称：乙肝）的预防与接种。随着时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）在定量检测HBsAg和抗-HBs中的应用，对HBsAg和抗-HBs的分析灵敏度有了进一步提高，并且定量结果取代了定性 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 ，为临床诊断提供了更多的信息。在实验室，对试剂盒和方法学有必要建立自己的可定量报告的生物检测限或对试剂盒和方法学说明的检测限进行确认[1-2]，以便更好的指导临床的诊断。作者在此对乙型肝炎HBsAg和抗-HBs定量测定试剂盒（时间分辨荧光免疫分析法）的分析灵敏度进行了建立与分析。

1  材料与方法

1.1  材料与仪器  高浓度HBsAg和抗-HBs血清各5.00mL，乙型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒（国药准字S20050108）和表面抗体定量测定试剂盒（国药准字S20050110）（时间分辨荧光免疫分析法），以及DEM-III自动酶标洗板机和FWZ-I振荡仪均由广州市丰华生物工程有限公司提供。“检测HBsAg血清Panel国家参考品”（批准文号：[91]卫生参字0003）和“检测抗-HBs血清Panel国家参考品”（批准文号：[91]卫生参字0004）购于中国药品生物制品检定所。VICTOR2TMD 1420 MULTILABEL COUNTER（时间分辨荧光免疫检测仪）为Wallac产品。

1.2  方法  采用试剂盒0标准品为空白液（BLANK），将高浓度HBsAg和抗-HBs血清加入空白液做系列稀释，组成0.000ng/mL、0.200 ng/mL、0.500 ng/mL、1.00ng/mL、2.00ng/mL和5.00 ng/mL的HBsAg系列检测限品，以及0.000mIU/mL、5.00mIU/mL、10.0mIU/mL、20.0mIU/mL、30.0 mIU/mL和40.0 mIU/mL的抗-HBs系列检测限品。并将高浓度HBsAg和抗-HBs血清分别用空白液按一定比例稀释，各配得线性检测品。各用三批试剂测定“检测HBsAg血清Panel国家参考品”和“检测抗-HBs血清Panel国家参考品”，同时做标准曲线。HBsAg采用双抗体夹心法，抗-HBs采用双抗原夹心法，均按试剂盒说明书严格操作。空白样品做20次批内重复测定；对其它系列检测限品做天间重复测定，共连续做20天。实验均在VICTOR2TMD 1420 MULTILABEL COUNTER上测定荧光值（RF值）。收集数据，按文献[3]的方法分析TRFIA 法HBsAg和抗-HBs定量检测试剂盒的检测低限（LLD）、生物检测限（BLD）、及功能灵敏度（FS），参考文献[4]及血清Panel国家参考品说明书对试剂盒进行检定。

2  结果

2.1  分析灵敏度  空白样品做20次批内重复测定，其它系列检测限品做天间重复测定，共连续做20天。其系列检测限品的RF值检测结果详见表1。

表1 乙型肝炎表面抗原和表面抗体系列检测限品的荧光值检测结果

HBsAg（ng/mL） 0.000  0.200   0.500  1.00   2.00   5.00    抗-HBs（mIU/mL） 0.000   5.00     10.0   20.0    30.0    40.0

荧光值         1633   3348    5631   10012  17291  41064                    1680    5556     8431   15687   21148   30837                1533   3413    5513   10467  17581  39757                    1432    4573     7575   14897   21475   34700                1531   3528    6122    9676  17033  38015                    1513    5524     9817   19904   28048   40068                1491   3564    5682    9863  17343  38165                    1548    6951     8710   19352   28842   37691                1341   3244    5593   10089  17872  43463                    1387    6680     8976   19765   29942   39438                1323   3342    5366   12011  19000  42757                    1507    6364     9398   21100   30173   37480                1368   3390    5216    9788  15650  34988                    1491    4828     8203   14884   21327   30372           &#x